伊菇820及香菇808單孢菌絲體多糖產量比較

2014-12-28 07:54:26范冬茹邢振楠臧海蓮王丹麗張德巖

中國林副特產 2014年6期

范冬茹，邢振楠，臧海蓮，王丹麗，張德巖

（1.伊春林業科學院，黑龍江伊春 153000；2.東北農業大學，哈爾濱 150030）

香菇多糖（Lentinan LNT）是一種β-1，3-葡聚糖，系從擔子菌綱傘菌科真菌香菇子實體中提取分離純化獲得的均一組分的多糖。具有抗腫瘤、抗感染和調節免疫力等作用。傳統香菇多糖的提取方法有水提醇沉法、稀堿浸提法、稀酸浸提法和酶法等，隨著對香菇研究的不斷深入，又出現超濾法、超聲波法以及微波輔助浸提法等。其中微波輔助浸提法具有設備簡單、快速、高效、安全等特點。利用微波強化固液浸取過程是頗具發展潛力的一種新型輔助提取技術。

本實驗利用微波法提取香菇多糖，考察時間對多糖得率的影響，在此基礎上用微波法提取伊菇820及香菇808單孢菌株粗多糖，并測量菌絲體干重，加以比較。

1 材料與方法

1.1 菌種及培養基

伊菇820，香菇808單孢菌株是由伊春林業科學院小興安嶺原生態食用菌研究所自主選育。其中伊菇820是香菇236、香菇808孢子雜交而產生的菌株。

培養基選用CYM培養基：葡萄糖20.0g，蛋白胨2.0g，酵母膏2.0g，MgSO40.5g，K2HPO41.0g，KH2PO40.46g，水1 000mL，pH 自然。

1.2 儀器與設備

AL104精密電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Galanz WD800B型微波爐，佛山市順德區格蘭仕微波爐電器有限公司；KZ-2111KB立式振蕩培養箱，金壇市盛藍儀器制造有限公司；BAO-23A干燥箱，施都凱儀器（上海）有限公司；MBR-304OR冰箱，三洋電機株式公社；SW-CT-1D超凈工作臺，江蘇蘇潔凈化設備有限公司；TDL-5M臺式低率冷凍離心機，湖南凱達科學儀器有限公司。

1.3 研究方法

1.3.1 伊菇820培養條件。在裝液量為500mL的三角瓶中裝200mL的培養液，共制備16瓶。高壓滅菌后，涼至常溫，接種伊菇820，每瓶10個接種點。置于搖床震蕩培養（26℃、160r／min）。培養7d左右至長滿瓶。

1.3.2 菌絲生長量測定方法。經1.3.1方法培養后，4 000r／min、5min離心獲得菌絲體，于70℃恒溫烘干至恒重后稱量。

1.3.3 多糖提取步聚。稱取一定質量的干菌絲，按1∶30的料液比加入蒸餾水并攪拌，然后設定時間、800W微波處理提取香菇多糖。收集濾液，添加乙醇使其終濃度為75%，-4℃醇沉12h后離心（4 000r／min、10min）。取沉淀，70℃烘干即得粗多糖。

1.3.4 微波提取時間梯度實驗。稱取6份干重為2.0g的菌絲體，分別設定微波提取時間為3、5、7、9、11、13min，然后按1.3.3方法提取多糖，計算多糖得率，確定微波最佳提取時間。

1.3.5 伊菇820及香菇808單孢菌株多糖產量比較。制備4組200mL／瓶的CYM培養基，每組3瓶。滅菌兩組接種伊菇820，2組接種香菇808單孢菌株。每瓶10個接種點。置于搖床震蕩培養（26℃、160r／min）。培養7天左右到長滿瓶即可。按1.3.2方法制備干菌絲并測定菌絲生長量。按1.3.3方法提取多糖，微波提取時間采用1.3.4微波提取時間梯度實驗中最佳提取時間。