在線固相萃取液相色譜串聯質譜法測定阿姆西汀異構體的藥代動力學差異

李迎等

摘 要 建立了在線固相萃取高效液相色譜串聯質譜法（Online SPE HPLCMS/MS）測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀手性異構體的方法。血漿樣品經過以下預處理步驟： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 應用Online SPE將血漿樣品中的其它雜質去除； 將保留在SPE柱上的阿姆西汀和內標洗脫后用分析柱進一步分離。分離后再用串聯質譜法分別測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱為 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱為ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。質譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應監測（MRM）模式，檢測離子為正離子，分別選擇m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作為S/R阿姆西汀和內標（普萘洛爾）的檢測離子對。結果表明，S/R阿姆西汀的線性范圍為0.2～1000 μg/L，相關系數R分別為0.9903和0.9951， 批內精密度RSD分別為1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分別為94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之間。本方法顯著提高了阿姆西汀的檢測靈敏度，可以滿足大鼠灌胃給予阿姆西汀兩種異構體的藥代動力學研究要求。

3.5 藥代動力學參數分析

應用DAS 2.0 計算藥代動力學參數，結果表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構體后， R阿姆西汀的最大濃度顯著低于S阿姆西汀，兩者的最大濃度分別為（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，靈敏的檢測方法是研究該藥手性差異的前提和必要條件。

4 結 論

與離線SPE相比較，在線SPE具有快速、省力和便于自動化分析的優點。本研究將蛋白質沉淀法和在線SPE相結合，有利于除去血漿中雜質并提高分析柱壽命[12]。據此建立了大鼠血漿樣品中S/R阿姆西汀的在線SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并進行了嚴格的方法學驗證，確證后的方法用于SD大鼠體內阿姆西汀異構體的藥代動力學研究。研究表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構體后兩者之間有顯著的差異，其中R阿姆西汀的最大濃度比S阿姆西汀低3.3倍， 文獻[10＼]報道的方法不能滿足其測定要求。而本方法在滿足該測定要求的基礎上，操作簡便快速，重現性好，可以滿足臨床研究的需要。

References

1 Morilak D A， Frazer A. Int. J. Neuropsychopharmacol， 2004， 7（2）： 193-218

2 Dell′Osso B， Buoli M， Baldwin D S， Altamura A C. Hum Psychopharmacol， 2010， 25（1）： 17-29

3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

4 Westanmo A D， Gayken J， Haight R. Am. J. HealthSyst Pharm.， 2005， 62： 2481-2490

5 Palmer E C， Binns L N， Carey H. Ann. Pharmacother.， 2014， 48（8）： 1030-1039

6 Xue R， Jin Z L， Chen H X， Yuan L， He X H， Zhang Y P， Meng Y G， Xu J P， Zheng J Q， Zhong B H， Li Y F， Zhang Y Z. Eur. Neuropsychopharmacol， 2013， 23（7）： 728-741

7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬來， 鄧 鳴， 熊 山， 張振清. 軍事醫學， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陳 靜， 劉召金， 安寶超， 許 群， 張祥民. 分析化學， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾連峰， 馬育松， 陳瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化學， 2013， 41（8）： 1194-1198

摘 要 建立了在線固相萃取高效液相色譜串聯質譜法（Online SPE HPLCMS/MS）測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀手性異構體的方法。血漿樣品經過以下預處理步驟： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 應用Online SPE將血漿樣品中的其它雜質去除； 將保留在SPE柱上的阿姆西汀和內標洗脫后用分析柱進一步分離。分離后再用串聯質譜法分別測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱為 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱為ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。質譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應監測（MRM）模式，檢測離子為正離子，分別選擇m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作為S/R阿姆西汀和內標（普萘洛爾）的檢測離子對。結果表明，S/R阿姆西汀的線性范圍為0.2～1000 μg/L，相關系數R分別為0.9903和0.9951， 批內精密度RSD分別為1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分別為94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之間。本方法顯著提高了阿姆西汀的檢測靈敏度，可以滿足大鼠灌胃給予阿姆西汀兩種異構體的藥代動力學研究要求。

3.5 藥代動力學參數分析

應用DAS 2.0 計算藥代動力學參數，結果表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構體后， R阿姆西汀的最大濃度顯著低于S阿姆西汀，兩者的最大濃度分別為（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，靈敏的檢測方法是研究該藥手性差異的前提和必要條件。

