在線固相萃取法結合電霧式檢測器測定黃芪及其復方中黃芪甲苷的含量

李效寬等

摘 要 采用在線固相萃取高效液相色譜法，結合電霧式檢測器，建立了快速測定黃芪及其復方中黃芪甲苷的方法。采用Acclaim Polar AdvantageⅡC18（50 mm×4.6 mm， 3 μm）為在線凈化柱，以雙三元液相色譜的右泵作為上樣凈化泵，甲醇水為流動相，梯度洗脫，進行富集和凈化；采用Acclaim C18（150 mm×4.6 mm， 5 μm）3 結果和討論

3.1 提取方法選擇

黃芪甲苷在原藥材中含量較低，而多以黃芪甲苷乙酰化物形式（主要是以其結構中C3位木糖配基上不同位置羥基的乙酰化物）存在于原藥材中，若不經堿水解處理，將乙酰化物轉化成游離的黃芪甲苷形式，往往不能滿足常規檢測要求。因此，很多方法利用其乙酰化物在堿性溶劑中可轉化為黃芪甲苷的性質， 在樣品處理過程中將部分乙酰化物轉化為黃芪甲苷，提高其含量，以滿足檢測要求[ 20]。本實驗考察了甲醇提取結合堿溶液處理的方法，但方法重現性不好。因此，本研究采用一定濃度的KOH甲醇溶液直接進行提取的方法，并對KOH的濃度進行考察，以0.1 mol/L KOH甲醇作為提取溶劑時，黃芪甲苷的提取率較高，且重現性較好。根據文獻[ 5]或標準[ 18]的加熱回流提取方法， 藥材需浸泡12 h，再索氏提取4 h。整個提取時間較長，大大影響了方法的分析效率。加速溶劑萃取又稱快速溶劑萃取法， 是在密閉容器內，在高溫、高壓條件下用溶劑提取樣品，通過增大壓力來提高溶劑的沸點，可以提高目標成分的溶解度；同時，溫度升高可以降低溶劑黏度，有利于溶劑分子向基質擴散，從而提高了目標物的提取效率，在中藥及天然藥物有效成分提取中已有較多應用[ 19]。本實驗采用加速溶劑萃取法對黃芪甲苷進行提取，對加熱溫度、加熱時間、靜態萃取時間以及循環次數等條件進行了考察。最終確定了ASE的提取條件： 加熱溫度為140 ℃，加熱8 min，吹掃體積為60%， 靜態萃取10 min循環3次， 總提取總時間約40 min。比較了本方法與傳統的回流提取方法對目標物的提取轉移率，結果表明， 兩種提取方法的目標物提取率基本一致，但采用ASE提取可以大大加快樣品的提取時間，提高樣品的分析效率。

3.2 在線SPE柱的選擇及條件優化

參考黃芪飲片的標準方法[ 18]，采用NG1型保護柱（苯乙烯與二乙烯苯聚合物）和SolEx HRP（20 mm×2.1 mm）作為SPE柱，兩種SPE柱均以疏水保留作用為主，且對目標物均有較好的保留，但目標物在SPE柱上的峰較寬，且樣品基質中與目標物性質類似的基質干擾成分較多，凈化效果相對較差。Polar advantageⅡC18 柱是一種嵌合有極性基團的C18柱，保留機理與C18不完全一致，且可兼容100%水相，選擇該柱作為在線的SPE柱，能夠去除大量干擾基質，且對目標物有一定粗分效果。同時，選擇甲醇水作為流動相，既可減少目標物轉移過程中所帶來的溶劑效應，又可增加一維凈化和二維分析過程的正交性，提高系統的分離能力，從而可改善方法的專屬性。從圖2可見，黃芪甲苷與其它基質干擾成分分離較好，滿足含量測定要求。

4 結 論

本實驗初步建立了黃芪及其復方制劑中黃芪甲苷的Online SPELCCAD的含量測定方法。本方法具有以下優點： （1）本方法結合SPE凈化和二維分離的特點，去除大量基質干擾的同時，增加了系統的分離能力，減少了色譜峰的重疊；（2）通過閥切換，可以避免污染物進入分析柱，從而延長了分析柱的使用壽命；（3）本方法分析效率高，本方法適用黃芪及其復方制劑中黃芪甲苷的定量。綜上分析，本方法簡便、快速，且自動化程度高、重現性更好，回收率較高，可作為黃芪及其制劑的質量控制方法，推廣應用。

