蓮子心總黃酮不同提取方法的比較與分析

吳梅青

（湘潭職業技術學院，湖南湘潭 411102）

蓮子心屬于睡蓮科水生草本植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn）成熟種子中的胚根及幼葉，具有清心安神、交通心腎、澀精止血的功效。用于熱入心包，神昏譫語，心腎不交，失眠遺精，血熱吐血，收載于2010年版《中國藥典》[1]。蓮子心中含有木犀草素、金絲桃苷、蕓香苷等黃酮類化合物，具有獨特的營養和保健功效，且無毒副作用。相關提取方面的研究多針對蓮子心生物堿，而對總黃酮的研究報道較少。為了進一步研究和開發，本研究參考相關文獻資料，采用堿溶酸沉法、水提法、常規乙醇提取法、超聲波輔助乙醇提取法、微波輔助乙醇提取法等5種提取方法，用紫外分光光度法測定總黃酮類物質含量，用蓮子心總黃酮提取率和干浸膏得率為指標，對蓮子心做了5種提取方法的平行對照實驗，并對提取結果進行比較研究與分析。

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料與試劑

蓮子心，產于湖南湘潭。實驗前將蓮子心放在50℃干燥4 h后再放入多功能粉碎機中粉碎，過四號篩后密封保存備用。

蘆丁對照品（購自中國藥品生物制品檢定所）；95%乙醇、石油醚、NaNO2、Al（NO3）3、NaOH等試劑均為分析純。

1.2 儀器

PH-O50A干燥箱：上海一恒科學儀器有限公司；UV10000紫外可見分光光度計：上海天美科學儀器有限公司；G80F23DCSL-F7（R0）型微波爐：格蘭仕微波爐電器有限公司；KQ3200DB數控超聲波清洗儀：昆山超聲儀器有限公司；PL-L型電子分析天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

2 實驗方法與結果

2.1 樣品溶液的制備

2.1.1 堿溶酸沉法液[2]

準確稱取5.00 g洗凈干燥研碎的蓮子心，置于干凈的燒杯中，加已煮沸的0.4%硼砂水溶液120 mL加熱至沸騰，并在攪拌條件下加石灰乳調pH在8～9，并保持該pH煮沸20 min，趁熱用4層紗布過濾；藥渣同法再操作2次，合并3次濾液，并用濃HC1調pH約為3～4，攪拌，放置過夜使沉淀完全，減壓抽濾，沉淀用蒸餾水洗滌3次，抽干，將沉淀物轉移到表面皿中，于45℃恒溫真空干燥6 h，再加蒸餾水定容至100 mL。平行試驗3次，測定吸光度，計算蓮子心總黃酮的提取率。

2.1.2 水提法液[3]

準確稱取5.00 g洗凈干燥研碎的蓮子心，按料液比3∶100，分別在90℃的水浴中浸提30 min，取濾液，濾渣按相同方法進行第2次，合并2次濾液，然后再過濾、離心，得浸提液，再濃縮定容至100 mL。平行試驗3次，測定吸光度，計算蓮子心總黃酮的提取率。

2.1.3 常規醇提法液[4]

準確稱取5.00 g洗凈干燥研碎的蓮子心，采用20倍量75%一定濃度乙醇回流提取2次，第一次1.5 h，第二次1 h。過濾后合并2次濾液，回收乙醇，定容至100 mL，平行試驗3次。測定吸光度，計算蓮子心總黃酮的提取率。

2.1.4 超聲波輔助醇提法液

準確稱取5.00 g洗凈干燥研碎的蓮子心，用75%乙醇按料液比1∶25（g∶mL）在超聲功率250 W及超聲溫度50℃的水浴中提取30 min，收集濾液，以石油醚脫脂除色，濃縮后得提取液[5]，用乙醇定容至100 mL，平行試驗3次。測定吸光度，計算蓮子心總黃酮的提取率。

2.1.5 微波輔助醇提法液

準確稱取5.00 g洗凈干燥研碎的蓮子心于燒杯中，加入125 mL的75%乙醇溶液，采用微波輔助提取，微波輻射功率400 W、微波輻射時間30 s×3，趁熱過濾，濾液，回收乙醇[6]，定容至100 mL容量瓶中待測。平行試驗3次。測定吸光度，計算蓮子心總黃酮的提取率。