4 結 論

與離線SPE相比較，在線SPE具有快速、省力和便于自動化分析的優點。本研究將蛋白質沉淀法和在線SPE相結合，有利于除去血漿中雜質并提高分析柱壽命[12]。據此建立了大鼠血漿樣品中S/R阿姆西汀的在線SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并進行了嚴格的方法學驗證，確證后的方法用于SD大鼠體內阿姆西汀異構體的藥代動力學研究。研究表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構體后兩者之間有顯著的差異，其中R阿姆西汀的最大濃度比S阿姆西汀低3.3倍， 文獻[10＼]報道的方法不能滿足其測定要求。而本方法在滿足該測定要求的基礎上，操作簡便快速，重現性好，可以滿足臨床研究的需要。

References

1 Morilak D A， Frazer A. Int. J. Neuropsychopharmacol， 2004， 7（2）： 193-218

2 Dell′Osso B， Buoli M， Baldwin D S， Altamura A C. Hum Psychopharmacol， 2010， 25（1）： 17-29

3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

4 Westanmo A D， Gayken J， Haight R. Am. J. HealthSyst Pharm.， 2005， 62： 2481-2490

5 Palmer E C， Binns L N， Carey H. Ann. Pharmacother.， 2014， 48（8）： 1030-1039

6 Xue R， Jin Z L， Chen H X， Yuan L， He X H， Zhang Y P， Meng Y G， Xu J P， Zheng J Q， Zhong B H， Li Y F， Zhang Y Z. Eur. Neuropsychopharmacol， 2013， 23（7）： 728-741

7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬來， 鄧 鳴， 熊 山， 張振清. 軍事醫學， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陳 靜， 劉召金， 安寶超， 許 群， 張祥民. 分析化學， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾連峰， 馬育松， 陳瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化學， 2013， 41（8）： 1194-1198

摘 要 建立了在線固相萃取高效液相色譜串聯質譜法（Online SPE HPLCMS/MS）測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀手性異構體的方法。血漿樣品經過以下預處理步驟： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 應用Online SPE將血漿樣品中的其它雜質去除； 將保留在SPE柱上的阿姆西汀和內標洗脫后用分析柱進一步分離。分離后再用串聯質譜法分別測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱為 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱為ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。質譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應監測（MRM）模式，檢測離子為正離子，分別選擇m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作為S/R阿姆西汀和內標（普萘洛爾）的檢測離子對。結果表明，S/R阿姆西汀的線性范圍為0.2～1000 μg/L，相關系數R分別為0.9903和0.9951， 批內精密度RSD分別為1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分別為94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之間。本方法顯著提高了阿姆西汀的檢測靈敏度，可以滿足大鼠灌胃給予阿姆西汀兩種異構體的藥代動力學研究要求。

3.5 藥代動力學參數分析

應用DAS 2.0 計算藥代動力學參數，結果表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構體后， R阿姆西汀的最大濃度顯著低于S阿姆西汀，兩者的最大濃度分別為（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，靈敏的檢測方法是研究該藥手性差異的前提和必要條件。

4 結 論

與離線SPE相比較，在線SPE具有快速、省力和便于自動化分析的優點。本研究將蛋白質沉淀法和在線SPE相結合，有利于除去血漿中雜質并提高分析柱壽命[12]。據此建立了大鼠血漿樣品中S/R阿姆西汀的在線SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并進行了嚴格的方法學驗證，確證后的方法用于SD大鼠體內阿姆西汀異構體的藥代動力學研究。研究表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構體后兩者之間有顯著的差異，其中R阿姆西汀的最大濃度比S阿姆西汀低3.3倍， 文獻[10＼]報道的方法不能滿足其測定要求。而本方法在滿足該測定要求的基礎上，操作簡便快速，重現性好，可以滿足臨床研究的需要。

References

1 Morilak D A， Frazer A. Int. J. Neuropsychopharmacol， 2004， 7（2）： 193-218

2 Dell′Osso B， Buoli M， Baldwin D S， Altamura A C. Hum Psychopharmacol， 2010， 25（1）： 17-29

3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

4 Westanmo A D， Gayken J， Haight R. Am. J. HealthSyst Pharm.， 2005， 62： 2481-2490

5 Palmer E C， Binns L N， Carey H. Ann. Pharmacother.， 2014， 48（8）： 1030-1039

6 Xue R， Jin Z L， Chen H X， Yuan L， He X H， Zhang Y P， Meng Y G， Xu J P， Zheng J Q， Zhong B H， Li Y F， Zhang Y Z. Eur. Neuropsychopharmacol， 2013， 23（7）： 728-741

7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬來， 鄧 鳴， 熊 山， 張振清. 軍事醫學， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陳 靜， 劉召金， 安寶超， 許 群， 張祥民. 分析化學， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾連峰， 馬育松， 陳瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化學， 2013， 41（8）： 1194-1198