水溶性伊紅Y不同配置法對HE染色效果的影響

摘要：目的 分析伊紅染色液的不同配制方法與染色效果間的關系，旨在探尋最佳染色液配制方法。方法 取膽囊及闌尾石蠟包埋組織蠟塊標本，連續切片，分為兩組，對照組采用常規染色液染色，觀察組采用改良染色液染色。比較染兩組染色效果、染色耗時、染色液使用時間等常規指標。結果 觀察組：將濃鹽酸加入伊紅Y水溶液后，可見鮮紅色絮狀沉淀產生，其干燥物在95%乙醇中具有較好的溶解度，充分溶解后溶液呈橘紅色澄明狀；且鏡下未見沉渣；染色效果較好，著色清晰且細膩，染色耗時較短；染色液保存3個月后仍有較好的染色效果。對照組：將冰醋酸加入伊紅Y水溶液后，溶液顏色由暗紅不透明變為亮紅透明狀，且鏡下可見較多沉渣；染色耗時較長，切片染色效果較差，染色區分不清晰；染色液保存時間約為3個月。結論 改良配制方法具有較好的染色效果，值得實驗室推廣應用。

關鍵詞：HE染色；伊紅；配制方法；效果

常規切片技術為病理技術中的基礎工作，切片質量的高低直接反映了診斷的準確性，也反映了醫院診療水平的高低。HE染色為使用最為廣泛的組織切片染色方法，其操作步驟較多，其中，染色液的配置方法和使用均為影響染色效果的因素，其可對切片染色色澤的穩定性、對比度等產生較大影響，必須進行科學的研究[1-2]。本文著重分析伊紅染色液的配制方法與染色效果間的關系，旨在探尋最佳染色液配制方法。

1 材料和方法

1.1材料及試劑 膽囊及闌尾標本（手術室提供石蠟包埋組織蠟塊）；95%乙醇（國藥集團試劑廠，分析純）；水溶性伊紅Y（化學純，上海善普化工科技有限公司）；其他試劑為實驗室常規試劑，均為分析純。

1.2染色液配制方法 水溶性伊紅Y染色液分別采用常規法和改良法進行配制。常規法：稱取伊紅Y1g，置于250ml燒杯中，加入100ml蒸餾水，充分攪拌使溶解后靜置過夜。采用定性分析濾紙過濾去除殘渣，取濾液備用，使用前加入0.1ml冰醋酸。改良法：稱取伊紅Y1g，置于250ml燒杯中，加入100ml蒸餾水，充分攪拌使溶解后緩緩滴入濃鹽酸2mL，玻璃棒攪拌5min后靜置過夜。采用定性分析濾紙過濾，使用蒸餾水沖洗殘留物2次。殘渣連同濾紙一起放入60℃烘箱干燥4h。將干燥后的殘渣置于500ml燒杯中，加入200ml95%乙醇，充分攪拌使溶解。使用前加用200ml95%乙醇稀釋。

1.3組織切片制備 取膽囊及闌尾石蠟包埋組織蠟塊標本，連續切片，每個組織切20張，共40張，分為兩組，每組膽囊及闌尾切片各10張。染色前制片方法相同，一組采用常規染色液染色，另一組采用改良染色液染色。

1.4結果觀察 染色完成后由兩名高年資病理醫生經顯微鏡（40倍）下觀察染色結果，以染色鮮艷、色澤分明、對比清晰、無沉渣為切片染色效果較好。比較兩組染色液染色耗時、使用時間等常規指標。

2 結果

觀察組：將濃鹽酸加入伊紅Y水溶液后，可見鮮紅色絮狀沉淀產生，其干燥物在95%乙醇中具有較好的溶解度，充分溶解后溶液呈橘紅色澄明狀；且鏡下未見沉渣；染色效果較好，著色清晰且細膩，染色耗時較短；染色液保存3個月后仍有較好的染色效果。對照組：將冰醋酸加入伊紅Y水溶液后，溶液顏色由暗紅不透明變為亮紅透明狀，且鏡下可見較多沉渣；染色耗時較長，切片染色效果較差，染色區分不清晰；染色液保存時間約為3個月。

3 討論

伊紅為人工合成的醌式苯環結構的酸性染料，其外觀為磚紅色或紫紅色的晶體狀物質，為熒光酚酞類衍生物，可見黃綠色熒光。伊紅Y為其中的一種晶體，為與蘇木精配對染色的理想染料。因其具有較好的水溶性可在水中充分離解，離解后的陰離子可與蛋白質的陽離子充分結合，從而對細胞質進行染色。其染色結果為紅色或粉紅色，可與細胞核的藍色染色形成對比，具有染色清晰、便于診斷的優點[3-4]。

傳統伊紅染色液的配制可產生一定的不足，如染色較淺、細胞核與細胞質染色對比不清晰、染色時間較長且較易褪色，染色不穩定等不足，給病理診斷帶來了較大的困難。其原因為細胞質的染色結果與染色液的酸堿度密切相關，只有將染液的pH值調整到細胞質等電點以下即pH<4.7時，方可使細胞質具有較好的染色效果，且可與細胞核著色相區分[5-6]。但若染液pH過低（<3.3）時，胞核與胞質著色也難以分離。因此有學者報道僅當染料酸堿度pH在3.5～4.7時方可取得較好的染色效果[7]。傳統配制方法制得的伊紅染色液酸堿度pH很難較好的控制在3.5～4.7，不利于細胞質的著色，明顯降低了染料的使用性能及使用效率[8-9]。

本文中，筆者經過試驗，通過將水溶性伊紅Y水解后的殘渣連同濾紙一起放入烘箱干燥，將干燥后的殘渣使用95%乙醇充分溶解，增加了伊紅的溶解度，保證了伊紅染液的穩定性，經與常規配制方法比較，改良配制方法具有較好的染色效果，值得實驗室推廣應用。

參考文獻：

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編輯/蘇小梅