在線凝膠滲透色譜/氣相色譜—串聯質譜法測定蔬菜中49種農藥殘留組分

蔣治國+王博超+殷雪琰+堵燕鈺+羅漪漣

摘 要：該文研究建立了蔬菜中49種農藥的多殘留分析方法。前處理采用改進的QuEChERS方法，樣品經乙腈提取，氯化鈉和無水硫酸鎂鹽析后，經N-丙基乙二胺（PSA）、C18填料和無水硫酸鎂混合型固相分散凈化，提取液過濾膜后，用在線GPC/GC-MS-MS在多反應監測模式（MRM）下進行檢測和確證。結果表明：49種農藥的殘留組分在50μg/kg的添加量下，用同種樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率為66%～114%，相對標準偏差為0.4%～16.8%；用相近樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對標準偏差為0.4%～12.7%。該方法具有樣品前處理簡單、分析時間短、凈化效果好等優點，在大批量的蔬菜農藥多殘留檢測領域有很好的應用前景。

關鍵詞：在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜；QuEChERS法；農藥殘留；蔬菜

中圖分類號 F767.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）22-129-06

蔬菜中農藥殘留是農藥使用后一段時期內沒有被分解而殘留于蔬菜上的微量農藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質的總稱。各地在防治蔬菜病蟲害時，普通存在大量使用化學農藥現象，長江流域城市一般每年每667m2使用農藥2～3kg，多的達5kg以上[1]。農藥的大量使用，使得蔬菜中農藥殘留量超標問題日益突出[2-3]。GC-MS雖然方法靈敏度和特異性較高，但由于難以完全闡明化合物的結構裂解信息，定性準確度方面尚有欠缺，容易產生假陽性結果[4]。凝膠滲透色譜凈化技術能有效地去除樣品基質中的色素等干擾物質，但常規的凝膠滲透色譜多采用離線方式，樣品處理時間長、溶劑消耗大、操作繁瑣[5]。本研究采用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜聯用技術，結合大體積進樣，針對3種蔬菜樣品，以改進的QuEChERS方法為前處理手段，通過優化色譜質譜條件，建立了蔬菜中49種農藥殘留的定性確證和定量測定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜儀（GPC/GC-MS-MS），配有程序升溫（PTV）進樣口和電子轟擊離子（EI）源（日本島津公司）；T-25型高速組織勻漿機（德國IKA公司）；5804R型冷凍離心機（美國艾本德公司）；MS3型漩渦混合器（德國IKA公司），24位氮吹儀（美國Organomation公司）。

1.1.2 試劑 正己烷、丙酮、乙腈（色譜純，CNW公司）；PSA（粒徑范圍40～63μm，平均孔徑60?，CNW公司）；C18填料（美國安捷倫公司）；無水硫酸鎂、氯化鈉（AR，上海國藥集團），500℃灼燒4h，置于干燥器中備用。實驗用水為超純水（經Milli-Q超純水器純化）。49種農藥標準品均購于農業部環境保護科研監測所。標準溶液的配制：用丙酮配成標準儲備液（100mg/L），儲存于-20℃冰箱中備用，使用時再用丙酮逐級配制成1mg/L的混標，然后根據檢測要求采用基質本底液稀釋成相應的基質匹配標準工作溶液。基質匹配標準工作溶液現用現配。

1.2 樣品前處理 將蔬菜樣品切碎，充分混勻后放入食品加工器粉碎成勻漿。稱取10g（精確至0.1g）樣品于50mL離心管中，加入乙腈10mL，高速勻漿5min，加入NaCl 1g、無水MgSO4 4g，劇烈振搖1min后以5 000r離心10min，取乙腈層1mL于2mL指形管中，加入無水MgSO4100mg、PSA和C18填料各40mg，漩渦混合0.5min后以5 000r離心3min，取上清液過0.22μm微孔濾膜，收集于1.5mL進樣瓶中，供在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜儀測定。

