金華地區509對不良妊娠史夫婦細胞遺傳學分析

金克勤，沈雙雙，徐夏苑，楊姍姍，張俊

（浙江省金華市婦幼保健院產前診斷中心，金華 321000）

近年，不良妊娠如不孕不育、胚胎停育、流產、畸胎或生育畸形兒、死胎等呈現上升趨勢。不良妊娠病因復雜，其中遺傳因素是重要因素之一。本研究對2010年5月至2014年4月在我院就診、有不良妊娠史的509對夫婦的外周血培養染色體檢查結果進行分析，探討染色體異常與不良妊娠的關系，旨在為臨床診療提供一定參考。

一、資料與方法

1.臨床資料：收集2010年5月至2014年4月來我院就診、有不良妊娠史的夫婦509 對（1 018人），其中原發性不孕不育夫婦93對，有流產或死胎史的夫妻332對，有畸胎史的夫妻84對。夫妻雙方表型及智力均無明顯異常，年齡20～45歲。

2.方法：納入標準：（1）原發性不孕不育：育齡夫婦雙方同居1年以上，有正常性生活，未采用任何避孕措施，未成功孕育［1］；（2）流產或死胎史：曾經受孕但因種種原因導致流產、死胎而未獲得存活嬰兒的夫婦；（3）畸胎史：孕育了畸胎或生育異常兒（如畸形、智障兒等）的夫婦。

標本采集及外周血培養：所有患者在知情同意的前提下，夫婦雙方均采用靜脈真空采血方式抽取5ml靜脈血，置于肝素鈉抗凝管內。由經過專業培訓的檢測人員進行操作，將外周血標本于超凈工作臺內接種于外周血培養基（一生駿培養基，由廣州白云山拜迪生物醫藥有限公司提供），接種量為0.4ml。置于37 ℃恒溫培養箱中培養72h，收獲前1.5h加入150μl 10μg／ml的秋水仙素（杭州浩仁生物科技有限公司提供）使染色體停滯在分裂中期。最后收獲細胞、制片、烤片，使用杭州浩仁生物科技有限公司提供的Giemsa染液進行胰酶消化，常規G 顯帶染色后鏡檢，計數20個核型。鏡下繪圖并分析3 個核型。如有嵌合現象則增加計數到100 個核型，分析5 個核型；必要時增加C顯帶分析。使用英國AI染色體圖像分析系統軟件進行染色體核型分析，結果按照人類細胞遺傳學國際命名體制（ISCN2005）［2］標準命名。

二、結果

1.509對有不良妊娠史的夫婦中染色體核型異常59例，異常檢出率為5.80%（59／1 018）。不同臨床表現各類染色體核型異常檢出情況及發生率見表1。

表1 不同臨床表現各類染色體核型異常檢出情況及發生率［n，（%）］

2.59例染色體核型異常與臨床表現見表2。

三、討論

染色體由DNA 和蛋白質組成，是遺傳物質基因的主要載體［3］。人類基因按照嚴格順序排列，各基因之間保持較恒定的毗鄰關系。若染色體出現數目異常或結構畸變，會導致基因增加或缺失從而引起一系列臨床效應［4］。本文通過509對不良妊娠史夫婦染色體核型進行檢測發現，染色體核型異常幾乎可以涉及所有染色體，如1、2、3、5、6、8、9、10、11、13、14、15、16、17、18、20、21、22號染色體及X、Y 性染色體，染色體核型異常的檢出率為5.80%，遠高于一般人群的0.5%［4］，提示染色體核型異?？赡?/p>

