AU5800全自動生化分析儀檢測降鈣素原的方法學評價

摘要：目的 在AU5800全自動生化分析儀上用免疫透射比濁法檢測降鈣素原（PCT）進行方法學評價。

關鍵詞：降鈣素原；免疫比濁法；方法學評價；免疫熒光法

降鈣素原（Procalcitonin PCT）在臨床主要應用于感染性疾病的鑒別[1]，是診斷血行感染、菌血癥、敗血癥的一個較好指標[2-3]。目前PCT的檢測方法主要有放射免疫法、雙抗體夾心法、膠體金法、免疫熒光法、免疫透射比濁法等。本研究選用國產免疫透射比濁法，具有快速、簡便，且價格相對較低廉的特點。根據美國臨床和實驗室標準化協會9CLSI）和醫學實驗室認可標準（ISO15189）對實驗室質量的要求[4]，實驗室對檢測系統（儀器、試劑、校準品等）必需進行性能驗證[5]。因此，實驗室需要對廠商聲明的主要分析性能進行驗證。本文對AU5800檢測系統測定降鈣素原（PCT）進行精密度、線性范圍、參考區間等指標的方法學評價，再與酶免疫熒光法檢測結果進行比對，觀察結果相關性，以此來評價該檢測方法在臨床上的價值。

1 資料

1.1儀器 貝克曼AU5800全自動生化分析儀，梅里埃全自動熒光分析儀。

1.2試劑

1.2.1安徽大千生物工程有限公司生產的降鈣素原測定試劑盒（免疫透射比濁法）（批號085813），標準品（批號084113）和質控品（批號084213）。

1.2.2梅里埃診斷產品（上海）有限公司進口的降鈣素原測定試劑盒（酶免疫熒光法）（批號1002326640），校準品（批號1057790）和質控品（批號1057880）。

1.3 標本 患者標本為2013年10～11月實驗室接收的67例臨床送檢標本。酶免疫熒光法隨時檢測送檢標本，剩余血清-80℃保存用于免疫比濁法測試（一次性完成）。正常人群均為健康體檢者，年齡16～77歲，選擇血常規、CRP正常，即無急、慢性炎癥的體檢合格標本20例。

2 方法

2.1免疫透射比濁法 樣品中的PCT與試劑中的PCT抗體發生抗原-抗體反應，形成復合物，從而引起透光度的減低，在一定范圍內與樣本中的PCT的量呈線性相關。

1.2酶免疫熒光法 結合一步免疫測定夾心法和最終熒光檢測來進行測定。

2.3 精密度評價：按照CLSI EP15-A2，取2個濃度水平質控品，5d實驗，每天做一批，每批每個水平3次重復測定，計算批內精密度和批間精密度的均值、標準差和變異系數。

2.4 線性評價

2.5參考區間評價

2.6相關性評價 通過67例不同病例分別用酶免疫熒光法和免疫透射比濁法測定，比較兩者的相關性。

2.7統計學分析 實驗數據采用SPSS 13.0軟件和Microsoft Excel 2000軟件進行統計分析。

3 實驗結果

3.1 PCT精密度結果 精密度評價結果符合廠家聲明的批內精密度CV≤8.0%、批間精密度CV≤15.0%。該檢測系統的批內精密度和批間精密度均滿足檢測要求（見表1）。

3.2 線性結果

3.3參考區間的驗證

3.4相關性實驗

圖2 免疫比濁法和免疫熒光法檢測PCT結果比對

3 討論

根據醫學實驗室認可標準（ISO15189）對實驗室質量的要求，實驗室對檢測系統必需進行驗證。對試劑驗證包括：精密度、線性、準確度和參考范圍等[6]。

精密度評價按照CLSI EP15-A2文件進行，實驗數據顯示在AU5800全自動生化分析儀上PCT測定的精密度達到了廠家的檢測聲明，批內和批間精密度分別小于8%和15%。線性評價即分析測量范圍評價根據EP6-A文件，采用簡便的平均斜率法。在AU5800全自動生化分析儀上PCT的濃度在0-58.8ng/mL范圍內具有良好線性關系，由于PCT達到80ng/mL的血清標本難以獲得，最高檢測限58.8ng/mL偏低于廠家的最高測定值，有待于進一步驗證。參考區間的驗證參考NCCLSC28-A2文件，選擇20份體檢合格的健康人血清標本全部通過驗證。與法國梅里埃診斷產品（上海）有限公司進口的降鈣素原測定試劑盒（酶免疫熒光法）進行相關性實驗，表明PCT免疫比濁法結果同樣可靠（n=67，R2=0.9607）。

目前，檢測PCT的方法很多[7]。傳統的放射免疫法敏感性較高，但檢測時間較長，且有放射性元素污染，使用受限；膠體金法為半定量法，不依賴儀器，操作簡便快速，但敏感性低，只能作為臨床篩查；免疫發光法[8]具有敏感度高、特異性強等特點，但是成本昂貴，不利于臨床推廣。免疫比濁法簡便、快捷，適用于波長包括600nm的各種生化分析儀，可滿足臨床急診及批量檢測的需要；而且成本較低，可以大大減低患者的檢測費用。

綜上所述，免疫比濁法檢測PCT的各項性能指標進行驗證和評價，均能滿足臨床檢測的要求，具有良好的發展前景。

參考文獻：

[1]楊濱，康梅.降鈣素原在細菌感染疾病診斷及治療中的應用[J].現代預防醫學，2009，36（3）：596-597.

[2]Muller F，Christ-Crain M，Bregenzer T，et al.Procalcitonin levels predict bacteremia in patients with community-acquired pneumonia：a prospective cohort trial[J].Chest，2010，138（1）：121-129.

[3]Van Nieuwkoop C，Bonten TN，van't Wout JW，et al.Procalcitonin reflects bacteremia and bacterial load in urosepsis syndrome：prospective observational study[J].Crit Care，2010，14（6）：206.

[4]魏昊，叢玉隆.醫學實驗室質量管理與認可指南[M].北京；中國計量出版社，2004：59-75.

[5]莊俊華.臨床生化檢驗技術[M].北京：人民衛生出版社，2009.

[6]楊有業，張秀明.臨床檢驗方法學評價[M].北京：人民衛生出版社，2008.

[7]張國富，師偉.降鈣素原的檢測及應用[J].實用醫技雜志，2012.19（9）：947-948.

[8]孫麗萍，伏瑾，胡鳳華，等.免疫色譜法與發光免疫分析法測定血清降鈣素原[J].中華醫學研究雜志，2007.7（2）108-110.編輯/蘇小梅