1.3 色譜質譜條件

1.3.1 GPC條件 CLNpak EV-200凝膠滲透色譜柱（2mm×150mm）；流動相為環己烷-丙酮混合溶液（7∶3），流速0.1mL/min；進樣量5μL。

1.3.2 色譜條件 色譜柱：惰性熔融石英毛細管柱（5m×0.53mm），DB-5MS預柱（5m×0.25mm×0.25μm），DB-5MS分析柱（25m×0.25mm×0.25μm）；載氣：氦氣（純度99.999%）；恒線速度模式，流速：1.0mL/min；柱溫箱升溫程序：初始溫度82℃保持5min，以8℃/min升溫到300℃，保持7.75min，分析時間約40min；PTV進樣口升溫程序：初始溫度120℃保持5min，以100℃/min迅速升溫到250℃，保持33.7min。

1.3.3 質譜條件 離子源溫度：230℃；傳輸線溫度300℃；電離模式：電子轟擊電離（EI）；轟擊能量：70eV；Q2碰撞氣：氬氣（純度≥99.999%）；溶劑延遲時間：9min；檢測器電壓：調諧電壓+0.6kv；數據采集模式：MRM。

2 結果與分析

2.1 凈化條件的確定 由于蔬菜中含有大量色素、水分和少量油脂，因此在樣品提取液的凈化過程中，選擇了C18、PSA和無水MgSO4作為凈化劑去除干擾。C18屬于反相吸附劑，可有效除去基質中的脂肪和脂類等非極性有機物，PSA可除去少量色素，無水MgSO4可進一步去除有機層中的水分。為提高測定的回收率水平，在確定凈化條件時，未選擇吸附能力較強的石墨化炭黑（GCB），而是通過充分利用在線GPC的優點、提高進樣口襯管維護頻率和增加色譜柱預柱的手段來滿足實際樣品分析的要求。

2.2 在線GPC的作用 在在線GPC中注入敵敵畏和氯氰菊酯的混合標準溶液，采用得到的標準溶液出峰時間進行定位，使得目標物在進入色譜/質譜分析前和分析后排出了大量的干擾物質，使基質干擾的問題得到解決，同時取代了經典的GPC凈化方式，縮短了分析過程，從而實現了樣品從凈化到分析檢測的自動化，提高了實驗室的工作效率，大大幫助了前處理過程中凈化條件的確定，為盡量減少凈化劑的種類和數量，降低其吸附能力起到了關鍵作用。endprint

2.3 同種基質標分析下的回收率與精密度 在優化條件下對49種農藥殘留在芥藍、甘藍、西葫蘆3種蔬菜中進行50μg/kg添加量的加標回收率實驗，每個加標平行4次，采用同種樣品基質配制標樣進行定量，回收率和相對標準偏差如表1所示。由此可見，用同種樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率為66%～114%，相對標準偏差（RSD）為0.4%～16.8%。

2.4 相近基質標分析下的回收率與精密度 在優化條件下對49種農藥殘留在甘藍、西葫蘆2種蔬菜中進行50μg/kg添加量的加標回收率實驗，每個加標平行4次，采用相近樣品芥藍基質配制標樣進行定量，回收率和相對標準偏差如表2所示。由此可見，用相近樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對標準偏差（RSD）為0.4%～12.7%。

3 結論與討論

本文利用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜聯用技術（GPC/GC-MS-MS）進行測定，采用改進的QuEChERS方法對樣品進行前處理，建立了蔬菜中49種農藥殘留的測定方法。由于在實際監測工作中，每次抽檢的蔬菜種類復雜多樣，且數量較多，采用同種樣品基質配制標樣定量較為困難，而采用相近樣品基質配制標樣定量，除少數幾種農藥參數外，大部分農藥的準確性和精密度均能滿足大批量蔬菜中多農殘快速分析的要求，而且在實踐中具有較強的可操作性。蔬菜的基質類型越相近，得到結果的準確度越高。基質劃分的原則可以參照蔬菜類型，如：茄果類、葉菜類、十字花科類、瓜類等；另外，含糖量、含酸量以及強烈的特殊氣味也是需要考慮的因素，如：同為茄果類蔬菜的番茄和茄子，最好不要一起定量，蘿卜雖然也是十字花科類的蔬菜，但也最好不要同甘藍一起定量。

參考文獻

[1]閆實，張靜.氣質聯用測定甘藍、韭菜中農藥多殘留方法研究[J].農業環境與發展，2010（2）：77.

[2]劉衛東，劉傳娟，劉鳳枝，等.農業環境污染突發事件調查評估的研究[J].農業環境與發展，2008（1）：28-31.

[3]張麗萍，張妙仙.環境災害學[M].北京：科學出版社，2008.