References

1 PAN Fei， FENG YuXiu， ZHANG Ying. World Phytomedicines，1995，10（3）： 110-115

潘 飛， 馮毓秀， 張 穎. 國外醫藥·植物藥分冊， 1995， 10（3）： 110-115

2 YI BingXue， YU ShuQi， ZHANG JinLian， LI ZhiQiang， GONG QianFeng. Journal of JiangXi University of TCM， 2014， 26（2）： 98-100

易炳學， 余書琦， 張金蓮， 李志強， 龔千鋒. 江西中醫藥大學學報， 2014， 26（2）： 98-100

3 YIN LiJun， SUN BoHang. Journal of Shenyang Pharmaceutical University， 2011， 28（5）： 410-416

段立軍， 孫博航. 沈陽藥科大學學報， 2011， 28（5）： 410-416

4 Kitagawa I， Wang H K， Saito M. Chem. Pharm. Bull， 1983， 31（2）： 698-708

5 CHEN HaiMing. Chin. J. Pharm. Anal.， 2007， 27（3）： 426-428

陳海明. 藥物分析雜志， 2007， 27（3）： 426-428

6 DOU YuHong， CUI LiJian， HUANG Yun， LI Qing. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research， 2009， 20（12）： 2963-2964

竇玉紅， 崔力劍， 黃 蕓， 李 清. 時珍國醫國藥， 2009， 20（12）： 2963-2964

7 XIE HeBing， LIU ZhiHui， QIAN Fang. Chin. J. Pharm. Anal.， 2008， 28（4）： 547-549

謝和兵， 劉志輝， 錢 芳. 藥物分析雜志， 2008， 28（4）： 547-549

8 Turner N W， Subrahmanyam S， Piletsky S A. Anal. Chim. Acta， 2009， 632（2）： 168-180

9 Oliveira E D， Brazil J. Chem. Soc.， 2003， 14（2）： 174-182

10 Barceló D， Hennion M. Anal. Chim. Acta， 1995， 318： 1-41

11 Huang W H， Yang J， Zhao J， Wang C Z， Yuan C S， Li S P. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2010， （53）： 906-910

12 Dixon R W， Peterson D S. Anal. Chem.， 2002， 74（13）： 2930-2937

13 Wipe P， Werner S， Twining L A， Kendall C. Chirality， 2007， 19（1）： 5-9

14 Brunelli C， Gorecki T， Zhao Y， Sandra P. CoronaCharged Aerosol Detection in Supercritical Fluid Chromatography for Pharmaceutical Analysis. Anal. Chem.， 2007， 79（6）： 2472-2482

15 Gamache P H， McCarthy R S， Freeto S M， Asa D J， Woodcock M J， Laws K， Cole R O. LC GC Eur.， 2005， 18（6）： 345-354

16 Bai C C， Han S Y， Chai X Y， Jiang Y， Li P， Tu P F. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol.， 2009， 32（2）： 242-260

17 Vertzoni M， Archontaki H， Reppas C. Journal of Lipid Research， 2008，49（12）： 2690-2695

18 Chinese Pharmacopoeia. 2010. VolⅠ： 283

中國藥典， 2010版， 一部： 283

19 CHEN JunHui， YANG BaiJuan， LI WenLong， WANG XiaoRu， LI XianChun， YANG HuangHao. Chinese Journal of Chromatography， 2007， 25（5）： 628-632

陳軍輝， 楊佰娟， 李文龍， 王小如， 黎先春， 楊黃浩. 色譜， 2007， 25（5）： 628-632

20 XIA GuangPing， LIU Peng， HAN YingMei. Journal of Chinese Medicinal Materials， 2008， 31（3）： 385-387

夏廣萍， 劉 鵬， 韓英梅. 中藥材， 2008， 31（3）： 385-387

Determination of Astragaloside IV in Radix Astragli and

Its Preparations by Online SPELiquid Chromatography

with Charged Aerosol Detector

LI XiaoKuan*1， ZHANG YanHai2， FENG TianHui1， YANG YanLing1， JIN Yan2

1（College of Pharmacy SouthCentral University For Nationalities， Wuhan 430074， China）

