白藜蘆醇對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織的保護(hù)作用

劉 輝

河南焦作市中站區(qū)人民醫(yī)院骨科 焦作 454191

脊髓組織發(fā)生缺血，經(jīng)處理恢復(fù)血流后損傷反而加重的現(xiàn)象稱為脊髓缺血再灌注損傷，可能與血流恢復(fù)后脊髓組織的氧自由基過(guò)剩、細(xì)胞凋亡加重等有關(guān)［1］。本研究探討脊髓缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制及防治途徑，采用大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型觀察白藜蘆醇造模前給藥的效果。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 48只清潔級(jí)健康Wistar大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量240～320g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（豫）2012-0001。

1.2 藥品與試劑 白藜蘆醇購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及考馬斯亮藍(lán)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 動(dòng)物分組及給藥方法 48只大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、缺血再灌注損傷模型組、白藜蘆醇高劑量組和白藜蘆醇低劑量組，每組12只，造模前各組進(jìn)行相應(yīng)處理：白藜蘆醇高劑量組和低劑量組大鼠于造模前分別給予白藜蘆醇40 mg／kg＋0.85%的NaCl溶液和20mg／kg＋0.85%的NaCl溶液，每只大鼠給藥量10mL／kg，連用7d；假手術(shù)組和缺血再灌注損傷模型組大鼠術(shù)前均給予同體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.85%的NaCl溶液，連用7d。

1.4 模型制備 參考文獻(xiàn)［2］改良的腹主動(dòng)脈缺血法制備脊髓缺血再灌注損傷模型，缺血45min，再灌注8h后終止實(shí)驗(yàn)，其中假手術(shù)組僅行腹主動(dòng)脈分離術(shù)，而未行結(jié)扎手術(shù)，麻醉后處死大鼠，取第3～5腰椎處的脊髓組織，置于-80℃冰箱中待測(cè)。

1.5 生化指標(biāo)檢測(cè) 將冰箱中待測(cè)標(biāo)本取出，用0.85%NaCl溶液制成組織勻漿，4℃以4 000r／min離心10min，取上清液，采用考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)總蛋白量，采用嘌呤氧化酶法檢測(cè)SOD水平，采用硫代戊巴比妥法檢測(cè)MDA水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與處理，各組SOD、MDA水平比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié)果

白藜蘆醇高劑量和低劑量組大鼠脊髓組織中SOD水平均高于缺血再灌注損傷模型組，而MDA水平均低于缺血再灌注損傷模型組（P＜0.05）。白藜蘆醇高劑量組和低劑量組脊髓組織中SOD、MDA水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠脊髓組織中SOD、MDA水平比較 （±s）

表1 各組大鼠脊髓組織中SOD、MDA水平比較 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，△P＜0.05；與缺血再灌注損傷模型組比較，＊P＜0.05；與白藜蘆醇高劑量組比較，＃P＜0.05

組別 n SOD（U／mg） MDA（nmol／mg）假手術(shù)組12 128.45±23.83 1.207±0.120缺血再灌注損傷模型組 12 44.92±14.09△ 3.427±0.598△白藜蘆醇高劑量組 12 89.76±17.62＊ 1.769±0.408＊白藜蘆醇低劑量組 12 65.74±10.66＊＃ 2.183±0.524＊＃F 值53.804 29.531 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

脊椎部位的手術(shù)及脊柱骨折、脊髓供血血管病變、腹主動(dòng)脈病變等均可能出現(xiàn)脊髓缺血再灌注損傷。研究表明［1］，脊髓缺血再灌注損傷的發(fā)病與機(jī)體因缺血而出現(xiàn)的氧自由基過(guò)剩、細(xì)胞凋亡、能量代謝障礙及鈣離子超載等關(guān)系密切。本研究為進(jìn)一步探討脊髓缺血再灌注損傷的氧自由基理論，利用改良的大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型，觀察白藜蘆醇造模前干預(yù)與否對(duì)模型脊髓組織SOD、MDA的影響。SOD是一種氧自由基清除劑，其水平及活性的高低反映機(jī)體抗氧化能力；MDA是氧自由基攻擊不飽和脂肪酸過(guò)程中產(chǎn)生的一種脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，其水平高低不但反映脂質(zhì)過(guò)氧化程度，而且能破壞細(xì)胞膜或線粒體膜等生物膜類，對(duì)機(jī)體造成損傷［3］。白藜蘆醇是一種多酚類化合物，已被證實(shí)具有抗氧化、清除自由基、抗凝、抗炎等生物學(xué)功能，抗衰老、對(duì)抗骨質(zhì)疏松、提高免疫力、對(duì)抗老年癡呆以及多種組織的缺血再灌注損傷等均有一定價(jià)值［3-4］。另外，本研究模型制備過(guò)程中選擇再灌注8h時(shí)檢測(cè)數(shù)據(jù)，是因有研究［3］證實(shí)，再灌注8h是損傷最明顯的時(shí)間。本文結(jié)果顯示，白藜蘆醇高劑量和低劑量組大鼠脊髓組織中SOD水平均高于缺血再灌注損傷模型組，而MDA水平均低于缺血再灌注損傷模型組；且白藜蘆醇高劑量組和低劑量組脊髓組織中SOD、MDA水平存在顯著差異，提示白藜蘆醇對(duì)脊髓缺血再灌注損傷組織具有抗氧化作用，可能通過(guò)該途徑減輕脊髓組織缺血再灌注損傷，而且這種作用可能與白藜蘆醇的劑量有關(guān)，而關(guān)于其具體作用機(jī)制及是否有劑量依賴性尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

［1］孟春陽(yáng)，尹飛，郭麗，等.銀杏葉對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010，14（6）：812-814.

［2］肖博晗，陳強(qiáng)，楊東旭，等.脊髓缺血再灌注損傷模型改進(jìn)的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（6）：747-749.

［3］李霞，孫慧萍，李冬梅，等.白藜蘆醇對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷SOD和MDA的影響［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2014，28（1）：28-30.

［4］Singh N，Agrawal M，DoréS.Neuroprotective properties and mechanisms of resveratrol in in vitro and in vivo experimental cerebral stroke models［J］.ACS Chem Neurosci，2013，4（8）：1 151-1 162.

［5］徐貴森，劉合年，楊淑霞，等.缺血再灌注脊髓丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性的變化［J］.西南軍醫(yī)，2006，8（2）：10-11.