是發生不良妊娠的原因之一，并且不同類型的核型異?？梢酝ㄟ^其作用機制引起流產、不孕不育、畸形兒等臨床表現。

表2 59例染色體異常核型與臨床表現

染色體平衡易位在一般人群中的發生率約為1／500［5］，本研究中509對有不良妊娠史的夫婦中存在常染色體易位的17 例，其中平衡易位13 例（1.3%），顯著高于一般人群的發生率，提示存在染色體平衡易位的患者可能更易發生不良妊娠。存在1對染色體平衡易位的攜帶者理論上在減數分裂過程可產生18種類型的配子，與正常配子結合后，可形成18種合子，其中1種正常，1種為平衡易位，其余16種為部分三體或部分缺失，遭到破壞的基因平衡可在臨床上引起流產、胎兒畸形甚至死胎［4］。本研究中檢出羅伯遜易位3例（0.3%），同樣亦顯著高于一般人群的發生率（1／900～1／1 000）［6］。理論上非同源羅伯遜易位可產生6種配子，其中1種正常，1種為攜帶者，其余4種或重復或缺失，導致受精卵發育過程異常出現流產、死胎現象。本研究觀察到的17例常染色體易位中有14例出現流產、死胎史，2例有生育或引產異常兒史，可能與上述染色體核型異常有關；另外1例原發性不孕患者，可能由于涉及多條染色體復雜易位，產生正常卵的概率微乎其微，且同時存在自身子宮發育異常、盆腔異常等諸多因素，臨床表現為原發性不孕。

染色體倒位一般沒有染色體水平可見的遺傳物質增減，因此通常無明顯的表型效應。但本研究中12例常染色體臂間倒位中有5例出現原發性不孕不育，5例有流產或死胎史，2例有畸胎史，提示染色體倒位可能改變基因順序甚至影響子代胚胎的存活。倒位染色體在生殖細胞的減數分裂過程中，可形成特有的倒位環，若倒位環內不發生交換，將形成1個正常配子，1個攜帶倒位染色體的配子；若倒位環中發生1次交換，將形成2種不平衡的配子，其與正常配子結合，形成1種正常染色體和1種倒位染色體，而另外2種則是有部分重復及部分缺失的重組染色體［2，7］。由于重組染色體重復和缺失的片段存在基因差異，導致配子形成障礙或形成畸形的配子，因此本研究中染色體倒位攜帶者，臨床上表現為不同程度的不良妊娠，如不孕不育、流產、畸胎或死胎等。

染色體多態性也稱異態性，通常集中在人類的第1、9、16、D 和G 組以及Y 等染色體上，涉及短臂、次溢痕及Y 染色體長臂遠側端等部位，通常不具有表型效應，不影響個體健康［8］。本研究中17例常染色體多態性異常中，14 例有流產史，2 例畸胎史，1例不育，提示染色體多態性也可能通過某些機制影響人類生殖過程，這可能與異染色質在著絲粒功能維持中起著至關重要的作用有關。異染色質可以加強著絲粒區，確保染色體的分離，使著絲點穩定化，且同源染色體可通過其異染色質區的重復序列在減數分裂時配對，促進沿染色體全長的聯會。異染色質的異?？赡苡绊憸p數分裂時染色體的配對聯會或改變整個減數分裂的時相，造成異常分裂，繼而影響配子的形成，甚至導致最終的妊娠失敗［9］。另外，常染色質經過染色體重排移位到異染色質區或其附近，在異染色質影響下可能導致常染色質的異染色質化，產生斑點位置效應，使其基因表達受到抑制，從而引起一些與生殖相關的基因沉默。這些變異在一定的內、外環境作用下可導致臨床上流產、不育不孕、死胎及其它表現的不良妊娠現象。

性染色體是決定個體雌雄性別的染色體。性染色體的數目增多、結構變異如缺失、重復、倒位、易位等均會導致性染色體畸變，使第二性征發育障礙或異常。本研究中存在性染色體異常的患者中有9例表現為原發性不孕不育，3例流產，1例畸胎史，其中47，XXY 核型約占50%。通常人們認為47，XXY只有1條X 染色體有活性，另外1條X 染色體處于失活狀態［10］，但臨床上該核型患者往往表現為先天性睪丸發育不全，這可能由于X 染色體未完全失活，多余的染色體可以產生劑量效應影響男性生殖器官發育有關［11］，從而導致患者第二性征發育異常，如性器官發育欠佳或臨床表現為無精子癥，導致原發性不育。

綜上所述，染色體異常是不良妊娠發生的重要原因之一。夫妻雙方任何一方存在染色體異常，生育下一代時都可能由于存在染色體重組、互換等，導致流產、不孕不育、生育畸形兒或死胎等現象發生。因此，對有不良妊娠史的夫婦進行細胞遺傳學檢測，有助于病因分析診斷。對染色體異常攜帶者家庭進行孕育指導時，建議及時進行產前診斷，防止染色體異常的患兒出生，以降低出生缺陷，達到優生優育的目的。

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