阿奇霉素對支氣管肺炎患兒CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞的影響

陳淼浦，鄧 力，李 薇，鐘順平東莞市虎門鎮(zhèn)太平人民醫(yī)院兒科，廣東 東莞 53900；廣州市兒童醫(yī)院小兒呼吸科，廣東 廣州 50080

支氣管肺炎是兒科常見的呼吸道疾病，肺炎支原體（MP）是其最為常見的病原體，阿奇霉素是治療該病常見的藥物之一［1］。已有研究表明支氣管肺炎患兒存在免疫紊亂，包括以補(bǔ)體（C）及免疫球蛋白（Ig）為代表的體液免疫紊亂，還包括以CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群為代表的細(xì)胞免疫紊亂［2］。作為CD8+T細(xì)胞的重要一員，CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞既可起到免疫增強(qiáng)作用，又可起到免疫抑制作用，因此被稱為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）[3]。有研究發(fā)現(xiàn)喘息性肺炎患兒的CD8+CD28-Treg降低［4］，但該細(xì)胞在MP感染性支氣管肺炎患兒的表達(dá)如何，阿奇霉素對其是否有作用等，目前均未見相關(guān)研究。為此，本研究在探索該病患兒CD8+CD28-Treg表達(dá)的基礎(chǔ)上，探索阿奇霉素對其作用，并與紅霉素作為對照，過程如下。

1 資料與方法

1.1 患兒資料

選取2012年1月～2014年1月期間我院就診的支氣管肺炎患兒作為觀察對象，年齡0.5～6.5歲，平均3.51±3.03歲，男35例女31例。均經(jīng)血清MP抗體定量檢測確診為MP感染，經(jīng)臨床表現(xiàn)或結(jié)合胸片確診為支氣管肺炎。如患兒合并免疫性疾病則排除。選取同期到院就診的急性上呼吸道感染患兒作為陽性對照組［5］，男37女29例，年齡3.69±3.11歲；以同期健康保健的66名健康兒童作為陰性對照組，男36女30例，年齡3.40±3.02歲。以上3組性別比例及年齡均無統(tǒng)計學(xué)差異。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測

清晨采集以上3組的靜脈血約2 ml，抗凝后采用Ficoll分離獲得外周血單個核細(xì)胞，隨后應(yīng)用尼龍毛柱獲得T淋巴細(xì)胞，再與CD8磁珠（MACS）孵育30 min后進(jìn)行磁珠而分離出CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞。使用BD多色流式細(xì)胞儀檢測CD8+CD28-Treg所占T細(xì)胞總數(shù)的百分比。使用固定穿透劑對胞內(nèi)細(xì)胞因子TGF-β1及IL-10進(jìn)行染色，使用雙激光光源對TGF-β1及IL-10百分含量進(jìn)行檢測[6]。

1.3 PCT及MP-IgM檢測

以上述血清作為標(biāo)本，采用放射免疫法檢測PCT含量（單位為ng/ml），采用ELISA法檢測MP-IgM含量（單位為kU/L）。上述兩種試劑盒均購自南京生物工程研究所，按照試劑盒說明書進(jìn)行檢測［7］。

1.4 治療方法

將以上66例支氣管肺炎患兒分為A組及B組各33例，其中A組男19例女14例，年齡3.52±3.01歲；B組男18例女15例，年齡3.52±3.01歲。A及B組性別比例及年齡同樣無統(tǒng)計學(xué)差異。A組給予阿奇霉素粉針，10 mg/(kg·d)靜脈滴注；B組給予紅霉素，30 mg/(kg·d)［8］。療程5 d。治療第7天采集靜脈血進(jìn)行上述指標(biāo)檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

定量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間的定量資料分析，治療前后的比較采用配對t檢驗，兩組間資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗，采用Pearson法對定量資料間的相關(guān)性進(jìn)行分析。運(yùn)用統(tǒng)計軟件包SPSS15.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理當(dāng)P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義［9］。

2 結(jié)果

2.1 3組兒童CD8+CD28-T細(xì)胞、PCT及MP-IgM含量比較

治療前，急性上感患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β 1、IL-10、PCT及MP-IgM與健康組兒童均無統(tǒng)計學(xué)差異，但支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10顯著低于另外兩組（P＜0.05），而PCT及MP-IGM顯著高于另外兩組（P＜0.05，表1）。

