Dkk—1干預對兔膝骨關節炎軟骨細胞修復的影響

摘要：目的 探討Dkk-1干預對兔膝骨關節炎軟骨細胞修復的影響。方法 取2周齡新西蘭大耳兔60只，隨機分為空白對照組、模型組和DKK-1組各20只，空白對照組、模型組關節腔內均注射生理鹽水，DKK-1組關節腔內注射純化DKK-1，1個月后取各組兔子膝關節軟骨細胞進行檢測，觀標本24h后行甲苯胺藍化學染色的相關指標變化。結果 三組軟骨大體形態按 Mankin's評分比較，有顯著性差異（P<0.01），三組HE染色病理學觀察按Mankin's評分空白對照組與模型組、模型組與DKK-1組間比較，差異均有顯著意義（P<0.01）。結論 DKK-1干預可使兔子的軟骨細胞得到部分修復、凋亡及壞死減少，骨性關節炎的到控制并好轉，對骨性關節炎有積極的治療作用。

關鍵詞：骨關節炎；軟骨細胞；修復

骨關節炎（osteoarthritis，OA）是一種以關節軟骨降解、滑膜炎癥為特征的退行性關節疾病，尤以膝關節最易受累，一般20歲左右病情即可進入潛伏期[1，2]，此時大多數無癥狀且不易被發現，隨著年齡的增加病情逐漸嚴重，女性發病率大于男性，隨著生活水平的提高，骨關節炎的發病率呈逐年上升的趨勢，有文獻報道，滑膜的炎癥反應參與了OA的發生發展過程，Dkk-1在滑膜炎癥和軟骨損傷過程中發揮重要作用的細胞因子，本文對此進行了研究，具體情況如下：

1資料與方法

1.1一般資料 清潔級2周齡新西蘭大耳兔60只，隨機分為空白對照組、模型組和DKK-1組各20只。

1.2方法 空白對照組、模型組關節腔內均注射生理鹽水，DKK-1組關節腔內注射純化DKK-1，注射后的兔子飼養1個月后殺死，在無菌條件下截取膝關節，從顯微鏡下軟骨細胞的修復、凋亡、壞死等方面評估DKK-1對于兔膝關節炎的干預效果，并切取左膝關節股骨內側髁軟骨，10%中性甲醛溶液固定后，石蠟包埋、切片，作HE染色光鏡觀察軟骨細胞形態。

1.3療效觀察 按Mankin's骨關節病組織分類方法對各組兔子軟骨進行評分：①軟骨結構光整如常：正常0 分，表面不規則裂隙1 分，裂隙深達移行層2分，裂隙深達輻射層3分；②軟骨細胞數量及排列：正常0分，數量彌漫性增多，排列稍亂層次清楚1分，出現大量簇集樣細胞團，排列明顯不規則層次紊亂2分，數量明顯減少，排列嚴重紊亂3分。

1.4統計學方法

2結果

2.1三組軟骨大體形態觀察結果 空白對照組無明顯關節積液，軟骨面顏色問為藍白色，外觀光滑，沒有裂紋，模型組有大面積的關節積液，顏色為灰黃色，顏色暗沉，關節面粗糙， 有效面積的糜爛，DKK-1組部分動物出現關節積液及滑膜增生，關節面略粗糙，沒有糜爛，DKK-1組與模型組按 Mankin's評分比較軟骨結構，有顯著性差異（P<0.01）。

2.2 HE染色病理學觀察 空白對照組軟骨表面光滑，軟骨層厚薄均勻，軟骨細胞規格相同，排列整齊，HE染色均勻，無基質失染，模型組示軟骨表層出現潰爛缺失，軟骨層厚度明顯變薄，軟骨細胞大量減少，排列紊亂，HE染色弱，偶有基質失染，DKK-1組軟骨表面較規則，裂隙少，軟骨細胞排列較整齊，軟骨層厚度較模型組厚，軟骨細胞數較模型組明顯增多，HE染色弱，按Mankin's評分空白對照組與模型組、模型組與DKK-1組間比較，差異均有顯著意義（P<0.01）。

3結論

骨關節炎是一種慢性關節病變，女性的發病率大于男性，在風濕性疾病中，關節的病理變化主要有兩種基本形式，一種是進行性的骨和關節的破壞而導致的關節失去功能，這種主要體現在類風濕性關節炎（RA）中[3，4]，另一種的變化跟第一種完全不同，是以新骨形成為主要特征，在最初的破壞性改變后緊接著有骨贅的生成，骨關節炎就是其中一種代表，骨關節炎的發病原因及機制非常復雜，但是多數研究均表明，Wnt/β-catenin信號通路在骨關節炎病理過程中起到了中心作用，而作為該通路抑制因子的Dkk-1是骨關節炎發病的關鍵因子之一，Dickkopf-1（DKK-1）是一種分泌型糖蛋白，研究表明DKK-1在抑制Wnt經典信號傳導通路方面起到決定作用，而Wnt經典信號通路與許多骨疾病有密切聯系，DKK-1是Glinka于1998首次在兩棲動物非洲蟾餘胚胎細胞內被發現，其位于10號染色體lOqlI.2，其編碼的分泌性糖蛋白由266個氨基酸構成，Lane等通過檢測具有影像學的髖關節炎（RHOA）的試驗組以及同樣數量的沒有RHOA的對照組中的血清DKK-1水平，發現高水平的DKK-1血清水平與RHOA進展減輕相關，如果這項研究被大樣本的試驗所證實，那么DKK-1可能會成為骨關節炎預后的評判標志之一，本文通過動物實驗，發現三組軟骨大體形態按 Mankin's評分比較，有顯著性差異（P<0.01），三組HE染色病理學觀察按Mankin's評分空白對照組與模型組、模型組與DKK-1組間比較，差異均有顯著意義（P<0.01）。提示DKK-1與動物實驗模型中骨關節炎的進展兩者之間存在相關聯系，DKK-1干預可使兔子的軟骨細胞得到部分修復、凋亡及壞死減少，骨性關節炎的到控制并好轉，對骨性關節炎有積極的治療作用。

參考文獻：

[1]高寧陽，曹月龍，劉婷，等.Wnt信號通路與骨關節炎[J].中國骨傷，2010，23（4）：320-323.

[2]王新東，張前德，紀偉.痛痹方血清對體外培養乳兔關節軟骨細胞增殖和MMP-3與TIMP-1的影響[J].上海中醫藥雜志，2009，40（6）：64-65.

[3]張志奇，廖成明，傅明.骨關節炎信號通路及其治療靶點[J].國際骨科學雜志，2009，29（5）：324-326.

[4]馬瑩瑩.wnt信號通路與RA的骨質代謝[J].中國免疫學雜志，2010，26（12）：1143-1145.

編輯/申磊