菌糠用作菌劑吸附劑的初步探索*

劉冬華，伍善東，肖 蕾，孔利華

（湖南省微生物研究院植保室，湖南 長沙 410009）

〈生理生化〉

菌糠用作菌劑吸附劑的初步探索*

劉冬華，伍善東**，肖 蕾，孔利華

（湖南省微生物研究院植保室，湖南 長沙 410009）

為了獲得適合于解淀粉芽孢桿菌4-3菌液的吸附劑，分別選用麥麩、草炭、菌糠吸附解淀粉芽孢桿菌4-3發酵菌液，進行了常溫下的保藏試驗。結果表明，以菌糠作為吸附劑保藏效果最好，保藏14個月時，處理4的活菌數最多，為6.5×108CFU·mL-1，草炭次之，麥麩最差。

菌糠；吸附劑；保藏

菌糠（fungus chaff）是在食用菌生產過程中產生的一類廢棄物。它是由食用菌菌絲在培養料中充分生長產生子實體，在子實體采收完后遺留下來的培養料殘余，故而又稱之為菇渣 （mushroom residue）。隨著食用菌工廠化栽培的發展，產生大量菌糠，對廢棄菌渣的再利用研究已成為近年研究熱點。如李碧瓊等[1]利用廢菌渣栽培姬松茸；談峰[2]利用木腐菌菌糠栽培雙孢蘑菇；張丕奇等[3]利用黑木耳菌渣栽培黑木耳；劉明廣等[4]利用杏鮑菇菌渣作為有機肥栽培雪菜；秦翠靜等[5]在飼料中應用菌糠做為反芻動物的粗飼料；李勝杰等[6-7]利用蘆筍桿菌渣作為有機肥栽培黃瓜和辣椒。本文分別選用菌糠、草炭和麥麩做為菌劑的吸附劑，比較了菌糠、草炭和麥麩的保藏效果，其中以菌糠作為吸附劑保藏效果最好，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）4-3，為從油菜中分離的內生菌，保藏的編號為CCTCC

1.2 培養基配方及其培養條件

培養基配方：甘露醇1.8 g、胰蛋白胨1.6 g、NaCl 0.4 g、磷酸二氫鉀0.4 g、硫酸鎂0.3 g、1%鉬酸鈉溶液0.4 mL、1%的檸檬酸鐵溶液0.5 mL、1%硫酸錳溶液0.2 mL，500 mL三角瓶裝量100 mL，pH7.2。培養溫度32℃，轉速220 r·min-1。

1.3 吸附劑的處理

將麥麩、草炭、菌糠烘干，粉碎后過40目篩。將3種吸附劑分別稱取200 g分裝于聚乙烯塑料袋中，每種9袋，用套環封蓋后于126℃滅菌60 min。每次滅菌后需將袋中可能結塊的內容物充分拍碎后再進行下一次滅菌。經反復滅菌5次后將袋內吸附劑充分拍勻后備用。

1.4 吸附菌液后的保藏和活菌計數

將發酵好的解淀粉芽孢桿菌4-3菌液，經活菌計數為2.60×109，分別按以下處理加入菌液，每個樣品重復3次，用封口機密封后，將菌劑充分拍勻，常溫條件下保藏。

處理1：草炭200 g、菌液100 mL；處理2：草炭200 g、菌液150 mL；處理3：草炭200 g、菌液200 mL；處理4：菌糠200 g、菌液100 mL；處理5：菌糠200 g、菌液150 mL；處理6：菌糠200 g、菌液200 mL；處理7：麥麩200 g、菌液100 mL；處理8：麥麩200 g、菌液150 mL；處理9：麥麩200 g、菌液200 mL。

將做好的各個菌液吸附劑樣品，任意三選一剪開袋口，用接種鏟取出，準確稱取1.00 g至放了50粒玻璃珠的100 mL無菌水三角瓶中，200 r·min-1振蕩30 min，吸取振蕩好的菌液0.5 mL至4.5 mL無菌水中進行稀釋，稀釋至10-9，每次吸取前均將稀釋菌液在振蕩器上振蕩1 min，隨后從10-7、10-8、10-9各吸取0.5 mL稀釋菌液于滅過菌的平皿中，每平行3皿，然后加入20 mL左右滅菌培養基（約45℃），充分搖勻，待其完全冷卻后，將平皿倒置于28℃恒溫箱中培養3 d～4 d，計數活菌數。每間隔1個月取樣1次進行活菌計數。

1.5 保藏菌液吸附劑水分含量的測定

將保藏的各個菌液吸附劑樣品，各處理隨機選1袋，剪開袋口，用滅菌的接種鏟取出樣品，準確稱取1.0 g～2.0 g樣品到干凈平皿中，編號，將取出的樣品置于105℃電熱恒溫干燥箱中烘干至恒重，準確稱重并記錄，取完樣品后馬上將保藏樣品封口，重復取樣2次并記錄結果。