表1 治療前3組兒童CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子、PCT及MP-IGM含量比較(n=66,x±s)

2.2 支氣管肺炎患兒治療前后CD8+CD28-T細(xì)胞、PCT及MP-IgM含量變化

治療前A及B組支氣管肺炎患兒的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IGM均無統(tǒng)計學(xué)差異。治療第7天，A及B組的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β 1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治療后A組CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10均顯著高于B組（P＜0.05），且PCT及MP-IGM顯著低于B組（P＜0.05，表2）。

表2 治療前后A及B組支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、PCT及MP-IGM含量對比(n=33,x±s)

2.3 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果提示CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β 1、IL-10三者均與PCT及MP-IgM呈顯著負(fù)相關(guān)性，其中CD8+CD28-T細(xì)胞及TGF-β1與MP-IGM的相關(guān)性最強(qiáng)（表3）。

表3 CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子與PCT、MP-IGM的相關(guān)性分析

3 討論

MP是一種介于細(xì)菌和病毒之間的可獨(dú)立存活的最小病原微生物［10］。目前多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為MP導(dǎo)致支氣管肺炎的發(fā)病機(jī)制主要有直接侵犯呼吸道與免疫反應(yīng)誘導(dǎo)的間接免疫-病理損傷兩大類型［11］。在參與支氣管肺炎免疫紊亂的T細(xì)胞亞群中，CD8+T細(xì)胞起到重要作用。根據(jù)細(xì)胞膜是否表達(dá)CD28分子，CD8+T細(xì)胞可分為CD8+CD28+殺傷性T細(xì)胞及CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞，后者是維持呼吸道免疫穩(wěn)定的關(guān)鍵因素［12］。與CD4+CD25+Treg類似，CD8+CD28-Treg也分泌TGF-β1及IL-10，后兩者是Treg執(zhí)行免疫抑制的重要細(xì)胞因子［13］。作為大環(huán)內(nèi)酯類，阿奇霉素及紅霉素治療支氣管肺炎的常用藥物［14-18］，但兩者的免疫調(diào)節(jié)效果如何，對CD8+CD28-Treg哪個更顯優(yōu)勢，目前尚缺少探討。

本研究發(fā)現(xiàn)，急性上感患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM與健康組兒童均無統(tǒng)計學(xué)差異，但支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10顯著低于、而PCT及MP-IgM顯著高于急性上感及健康兒童組，其中CD8+CD28-T細(xì)胞亞群降低，與柴少卿[19]報道的一致。以上結(jié)果說明CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM五者在上感及支氣管肺炎存在差異性表達(dá)，同時說明：與上感比較，以上五項對支氣管肺炎診斷有一定的特異性。相關(guān)性分析結(jié)果提示CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10三者均與PCT及MP-IgM呈顯著負(fù)相關(guān)性，其中CD8+CD28-T細(xì)胞及TGF-β1與MP-IgM的相關(guān)性最強(qiáng)，這說明CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10含量越高，則PCT及MP-IgM含量越低，對病情恢復(fù)越有利，間接說明CD8+CD28-T細(xì)胞所起的免疫抑制作用可能是抗炎的藥理學(xué)基礎(chǔ)，其所分泌的TGF-β1及IL-10可能是抑炎的主要細(xì)胞因子，因此以上三者可能是對支氣管肺炎患兒有利的指標(biāo)，而PCT及MP-IgM則說明炎癥程度，是相對不利的指標(biāo)。

治療前兩組支氣管肺炎患兒的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM均無統(tǒng)計學(xué)差異，說明兩組分組具有均衡性及可比性。從治療的反應(yīng)看，治療后A及B組的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治療后A組CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10盡管尚未完全回升至健康組兒童的水平，但均已顯著高于治療前并顯著高于B組，且PCT及MP-IgM已顯著低于B組；而作為對照藥物的紅霉素組，該組患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10較治療前并無統(tǒng)計學(xué)差異，且顯著低于阿奇霉素，說明該藥對此三項指標(biāo)的改善并不明顯，間接提示此三者可能不是阿奇霉素的靶性淋巴細(xì)胞。作為評價感染程度的指標(biāo)，阿奇霉素及紅霉素組患兒的PCT及MP-IgM在治療后均顯著低于治療前，說明兩藥的均可降低支氣管及肺泡內(nèi)炎癥，但結(jié)果提示治療的PCT及MP-IgM以阿奇霉素組下降更為顯著，說明阿奇霉素效果更好，該結(jié)果與朱慶齡[16]報道的具有一致性。

