蒙特羅番茄腋芽組培培養基的篩選

楊波+于連海+葛雁南+李新江

摘要： 為了提高蒙特羅番茄的育苗速度，采用了不同培養基，對其腋芽進行組培技術研究。結果表明，將蒙特羅番茄腋芽在超凈臺下切割成0.2～0.3 mm大小后轉入MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3誘導培養基中培養，誘導率可達90%;萌發后轉入MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA增殖培養基上培養，具有較高的增殖系數;生根培養基采用1/2 MS+ 0.8 mg/L IBA+3 g/L活性炭配方，生根效果最好，生根率可達100%。

關鍵詞：蒙特羅番茄;組培;培養基;腋芽

中圖分類號：S641.2 ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ?文章編號：0439-8114（2014）20-4996-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.20.062

Screening Tissue Culture for Axillary Buds of Montero Tomato Variety

YANG Bo1， YU Lian-hai2， GE Yan-nan2， LI Xin-jiang1

（1. Jilin Agricultural Science and Technology University， Jilin 132101， Jilin， China;

2. Jilin City Fengman District Agriculture and Vegetable Technology Promotion Center， Jilin 132013，Jilin， China）

Abstract： In order to improve the propagation speed of Montero tomato seedlings， different medium formulations were used to screen tissue culture of axillary buds. The results showed that axillary buds after disinfection were cut into 0.2～0.3 mm size and seeded into the induction medium of MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3， the rate of induction was 90%. The seedlings after germination were seeded into the proliferation medium of MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA and had higher proliferation index. Using 1/2 MS+ 0.8 mg/L IBA+3 g/L activated carbon as rooting medium， the effects of rooting was the best with the rooting rate of 100%.

Key words： Montero tomato; tissue culture; medium; axillary buds

蒙特羅番茄是一種早熟的雜交一代新品種，適合于早春及反季節溫室栽培。該品種耐低溫，長勢優良，對病毒病及枯萎病具有較強的抗性，果色鮮艷均勻，果面光滑美觀，深受廣大農戶的喜愛[1]。目前，在生產中番茄主要以播種繁殖進行育苗，由于番茄種子容易攜帶病原菌，在播種前必須經過消毒滅菌，而實際生產中往往由于消毒不徹底導致爛種或苗期為害;另播種前還需要進行嚴格的浸種催芽，而浸水溫度及時間都不好把握，這些均會導致種子的萌發率不高，影響到蒙特羅”番茄的育苗質量。隨著組培技術的發展，在園藝植物育苗中廣泛應用[2]，本研究以蒙特羅番茄腋芽作為外殖體，采用組培技術對其進行繁殖，以快速高效地培養優良蒙特羅番茄苗，為其工廠化生產奠定基礎。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

2013年4月8日，從吉林農業科技學院園藝場溫室蒙特羅番茄植株上采集腋芽，挑選生長健壯、無病蟲害的植株。盡量采集靠近花芽附近的腋芽，為防止對腋芽生長點造成傷害，采集時帶上葉或莖皮。

1.2 ?試驗方法

1.2.1 ?材料預處理 ?將采集的腋芽用清水沖洗，剪去部分葉片及莖皮，放入玻璃瓶中，用紗布封口。用流水沖洗20 min，再放入0.3%的84消毒液中消毒10 min，去離子水沖洗3～4次后放進超凈工作臺內。接種前在臺內再次將腋芽放入70%的乙醇中消毒5 min，然后用去離子水沖洗3～4次，放入培養皿的濾紙上備用[3]。

1.2.2 ?愈傷組織的誘導 ?在超凈臺中將腋芽周圍的葉片和莖皮切割干凈，利用解剖鏡，用刀片剝掉腋芽外圍的包葉，露出生長點后，切下帶1～2個葉原基大小為0.2～0.3 mm的生長點，將其轉入4種誘導培養基中（A1：MS+1.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3;A2：MS+1.0 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3;A3：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3;A4：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3）。每種培養基接種50瓶，每瓶接種1個莖尖，培養溫度（25±1）℃，光照度1 500～2 000 lx，接種后觀察愈傷組織誘導情況，30 d后進行統計愈傷組織誘導率[4]。endprint

