中藥半枝蓮有效成分的提取及含量測(cè)定

何文涓 俞佳慧

（無錫衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇 無錫 214028）

半枝蓮是一種常用中藥。味辛、苦，性寒，歸脾、肝、腎經(jīng)，具有活血化瘀，清熱解毒之功效，其作用廣泛，通常和其他中藥配伍使用，用于治療慢性乙型肝炎和腫瘤的輔助治療，還可用于治療慢性胃炎、慢性結(jié)腸炎等，其發(fā)揮作用的活性成分主要是多糖、黃酮等[1-2]。本文對(duì)半枝蓮中總多糖、總黃酮的提取進(jìn)行了研究，對(duì)其含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料

1.1 藥品及試劑

半枝蓮藥材，唇形科植物半枝蓮的干燥全草，產(chǎn)地：江蘇。

蘆丁對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。其余試劑均為分析純。

1.2 儀器

TU-1810 紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

2 方法

2.1 總多糖的提取及含量測(cè)定

2.1.1 總多糖的提取[3]

半枝蓮藥材適當(dāng)粉碎，取100g，分別用水200、100、100ml 煎煮3次，每次20min，合并煎液，濃縮至浸膏狀，加75%乙醇靜置過夜，過濾，取沉淀，依次用石油醚、丙酮洗滌，揮干溶劑即得總多糖。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，分別得到總多糖9.5，11.2，10.3g，平均收得率為10.3%。

2.1.2 含量測(cè)定

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取葡萄糖對(duì)照品約100mg，精密稱定，置100ml 量瓶中，加水適量使溶，并加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml 置另一100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為10.56μg/ml，精密吸取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 和1.0ml 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加水至1.0ml，分別加苯酚試液1ml，搖勻，再加硫酸5ml，搖勻，置沸水浴15min，取出迅速冷卻至室溫。同時(shí)取水lml 同法操作，作為空白對(duì)照。在490nm 處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表1、圖1。線性回歸方程為：A=0.0622C-0.004，r=0.9999，在1.056～10.56μg/ml 范圍內(nèi)，吸光度與濃度線性關(guān)系良好。

表1 葡萄糖濃度和吸光度的關(guān)系

圖1 多糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

（2）樣品含量測(cè)定

取總多糖約60mg，精密稱定，置100m 量瓶中，加水適量使溶，并加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml 置另一100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液，精密吸取樣品液lml，按2.1.2（1）項(xiàng)下方法測(cè)定在490nm 波長(zhǎng)處的吸光度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度，并求出多糖含量。3 批提取物中半枝蓮粗多糖的平均含量依次為56.3%，58.6%和54.1%。3 批平均為56.3%。

2.2 總黃酮的提取及測(cè)定

2.2.1 總黃酮的提取[4]

半枝蓮藥材適當(dāng)粉碎，取50g，加入70%乙醇200ml，40℃浸泡3h，每隔15min 攪拌一次。過濾取濾液，殘?jiān)謩e再用70%乙醇100ml 浸泡兩次，合并濾液，濾液減壓濃縮至浸膏狀，烘干即得。提取3 批，分別得干粉5.6，6.2，5.8g，平均得率為11.7%。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：

取蘆丁對(duì)照品約20mg，精密稱定，置50ml 量瓶中，加70%乙醇適量，超聲使溶，加70%乙醇稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為0.4208 mg/ml。精密吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 和1.5ml，分別置于10ml 量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml、10%硝酸鋁溶液0.3ml 以及4%氫氧化鈉溶液4ml，放置10min。測(cè)定在510nm 波長(zhǎng)處的吸光度。結(jié)果見表2，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。進(jìn)線性回歸，得回歸方程：A=0.0117C-0.008，r=0.996，在8.416～63.12μg/ml 的范圍內(nèi)，吸光度與濃度線性關(guān)系良好。

表2 蘆丁濃度和吸光度的關(guān)系

圖2 總黃酮測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.2 樣品測(cè)定

取提取物約150mg，精密稱定，置50ml 量瓶中，加70%乙醇適量，超聲使溶，加70%乙醇稀釋至刻度，作為樣品溶液。精密吸取0.5ml，按照2.2.1 項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法測(cè)定在490nm 波長(zhǎng)處的吸光度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度，并求出總黃酮含量。3 批提取物中半枝蓮總黃酮的平均含量依次為12.4%，13.9%和12.8%。3 批平均為13.0%。

3 討論

多糖和黃酮類化合物具有多種生理活性，是許多中藥發(fā)揮藥理作用的活性成分，因此，從中藥中提取多糖和黃酮類化合物進(jìn)行研究具有重要的意義。本文采用水提醇沉方法從半枝蓮中提取總多糖，方法簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便。提取的平均得率為10.3%，總多糖含量為56.3%，由此可推算出半枝蓮中的總多糖含量為5.8%。另外，采用乙醇提取的方法，從半枝蓮中提取了總黃酮，得率為11.7%，總黃酮含量為13.0%，由此推算出半枝蓮中總黃酮含量為1.52%。

本研究存在的不足是由于是實(shí)驗(yàn)室初試，提取樣品的投料量較少，由于時(shí)間限制，未對(duì)提取條件做進(jìn)一步的優(yōu)化。以后可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化工藝，并進(jìn)行純化，進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

［1］蔡震峰，任鳳蓮，申定珠，等.中草藥半枝蓮的研究進(jìn)展[J].廣州化學(xué)，2006，31(4)：55-60.

［2］王剛，董玫，郭會(huì)燦，等.中藥半枝蓮提取物體外抗腫瘤活性研究[J].河北中醫(yī)，2006，28(9)：701-702.

［3］邢文善，紀(jì)耀華，張彥彤，等.半枝蓮粗多糖的提取及總糖的含量測(cè)定[J].吉林中醫(yī)藥，2005，25(7)：56-57.

［4］袁崇均，王茄，楊紅，等.正交試驗(yàn)發(fā)優(yōu)選半枝蓮提取工藝研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，17(3)：186-188.