2（ThermoFisher Scientific Corporation， Shanghai 201205， China）

Abstract A novel method for quantification of astragaloside IV in Radix Astragli was developed by using online SPE liquid chromatography coupled with corona charged aerosol detection（CAD）. The sample solution was loaded into Acclaim Polar AdvantageⅡC18（50 mm×4.6 mm， 3 μm） which was selected as online SPE column. Then the cleaning process was done by using the Right one of dual gradient pumps with Methanolwater as mobile phase. Acclaim C18 （150 mm×4.6 mm， 5 μm） was selected as analytical column with acetonitrilewater as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The eluate containing the target from SPE column was transferred into the analytical column by heartcutting mode. The temperature of nebulizer of corona CAD was set at 30 ℃ and the nitrogen pressure was 241.3 kPa. The baseline separation of astragaloside IV from matrix components has been achieved. There was a good linear correlation in the range of 4.0-80 mg/L for astragaloside IV and the correlation coefficient was 0.9998. The standard addition average recovery of astragaloside IV in Radix Astragli was 97.6%. It has been validated that astragaloside IV in Radix Astragli and its preparations can be quantified rapidly and accurately with this method.

Keywords Astragaloside IV， Online solid phase extraction； Corona chard aerosol detection； Dual liquid chromatography

（Received 31 August 2014； accepted 20 October 2014

謝和兵， 劉志輝， 錢 芳. 藥物分析雜志， 2008， 28（4）： 547-549

8 Turner N W， Subrahmanyam S， Piletsky S A. Anal. Chim. Acta， 2009， 632（2）： 168-180

9 Oliveira E D， Brazil J. Chem. Soc.， 2003， 14（2）： 174-182

10 Barceló D， Hennion M. Anal. Chim. Acta， 1995， 318： 1-41

11 Huang W H， Yang J， Zhao J， Wang C Z， Yuan C S， Li S P. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2010， （53）： 906-910

12 Dixon R W， Peterson D S. Anal. Chem.， 2002， 74（13）： 2930-2937

13 Wipe P， Werner S， Twining L A， Kendall C. Chirality， 2007， 19（1）： 5-9

14 Brunelli C， Gorecki T， Zhao Y， Sandra P. CoronaCharged Aerosol Detection in Supercritical Fluid Chromatography for Pharmaceutical Analysis. Anal. Chem.， 2007， 79（6）： 2472-2482

15 Gamache P H， McCarthy R S， Freeto S M， Asa D J， Woodcock M J， Laws K， Cole R O. LC GC Eur.， 2005， 18（6）： 345-354

16 Bai C C， Han S Y， Chai X Y， Jiang Y， Li P， Tu P F. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol.， 2009， 32（2）： 242-260

17 Vertzoni M， Archontaki H， Reppas C. Journal of Lipid Research， 2008，49（12）： 2690-2695

18 Chinese Pharmacopoeia. 2010. VolⅠ： 283

中國藥典， 2010版， 一部： 283

19 CHEN JunHui， YANG BaiJuan， LI WenLong， WANG XiaoRu， LI XianChun， YANG HuangHao. Chinese Journal of Chromatography， 2007， 25（5）： 628-632

陳軍輝， 楊佰娟， 李文龍， 王小如， 黎先春， 楊黃浩. 色譜， 2007， 25（5）： 628-632

20 XIA GuangPing， LIU Peng， HAN YingMei. Journal of Chinese Medicinal Materials， 2008， 31（3）： 385-387

夏廣萍， 劉 鵬， 韓英梅. 中藥材， 2008， 31（3）： 385-387

Determination of Astragaloside IV in Radix Astragli and

Its Preparations by Online SPELiquid Chromatography

with Charged Aerosol Detector

LI XiaoKuan*1， ZHANG YanHai2， FENG TianHui1， YANG YanLing1， JIN Yan2

1（College of Pharmacy SouthCentral University For Nationalities， Wuhan 430074， China）

2（ThermoFisher Scientific Corporation， Shanghai 201205， China）

Abstract A novel method for quantification of astragaloside IV in Radix Astragli was developed by using online SPE liquid chromatography coupled with corona charged aerosol detection（CAD）. The sample solution was loaded into Acclaim Polar AdvantageⅡC18（50 mm×4.6 mm， 3 μm） which was selected as online SPE column. Then the cleaning process was done by using the Right one of dual gradient pumps with Methanolwater as mobile phase. Acclaim C18 （150 mm×4.6 mm， 5 μm） was selected as analytical column with acetonitrilewater as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The eluate containing the target from SPE column was transferred into the analytical column by heartcutting mode. The temperature of nebulizer of corona CAD was set at 30 ℃ and the nitrogen pressure was 241.3 kPa. The baseline separation of astragaloside IV from matrix components has been achieved. There was a good linear correlation in the range of 4.0-80 mg/L for astragaloside IV and the correlation coefficient was 0.9998. The standard addition average recovery of astragaloside IV in Radix Astragli was 97.6%. It has been validated that astragaloside IV in Radix Astragli and its preparations can be quantified rapidly and accurately with this method.