1.2.3 ?不定芽誘導增殖分化 ?從培養室中挑選愈傷組織誘導效果好、生長旺盛、無污染的瓶苗，在超凈臺下取出切成小段轉接到增殖培養基中，增殖培養基采用7個配比（B1：MS+0.5 mg/L 6-BA;B2：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.02 mg/L IAA;B3：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L IAA;B4：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.06 mg/L IAA; B5：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.02 mg/L NAA;B6：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA;B7：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.06 mg/L NAA）。培養溫度（25±1）℃，光照度2 500～3 000 lx，光照時間12 h/d，每個配比接種20瓶，每瓶接入5個小段，觀察苗木增殖情況。

1.2.4 ?生根的誘導 ?挑選生長良好的增殖苗，在超凈臺中切成2～3 cm的帶腋芽或嫩梢小段，轉入生根培養基中，生根培養基采用3個配比（C1：1/2 MS+ 0.5 mg/L IBA +3 g/L活性炭;C2：1/2MS+0.8 mg/L IBA +3 g/L活性炭;C3：1/2MS+1.0 mg/L IBA +3 g/L活性炭）。培養溫度（25±1）℃，光照度2 500～3 000 lx，光照時間12 h/d，每個配比接種20瓶，每瓶接入5個小段，觀察苗木生根情況[5]。

2 ?結果與分析

2.1 ?愈傷組織誘導情況

由表1可知，A1、A3培養基的誘導率高于A2和A4培養基，且誘導效果較好，表明NAA濃度低有利于芽點的形成，濃度高反而不利于芽點的形成。而A1、A3兩種培養基相比較，雖然誘導情況相似，但誘導率不同，A1培養基誘導率為72%，而A3培養基達到了90%，明顯高于A1培養基。因此，A3培養基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3）為最佳的誘導培養基。

2.2 ?不定芽誘導增殖分化情況

2.2.1 ?愈傷組織生長情況 ?接種到增殖培養基后，小段基部陸續有愈傷組織形成，愈傷組織中形成芽點，分化出叢生芽，連同小段一同生長，到第23天時生長速度下降， 20 d時愈傷組織生長情況見表2。由表2可以看出，雖然各培養基形成的愈傷組織大小狀況不同，但均有愈傷組織形成，B2、B3、B4、B5、B6、B7培養基形成的愈傷組織均比B1培養基的大，表明添加IAA和NAA兩種生長素均有愈傷組織的促進作用。但在實際生產中，形成的愈傷組織過大或過小均對愈傷組織上叢生芽的分化生長有影響，形成愈傷組織的最佳面積應在0.7～1.4 cm2。B5、B6、B7配方中形成的中等大小愈傷組織面積塊多，表明配方中添加NAA更有利于叢生芽的分化生長。

2.2.2 ?不定芽增殖分化情況 ?由表2可以看出，配方中添加NAA更有利于叢生芽的分化生長，因此第2次增殖轉接時選用B5、B6、B7號培養基，轉接后23 d進行測量統計嫩莖的生長情況見表3。由表3可以看出，3種培養基生長系數均大于2.00，表明3種培養基均可以進行擴繁，B6培養基莖段的生長系數最大，其次是B5，而B7最小。B6生長系數大，其苗生長的要比其他兩種培養基高，轉接時較高的植株截取段數也會增多，通常能截取3～4段。因此，B6培養基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA）最為理想，有利于擴繁。

2.3 ?生根誘導情況

帶腋芽或嫩梢小段轉入生根培養基后，定期觀察苗木的生根情況，在轉接后第10天及第15天時統計生根數，到第25天時統計生根率及生根量，結果見表4。由表4可以看出，C2培養基在第10天及第15天，生根數一直最高，25 d時C2培養基生根率最高，達到了100%。C2培養基生根時間相對集中，在第15天時，已經有96%生根，另生根量平均3～6條，比C1、C3培養基多，可見C2培養基（1/2 MS+ 0.8 mg/L IBA+3 g/L活性炭）最為理想。

3 ?結論與討論

通過4個誘導培養基配方比較，得知MS+0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3培養基最適合芽的誘導，先形成少量的愈傷組織，然后愈傷組織形成芽點，生長出芽。在增殖擴繁培養中，采用了7個配方，添加細胞分裂素6-BA及不同濃度的生長素IAA和NAA，在愈傷組織形成階段可以得出IAA不適合，其誘導的愈傷組織塊比較大，不利于萌發芽，通過進一步對NAA不同濃度添加量進行比較，得出MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA配方中苗木生長系數大，平均苗木生長量大，有利于擴繁，得出其為最佳的增殖配方。在生根階段，采用3個配比，添加不同激素濃度的IBA，得出1/2 MS+0.8 mg/L IBA +3 g/L活性炭配方生根效果最好，生根率達到了100%，而且生根時間相對比較集中。

本試驗主要是在離體培養3個主要階段的培養基配方上進行比較，由于整個離體培養過程情況比較復雜，具體到每個階段的具體條件及出瓶條件的選取等，還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1] 要 ?令，樓松良.番茄新品種“蒙特羅”高產栽培技術[J].農業科技通訊，2010（7）：212-213.