通過本研究筆者認(rèn)為，CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10三者下降是MP感染相關(guān)性支氣管肺炎患兒的重要免疫學(xué)特征，并且與PCT及MP-IgM呈顯著相關(guān)性；阿奇霉素對提高CD8+CD28-T細(xì)胞含量及下調(diào)PCT及MP-IgM的效果均優(yōu)于紅霉素。

［1］黃安鳳,張偉萍.阿奇霉素聯(lián)合克林霉素治療小兒支原體肺炎的臨床研究［J］.河北醫(yī)藥,2014,36(3):369-71.

［2］楊文青,呂曉麗,李銳成,等.實時熒光定量PCR檢測肺炎支原體DNA在小兒肺炎診斷中的應(yīng)用價值［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(4):416-8.

［3］劉春生.CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與白細(xì)胞降低性肺炎病原菌的相關(guān)性［J］.長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013,27(4):253-6.

［4］王素梅,潘同國,楊玉梅.喘息性肺炎患兒外周血CD137和CD28及T細(xì)胞亞群的表達(dá)研究［J］.河北醫(yī)藥,2010,32(19):2678-9.

［5］黃 鶯.匹多莫德聯(lián)合維生素AD滴劑佐治兒童反復(fù)呼吸道感染的療效及對機(jī)體免疫功能的影響［J］.兒科藥學(xué)雜志,2013,19(7):16-9.

［6］李禹兵,侯 蕊,趙銀利.CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在急性白血病中的水平及臨床意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2013,21(11):2561-3.

［7］朱 宏,計雪強(qiáng),繆美華,等.肺炎支原體抗體的定量檢測及臨床意義［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2007,28(9):788-9,792.

［8］金 燕.阿奇霉素與紅霉素治療小兒支原體肺炎的療效觀察及其肺炎支原體對免疫球蛋白、T淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞因子的影響［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2010,26(6):593-4.

［9］袁遠(yuǎn)宏,肖政輝,張 慧,等.膿毒癥急性腎損傷患兒T細(xì)胞亞群變化及臨床意義［J］.兒科藥學(xué)雜志,2013,19(7):1-4.

［10］朱中梁,馬 娟,汪宏良.兩種方法檢測肺炎支原體的對比研究［J］.臨床肺科雜志,2013,18(5):886-8.

［11］石小華.肺炎支原體抗體與熒光定量PCR檢測法的比較［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(5):412-3.

［12］李雅舒,王 莉,陳曉玲.CD8～+CD28～-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的生物學(xué)特性及其與疾病的相關(guān)性研究進(jìn)展［J］.免疫學(xué)雜志,2012,28(8):722-5.

［13］趙曉東.CD4～+CD25～+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與兒科疾病［J］.兒科藥學(xué)雜志,2007,13(4):1-3.

［14］吳風(fēng)棟,胡 勇,陳堅強(qiáng).克拉霉素與阿奇霉素治療小兒支原體肺炎臨床對照觀察［J］.兒科藥學(xué)雜志,2012,18(11):4-6.

［15］曹廷容,楊 宏,雷 琴,等.肺炎支原體感染合并支氣管哮喘患兒血清總IgE及IL-5的檢測及意義［J］.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013,19(2):241-3.

［16］魏 瑋.阿奇霉素連續(xù)和間歇給藥治療支原體肺炎的療效及耐藥性分析［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,30(8):1918-20.

［17］劉迪軍,鄭 彬,蔡保歡,等.中西醫(yī)結(jié)合治療小兒支原體肺炎及細(xì)胞因子變化［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,30(3):626-8.

［18］韓曉華,路素坤,李書秀,等.肺炎支原體23SrRNA基因突變及其所致肺炎的臨床分析［J］.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2011,40(2):162-3.

［19］柴少卿,季 偉.喘息性肺炎患兒外周血中共刺激分子CD28及淋巴細(xì)胞亞群的變化［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,2010,42(12):1425-8.

［20］朱慶齡,楊聲坪,葉新華,等.阿奇霉素與紅霉素治療小兒支原體肺炎的系統(tǒng)評價［J］.兒科藥學(xué)雜志,2013,19(11):10-5.