Keywords Astragaloside IV， Online solid phase extraction； Corona chard aerosol detection； Dual liquid chromatography

（Received 31 August 2014； accepted 20 October 2014

謝和兵， 劉志輝， 錢 芳. 藥物分析雜志， 2008， 28（4）： 547-549

8 Turner N W， Subrahmanyam S， Piletsky S A. Anal. Chim. Acta， 2009， 632（2）： 168-180

9 Oliveira E D， Brazil J. Chem. Soc.， 2003， 14（2）： 174-182

10 Barceló D， Hennion M. Anal. Chim. Acta， 1995， 318： 1-41

11 Huang W H， Yang J， Zhao J， Wang C Z， Yuan C S， Li S P. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2010， （53）： 906-910

12 Dixon R W， Peterson D S. Anal. Chem.， 2002， 74（13）： 2930-2937

13 Wipe P， Werner S， Twining L A， Kendall C. Chirality， 2007， 19（1）： 5-9

14 Brunelli C， Gorecki T， Zhao Y， Sandra P. CoronaCharged Aerosol Detection in Supercritical Fluid Chromatography for Pharmaceutical Analysis. Anal. Chem.， 2007， 79（6）： 2472-2482

15 Gamache P H， McCarthy R S， Freeto S M， Asa D J， Woodcock M J， Laws K， Cole R O. LC GC Eur.， 2005， 18（6）： 345-354

16 Bai C C， Han S Y， Chai X Y， Jiang Y， Li P， Tu P F. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol.， 2009， 32（2）： 242-260

17 Vertzoni M， Archontaki H， Reppas C. Journal of Lipid Research， 2008，49（12）： 2690-2695

18 Chinese Pharmacopoeia. 2010. VolⅠ： 283

中國藥典， 2010版， 一部： 283

19 CHEN JunHui， YANG BaiJuan， LI WenLong， WANG XiaoRu， LI XianChun， YANG HuangHao. Chinese Journal of Chromatography， 2007， 25（5）： 628-632

陳軍輝， 楊佰娟， 李文龍， 王小如， 黎先春， 楊黃浩. 色譜， 2007， 25（5）： 628-632

20 XIA GuangPing， LIU Peng， HAN YingMei. Journal of Chinese Medicinal Materials， 2008， 31（3）： 385-387

夏廣萍， 劉 鵬， 韓英梅. 中藥材， 2008， 31（3）： 385-387

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Its Preparations by Online SPELiquid Chromatography

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LI XiaoKuan*1， ZHANG YanHai2， FENG TianHui1， YANG YanLing1， JIN Yan2

1（College of Pharmacy SouthCentral University For Nationalities， Wuhan 430074， China）

2（ThermoFisher Scientific Corporation， Shanghai 201205， China）

Abstract A novel method for quantification of astragaloside IV in Radix Astragli was developed by using online SPE liquid chromatography coupled with corona charged aerosol detection（CAD）. The sample solution was loaded into Acclaim Polar AdvantageⅡC18（50 mm×4.6 mm， 3 μm） which was selected as online SPE column. Then the cleaning process was done by using the Right one of dual gradient pumps with Methanolwater as mobile phase. Acclaim C18 （150 mm×4.6 mm， 5 μm） was selected as analytical column with acetonitrilewater as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The eluate containing the target from SPE column was transferred into the analytical column by heartcutting mode. The temperature of nebulizer of corona CAD was set at 30 ℃ and the nitrogen pressure was 241.3 kPa. The baseline separation of astragaloside IV from matrix components has been achieved. There was a good linear correlation in the range of 4.0-80 mg/L for astragaloside IV and the correlation coefficient was 0.9998. The standard addition average recovery of astragaloside IV in Radix Astragli was 97.6%. It has been validated that astragaloside IV in Radix Astragli and its preparations can be quantified rapidly and accurately with this method.

Keywords Astragaloside IV， Online solid phase extraction； Corona chard aerosol detection； Dual liquid chromatography

（Received 31 August 2014； accepted 20 October 2014