[2] 馬 ?杰，邱棟梁.番茄組培再生體系優化研究[J].中國農學通報，2011，27（8）：185-189.

[3] 周金梅，宮敬利.不同培養基配方對L-402番茄愈傷組織的誘導研究[J].北方園藝，2010（21）：158-160.

[4] 甘中祥，李倍金，張錄霞，等.加工番茄未成熟種子培養[J].北方園藝，2012（5）：137-138.

[5] 何秀霞，陸一鳴，白杰英，等.番茄組織培養體系的建立及其影響因素的研究[J].內蒙古民族大學學報（自然科學版），2003，18（1）：30-34.

[6] 曹慧穎，張立軍，夏潤璽，等.番茄組織培養研究進展[J].中國蔬菜，2012（16）：142-145.

[7] 張麗梅.番茄組織培養與試管苗繁育[J].安徽農業科學，2012，40（7）：3869-3871.endprint

1.2.3 ?不定芽誘導增殖分化 ?從培養室中挑選愈傷組織誘導效果好、生長旺盛、無污染的瓶苗，在超凈臺下取出切成小段轉接到增殖培養基中，增殖培養基采用7個配比（B1：MS+0.5 mg/L 6-BA;B2：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.02 mg/L IAA;B3：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L IAA;B4：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.06 mg/L IAA; B5：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.02 mg/L NAA;B6：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA;B7：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.06 mg/L NAA）。培養溫度（25±1）℃，光照度2 500～3 000 lx，光照時間12 h/d，每個配比接種20瓶，每瓶接入5個小段，觀察苗木增殖情況。

1.2.4 ?生根的誘導 ?挑選生長良好的增殖苗，在超凈臺中切成2～3 cm的帶腋芽或嫩梢小段，轉入生根培養基中，生根培養基采用3個配比（C1：1/2 MS+ 0.5 mg/L IBA +3 g/L活性炭;C2：1/2MS+0.8 mg/L IBA +3 g/L活性炭;C3：1/2MS+1.0 mg/L IBA +3 g/L活性炭）。培養溫度（25±1）℃，光照度2 500～3 000 lx，光照時間12 h/d，每個配比接種20瓶，每瓶接入5個小段，觀察苗木生根情況[5]。

2 ?結果與分析

2.1 ?愈傷組織誘導情況

由表1可知，A1、A3培養基的誘導率高于A2和A4培養基，且誘導效果較好，表明NAA濃度低有利于芽點的形成，濃度高反而不利于芽點的形成。而A1、A3兩種培養基相比較，雖然誘導情況相似，但誘導率不同，A1培養基誘導率為72%，而A3培養基達到了90%，明顯高于A1培養基。因此，A3培養基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3）為最佳的誘導培養基。

2.2 ?不定芽誘導增殖分化情況

2.2.1 ?愈傷組織生長情況 ?接種到增殖培養基后，小段基部陸續有愈傷組織形成，愈傷組織中形成芽點，分化出叢生芽，連同小段一同生長，到第23天時生長速度下降， 20 d時愈傷組織生長情況見表2。由表2可以看出，雖然各培養基形成的愈傷組織大小狀況不同，但均有愈傷組織形成，B2、B3、B4、B5、B6、B7培養基形成的愈傷組織均比B1培養基的大，表明添加IAA和NAA兩種生長素均有愈傷組織的促進作用。但在實際生產中，形成的愈傷組織過大或過小均對愈傷組織上叢生芽的分化生長有影響，形成愈傷組織的最佳面積應在0.7～1.4 cm2。B5、B6、B7配方中形成的中等大小愈傷組織面積塊多，表明配方中添加NAA更有利于叢生芽的分化生長。

2.2.2 ?不定芽增殖分化情況 ?由表2可以看出，配方中添加NAA更有利于叢生芽的分化生長，因此第2次增殖轉接時選用B5、B6、B7號培養基，轉接后23 d進行測量統計嫩莖的生長情況見表3。由表3可以看出，3種培養基生長系數均大于2.00，表明3種培養基均可以進行擴繁，B6培養基莖段的生長系數最大，其次是B5，而B7最小。B6生長系數大，其苗生長的要比其他兩種培養基高，轉接時較高的植株截取段數也會增多，通常能截取3～4段。因此，B6培養基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA）最為理想，有利于擴繁。