[4]賈瑋，黃峻榕，凌云，等.高效液相色譜-串聯質譜法同時測定茶葉中290種農藥殘留組分[J].分析測試學報，2013（1）：10.

[5]張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質譜聯用法測定水果中11種苯氧羧酸類農藥[J].分析測試學報，2013（1）：80.

（責編：張宏民）endprint

2.3 同種基質標分析下的回收率與精密度 在優化條件下對49種農藥殘留在芥藍、甘藍、西葫蘆3種蔬菜中進行50μg/kg添加量的加標回收率實驗，每個加標平行4次，采用同種樣品基質配制標樣進行定量，回收率和相對標準偏差如表1所示。由此可見，用同種樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率為66%～114%，相對標準偏差（RSD）為0.4%～16.8%。

2.4 相近基質標分析下的回收率與精密度 在優化條件下對49種農藥殘留在甘藍、西葫蘆2種蔬菜中進行50μg/kg添加量的加標回收率實驗，每個加標平行4次，采用相近樣品芥藍基質配制標樣進行定量，回收率和相對標準偏差如表2所示。由此可見，用相近樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對標準偏差（RSD）為0.4%～12.7%。

3 結論與討論

本文利用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜聯用技術（GPC/GC-MS-MS）進行測定，采用改進的QuEChERS方法對樣品進行前處理，建立了蔬菜中49種農藥殘留的測定方法。由于在實際監測工作中，每次抽檢的蔬菜種類復雜多樣，且數量較多，采用同種樣品基質配制標樣定量較為困難，而采用相近樣品基質配制標樣定量，除少數幾種農藥參數外，大部分農藥的準確性和精密度均能滿足大批量蔬菜中多農殘快速分析的要求，而且在實踐中具有較強的可操作性。蔬菜的基質類型越相近，得到結果的準確度越高。基質劃分的原則可以參照蔬菜類型，如：茄果類、葉菜類、十字花科類、瓜類等；另外，含糖量、含酸量以及強烈的特殊氣味也是需要考慮的因素，如：同為茄果類蔬菜的番茄和茄子，最好不要一起定量，蘿卜雖然也是十字花科類的蔬菜，但也最好不要同甘藍一起定量。

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[5]張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質譜聯用法測定水果中11種苯氧羧酸類農藥[J].分析測試學報，2013（1）：80.

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2.3 同種基質標分析下的回收率與精密度 在優化條件下對49種農藥殘留在芥藍、甘藍、西葫蘆3種蔬菜中進行50μg/kg添加量的加標回收率實驗，每個加標平行4次，采用同種樣品基質配制標樣進行定量，回收率和相對標準偏差如表1所示。由此可見，用同種樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率為66%～114%，相對標準偏差（RSD）為0.4%～16.8%。

2.4 相近基質標分析下的回收率與精密度 在優化條件下對49種農藥殘留在甘藍、西葫蘆2種蔬菜中進行50μg/kg添加量的加標回收率實驗，每個加標平行4次，采用相近樣品芥藍基質配制標樣進行定量，回收率和相對標準偏差如表2所示。由此可見，用相近樣品基質配制標樣進行定量的加標回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對標準偏差（RSD）為0.4%～12.7%。

3 結論與討論

本文利用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯質譜聯用技術（GPC/GC-MS-MS）進行測定，采用改進的QuEChERS方法對樣品進行前處理，建立了蔬菜中49種農藥殘留的測定方法。由于在實際監測工作中，每次抽檢的蔬菜種類復雜多樣，且數量較多，采用同種樣品基質配制標樣定量較為困難，而采用相近樣品基質配制標樣定量，除少數幾種農藥參數外，大部分農藥的準確性和精密度均能滿足大批量蔬菜中多農殘快速分析的要求，而且在實踐中具有較強的可操作性。蔬菜的基質類型越相近，得到結果的準確度越高。基質劃分的原則可以參照蔬菜類型，如：茄果類、葉菜類、十字花科類、瓜類等；另外，含糖量、含酸量以及強烈的特殊氣味也是需要考慮的因素，如：同為茄果類蔬菜的番茄和茄子，最好不要一起定量，蘿卜雖然也是十字花科類的蔬菜，但也最好不要同甘藍一起定量。

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[5]張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質譜聯用法測定水果中11種苯氧羧酸類農藥[J].分析測試學報，2013（1）：80.

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