2 結果與分析

2.1 吸附菌液后的保藏和活菌計數

各種菌液吸附劑樣品在各保藏時期的活菌計數檢測實驗結果見表1。

各處理在常溫陰涼處保藏的前3個月，菌劑菌數呈緩慢增加狀態，在保藏3個月時達到峰值，其中以處理5的活菌數最多，為127.0×108CFU·mL-1，隨著保藏時間的增加，各處理活菌數逐漸減少。保藏5個月時，處理 4的活菌數最多，為9.6×108CFU·mL-1；當保藏14個月時，處理4的活菌數最多，為6.5×108CFU·mL-1，當菌劑水分含量越低時，則菌劑菌數變化趨勢越平穩。

表1 各處理不同保藏時間的活菌數Tab.1 Number of viable bacteria in the different treatments and preservation time

在菌劑的保藏過程中，活菌計數時顯示麥麩最容易受到霉菌污染，菌糠則易受細菌類雜菌污染（原因不詳）。在保藏14個月時，以麥麩作為吸附劑的處理7～處理9，因為霉菌太多而沒有進行活菌計數。

解淀粉芽孢桿菌4-3發酵菌液分別經菌糠、草炭和麥麩這三種吸附劑吸附后，經過14個月的保藏試驗，進行綜合評價后確定菌糠做為吸附劑的保藏效果最好，草炭次之，麥麩最差，菌糠用作解淀粉芽孢桿菌4-3的吸附劑是完全可行的。

2.2 各處理水分含量的測定

各處理水分含量的差異除了由添加的菌液量不同造成的，還可能是由于封口的套環蓋留有一小口，具一定的透氣性，在滅菌時有蒸汽進入造成。結果顯示麥麩最容易吸水，菌糠次之，草炭最不易吸水，各處理水分含量見表2。

菌劑的含水量（菌液添加量）與菌數的變化呈現含水量越少菌數變化越穩定的趨勢。可以在保證菌劑活菌數量的前提下，盡可能降低菌劑含水量，會更有利于菌劑的保藏。

表2 各處理的水分含量Tab.2 Moisture content of the different treatment

3 討論

試驗結果表明菌糠是1種良好的吸附劑，可以用作菌劑、菌肥吸附劑進行下一步的試驗。

解淀粉芽孢桿菌4-3菌液使用菌糠吸附后，3個處理在常溫保藏14個月后的活菌數與保藏初始時的活菌數變化不大，均可達108CFU·mL-1以上，其中處理4活菌數變化與保藏初始時的活菌數基本相當，說明菌糠作為吸附劑的穩定性很好。吸附劑的穩定性與菌液的添加量（菌劑含水量）密切相關，它們之間的相關性有待于進一步研究。

[1]李碧瓊，陳政明，凌龍振，等.利用廢菌渣栽培姬松茸優良菌株的篩選試驗[J].中國食用菌，2016，35（5）：9-11.

[2]談峰.不同木腐菌菌糠對雙孢蘑菇生長和產量的影響[J].中國食用菌，2016，35（5）：12-16.

[3]張丕奇，戴肖東，韓增華，等.黑木耳菌渣再利用栽培黑木耳試驗[J].食用菌，2016，38（4）：24-25.

[4]劉明廣，陳毛華，丁寅寅，等.杏鮑菇菌渣有機肥栽培雪菜試驗[J].食用菌，2016，38（3）：67-68.

[5]秦翠靜，程書梅，廉紅霞，等.菌糠在飼料中的應用研究[J].食用菌，2016，221（2）：5-6.

[6]李勝杰，魏云輝，胡中娥，等.蘆筍桿菌渣有機肥在黃瓜栽培上的應用效果[J].中國食用菌，2016，35（2）：28-31.

[7]魏云輝，李勝杰，胡中娥，等.富硒蘆筍稈菌渣有機肥在辣椒上的應用研究[J].食用菌，2016，38（2）：79-82.

Study on Fungus Chaff Used as Inoculants Adsorbent

LIU Dong-hua,WU Shan-dong,XIAO Lei,KONG Li-hua
(Hunan Institute of Microbiology,Changsha 410009,China)

In order to obtain the optimal adsorbent of Bacillus amyloliquefaciens 4-3,the wheat bran,peat and mushroom substrate were separately used as adsorbent of B.amyloliquefaciens 4-3,meanwhile,the preservation test was performed at room temperature.The results showed that the best adsorbent was the mushroom substrate in the preservation test,and the viable count of treatment 4 was the best among them,which was 6.5×108CFU·mL-1.The second one was peat and the worst one was wheat bran.

fungus chaff;adsorbent;preservation

S646.9

A

1003-8310（2017）02-0030-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.02.009

湖南省科技計劃項目（2015NK3056）。

劉冬華（1956-），男，本科，副研究員，主要從事植物保護與肥料研究。E-mail:505212109@qq.com

**通信作者：伍善東（1978-），男，本科，工程師，主要從事植物保護與微生物肥料研究。E-mail:1059995305@qq.com

2017-01-23M2014320。