2.3 ?生根誘導情況

帶腋芽或嫩梢小段轉入生根培養基后，定期觀察苗木的生根情況，在轉接后第10天及第15天時統計生根數，到第25天時統計生根率及生根量，結果見表4。由表4可以看出，C2培養基在第10天及第15天，生根數一直最高，25 d時C2培養基生根率最高，達到了100%。C2培養基生根時間相對集中，在第15天時，已經有96%生根，另生根量平均3～6條，比C1、C3培養基多，可見C2培養基（1/2 MS+ 0.8 mg/L IBA+3 g/L活性炭）最為理想。

3 ?結論與討論

通過4個誘導培養基配方比較，得知MS+0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3培養基最適合芽的誘導，先形成少量的愈傷組織，然后愈傷組織形成芽點，生長出芽。在增殖擴繁培養中，采用了7個配方，添加細胞分裂素6-BA及不同濃度的生長素IAA和NAA，在愈傷組織形成階段可以得出IAA不適合，其誘導的愈傷組織塊比較大，不利于萌發芽，通過進一步對NAA不同濃度添加量進行比較，得出MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA配方中苗木生長系數大，平均苗木生長量大，有利于擴繁，得出其為最佳的增殖配方。在生根階段，采用3個配比，添加不同激素濃度的IBA，得出1/2 MS+0.8 mg/L IBA +3 g/L活性炭配方生根效果最好，生根率達到了100%，而且生根時間相對比較集中。

本試驗主要是在離體培養3個主要階段的培養基配方上進行比較，由于整個離體培養過程情況比較復雜，具體到每個階段的具體條件及出瓶條件的選取等，還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1] 要 ?令，樓松良.番茄新品種“蒙特羅”高產栽培技術[J].農業科技通訊，2010（7）：212-213.

[2] 馬 ?杰，邱棟梁.番茄組培再生體系優化研究[J].中國農學通報，2011，27（8）：185-189.

[3] 周金梅，宮敬利.不同培養基配方對L-402番茄愈傷組織的誘導研究[J].北方園藝，2010（21）：158-160.

[4] 甘中祥，李倍金，張錄霞，等.加工番茄未成熟種子培養[J].北方園藝，2012（5）：137-138.

[5] 何秀霞，陸一鳴，白杰英，等.番茄組織培養體系的建立及其影響因素的研究[J].內蒙古民族大學學報（自然科學版），2003，18（1）：30-34.

[6] 曹慧穎，張立軍，夏潤璽，等.番茄組織培養研究進展[J].中國蔬菜，2012（16）：142-145.

[7] 張麗梅.番茄組織培養與試管苗繁育[J].安徽農業科學，2012，40（7）：3869-3871.endprint

1.2.3 ?不定芽誘導增殖分化 ?從培養室中挑選愈傷組織誘導效果好、生長旺盛、無污染的瓶苗，在超凈臺下取出切成小段轉接到增殖培養基中，增殖培養基采用7個配比（B1：MS+0.5 mg/L 6-BA;B2：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.02 mg/L IAA;B3：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L IAA;B4：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.06 mg/L IAA; B5：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.02 mg/L NAA;B6：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA;B7：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.06 mg/L NAA）。培養溫度（25±1）℃，光照度2 500～3 000 lx，光照時間12 h/d，每個配比接種20瓶，每瓶接入5個小段，觀察苗木增殖情況。

1.2.4 ?生根的誘導 ?挑選生長良好的增殖苗，在超凈臺中切成2～3 cm的帶腋芽或嫩梢小段，轉入生根培養基中，生根培養基采用3個配比（C1：1/2 MS+ 0.5 mg/L IBA +3 g/L活性炭;C2：1/2MS+0.8 mg/L IBA +3 g/L活性炭;C3：1/2MS+1.0 mg/L IBA +3 g/L活性炭）。培養溫度（25±1）℃，光照度2 500～3 000 lx，光照時間12 h/d，每個配比接種20瓶，每瓶接入5個小段，觀察苗木生根情況[5]。

2 ?結果與分析

2.1 ?愈傷組織誘導情況

由表1可知，A1、A3培養基的誘導率高于A2和A4培養基，且誘導效果較好，表明NAA濃度低有利于芽點的形成，濃度高反而不利于芽點的形成。而A1、A3兩種培養基相比較，雖然誘導情況相似，但誘導率不同，A1培養基誘導率為72%，而A3培養基達到了90%，明顯高于A1培養基。因此，A3培養基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3）為最佳的誘導培養基。