2.2 總黃酮含量的比較

2.2.1 標準曲線的繪制

精密稱取蘆丁標準品100 mg，用無水乙醇溶解并定容至50 mL容量瓶中，精密吸取5 mL，置50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得含蘆丁0.2 mg/mL標準溶液。精確移取蘆丁標準溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL容量瓶中，采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色體系顯色，定容并搖勻，于200 nm～900 nm波長范圍掃描，最大吸收波長為500 nm。以試劑空白做參比，于500 nm處測定吸光度，重復3次，取平均值。以吸光度A為縱坐標，以蘆丁標準溶液質量濃度C（mg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為：A=13. 57471C-0. 01473，線性關系良好（R=0. 9995）。

2.2.2 樣品中總黃酮含量的測定

分別精密吸取上述樣品溶液（各提取3次）各1mL，置于具塞試管中，加入無水乙醇9 mL稀釋混勻后，以無水乙醇為空白對照，于500 nm波長處測定吸收度，每一樣品平行測定3次，取平均值。并按“2.1.1”項下回歸方程計算含量，結果詳見表1。

表1 5種提取方法所得總黃酮提取率比較Table 1 Comparison in the total yield of flavonoids extracted by 5 methods

2.2.3 干浸膏得率的測定

按《中國藥典》2010年版I部附錄X A的浸出物測定法項下的浸出物測定法熱浸法測定。精密量取樣品溶液（每方法各提取3次）各10 mL，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴蒸干溶劑后，放入烘箱中于105℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻30 min后迅速準確稱重，計算浸膏量，每一樣品平行測定3次，取平均值。結果詳見表2。

2.2.4 5種提取方法的綜合評價

表2 5種方法干浸膏得率比較Table 2 Comparison in the yield of dry extract by 5 extraction methods

表3 蓮子心總黃酮5種提取方法的綜合評價比較Table 3 Comparison in comprehensive evaluation of 5 extraction methods

3 結論與討論

蓮子心中黃酮類化合物包括木犀草素、金絲桃苷、蕓香苷等。研究表明，黃酮類化合物有多重生物學作用，如抗炎抑菌、抗氧化、降血糖、降血脂、抗癌、抗腫瘤及增強免疫力等作用[7]。本實驗以蓮子心中總黃酮提取率和干浸膏得率為指標，對蓮子心黃酮的5種提取方法進行比較。從表3可以看出，Y值的大小順序為微波輔助醇提法＞超聲波輔助醇提法＞常規醇提法＞水提法＞堿溶酸沉法，結果提示蓮子心黃酮的提取以微波輔助醇提法為佳。

本實驗中5種提取方法均采用的是從近幾年文獻中提到的最優提取工藝。但是實際中藥制劑的提取受到多種因素的影響，提取方法的選擇不但要考慮主要有效成分的提取率，還應兼顧干浸膏物的得率。因為提取液中有效成分含量越多越好，但干浸膏越多意味著服用的量就越大，所以在5種提取方法的比較上，以總黃酮的含量和干浸膏得率為指標來進行評價，同時對這2個指標的數據進行標準化處理，以消除各指標的單位和量綱不同及各指標數值不同所造成的影響，以標準化指標加權后求和作為Y，優選出微波輔助醇提法為較佳條件，這樣使結果更加合理、科學。微波輔助醇提法中總黃酮提取率明顯提高，而且提取時間明顯縮短，只需要幾分鐘，如果用于大生產，則安全可靠，無污染，并可節省投資。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社,2010：256

[2] 蔡定建,柳茶花,鐘鴻鳴,等.蓮子心中黃酮類物質的提取和測定[J].中國釀造,2010(1)：132-135

[3] 肖貴平.建蓮蓮心黃酮物質水浸提條件優化[J].亞熱帶農業研究,2011,7(3)：192-196

[4] 周芳.蓮子心中總黃酮、多糖的分離純化及氨基酸、農殘測定研究[D].中南大學,2013：5

[5] 張俊生,陳莉華,楊順清,等.超聲波輔助乙醇提取蓮子心總黃酮及其抗氧化活性的研究[J].食品工業科技,2012,33(3)：220-223

[6] 余其鳳,周文富.蓮子心總黃酮的微波輔助提取研究[J].化學與生物工程,2011,28(2)：43-48

[7] 王博,林圣云.含黃酮類中藥的抗癌抗腫瘤作用研究概況[J].浙江中醫藥大學學報,2012,36(7)：838-840