2.2 ?不定芽誘導增殖分化情況

2.2.1 ?愈傷組織生長情況 ?接種到增殖培養基后，小段基部陸續有愈傷組織形成，愈傷組織中形成芽點，分化出叢生芽，連同小段一同生長，到第23天時生長速度下降， 20 d時愈傷組織生長情況見表2。由表2可以看出，雖然各培養基形成的愈傷組織大小狀況不同，但均有愈傷組織形成，B2、B3、B4、B5、B6、B7培養基形成的愈傷組織均比B1培養基的大，表明添加IAA和NAA兩種生長素均有愈傷組織的促進作用。但在實際生產中，形成的愈傷組織過大或過小均對愈傷組織上叢生芽的分化生長有影響，形成愈傷組織的最佳面積應在0.7～1.4 cm2。B5、B6、B7配方中形成的中等大小愈傷組織面積塊多，表明配方中添加NAA更有利于叢生芽的分化生長。

2.2.2 ?不定芽增殖分化情況 ?由表2可以看出，配方中添加NAA更有利于叢生芽的分化生長，因此第2次增殖轉接時選用B5、B6、B7號培養基，轉接后23 d進行測量統計嫩莖的生長情況見表3。由表3可以看出，3種培養基生長系數均大于2.00，表明3種培養基均可以進行擴繁，B6培養基莖段的生長系數最大，其次是B5，而B7最小。B6生長系數大，其苗生長的要比其他兩種培養基高，轉接時較高的植株截取段數也會增多，通常能截取3～4段。因此，B6培養基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA）最為理想，有利于擴繁。

2.3 ?生根誘導情況

帶腋芽或嫩梢小段轉入生根培養基后，定期觀察苗木的生根情況，在轉接后第10天及第15天時統計生根數，到第25天時統計生根率及生根量，結果見表4。由表4可以看出，C2培養基在第10天及第15天，生根數一直最高，25 d時C2培養基生根率最高，達到了100%。C2培養基生根時間相對集中，在第15天時，已經有96%生根，另生根量平均3～6條，比C1、C3培養基多，可見C2培養基（1/2 MS+ 0.8 mg/L IBA+3 g/L活性炭）最為理想。

3 ?結論與討論

通過4個誘導培養基配方比較，得知MS+0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA +1.0 mg/L GA3培養基最適合芽的誘導，先形成少量的愈傷組織，然后愈傷組織形成芽點，生長出芽。在增殖擴繁培養中，采用了7個配方，添加細胞分裂素6-BA及不同濃度的生長素IAA和NAA，在愈傷組織形成階段可以得出IAA不適合，其誘導的愈傷組織塊比較大，不利于萌發芽，通過進一步對NAA不同濃度添加量進行比較，得出MS+0.5 mg/L 6-BA +0.04 mg/L NAA配方中苗木生長系數大，平均苗木生長量大，有利于擴繁，得出其為最佳的增殖配方。在生根階段，采用3個配比，添加不同激素濃度的IBA，得出1/2 MS+0.8 mg/L IBA +3 g/L活性炭配方生根效果最好，生根率達到了100%，而且生根時間相對比較集中。

本試驗主要是在離體培養3個主要階段的培養基配方上進行比較，由于整個離體培養過程情況比較復雜，具體到每個階段的具體條件及出瓶條件的選取等，還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1] 要 ?令，樓松良.番茄新品種“蒙特羅”高產栽培技術[J].農業科技通訊，2010（7）：212-213.

[2] 馬 ?杰，邱棟梁.番茄組培再生體系優化研究[J].中國農學通報，2011，27（8）：185-189.

[3] 周金梅，宮敬利.不同培養基配方對L-402番茄愈傷組織的誘導研究[J].北方園藝，2010（21）：158-160.

[4] 甘中祥，李倍金，張錄霞，等.加工番茄未成熟種子培養[J].北方園藝，2012（5）：137-138.

[5] 何秀霞，陸一鳴，白杰英，等.番茄組織培養體系的建立及其影響因素的研究[J].內蒙古民族大學學報（自然科學版），2003，18（1）：30-34.

[6] 曹慧穎，張立軍，夏潤璽，等.番茄組織培養研究進展[J].中國蔬菜，2012（16）：142-145.

[7] 張麗梅.番茄組織培養與試管苗繁育[J].安徽農業科學，2012，40（7）：3869-3871.endprint