E-鈣黏蛋白在三陰性乳腺癌組織中的表達

孫 弢，姚宇鋒，龔建平，秦建偉，唐金海

(1.滁州市第一人民醫(yī)院普外科，安徽 滁州239000;2.江蘇省腫瘤醫(yī)院普外科，江蘇 南京210009)

E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)是一種細胞黏附分子，具有維持組織結(jié)構(gòu)的完整性等作用，其在乳腺癌組織中表達降低甚至缺失［1］，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用［2］，作者回顧性分析本院經(jīng)手術(shù)病理確診的147 例三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)患者的臨床病理資料，探討E-cad 在TNBC 組織中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2006年1月至2010年12月收治的TNBC 患者147 例，均為女性，中位年齡49(22 ～73)歲。所有患者均為初診可手術(shù)患者并經(jīng)術(shù)后病理確診為浸潤性乳腺癌，免疫組化檢測確診為ER、PR 和HER-2 的表達均為陰性。其中浸潤性導管癌127 例，浸潤性小葉癌12 例，其他類型8 例。術(shù)后病理學分期:I期81 例，Ⅱ期40 例，Ⅲ期26 例。所有病例術(shù)后均參照NCCN 指南進行規(guī)范化的化療、放療等綜合治療。

1.2 免疫組化染色 采用Envision 兩步法完成免疫組化染色，檢測ER、PR、HER-2 和E-cad 的表達情況。組織經(jīng)體積分數(shù)10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片，0.01 mmol·L-1枸櫞酸鹽(pH 6.0)抗原修復液中微波修復15 min，按試劑盒要求步驟進行操作。用已知陽性標本作為陽性對照，以PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 ER、PR 陽性定位于細胞核，E-cad、HER-2 陽性定位于細胞膜。陽性百分率采用計數(shù)估計半定量判斷標準，即選取5 個不同高倍鏡視野，計數(shù)500 個細胞，計算出其中陽性細胞數(shù)的百分率。ER、PR、E-cad 陽性細胞數(shù)≥10%為陽性，＜10%為陰性;HER-2 陽性細胞數(shù)＜10% 為(- )，10% ～25% 為(+)，26% ～50%為(++)，＞50%為(+++)，(-)和(+)為陰性，(++)和(+++)為陽性。

1.4 隨訪 所有患者接受定期隨訪復查，復查包括臨床體檢、腫瘤標志物檢測、影像學檢查等，隨訪至患者死亡或截至2011年12月，隨訪時間以月為單位。患者無病生存時間為手術(shù)日期至首次局部復發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移確診日期，總生存時間為手術(shù)日期至患者死亡日期。1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0 進行統(tǒng)計分析，不同E-cad 表達組間臨床病理資料比較采用χ2檢驗，生存曲線用壽命表法繪制，生存率間差異的比較用Wilcoxon 檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 E-cad 表達與臨床病理特征的關系 147 例TNBC 中，E-cad 陽性表達率32%(47/147)，陰性表達率68%(100/147)。E-cad 表達與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型等因素無關(P ＞0.05)，而與腫塊大小、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P ＜0.05)。見表1。

2.2 E-cad 表達與患者預后的關系 所有病例均完成定期隨訪復查，截至2011年12月，中位隨訪時間為45(5 ～70)個月。壽命表法繪制生存曲線顯示E-cad陰性表達組的5 a 無病生存率和5 a 總生存率分別為27%、61%，陽性表達組分別為65%、89%，2 組比較差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。見圖1、2。

3 討論

TNBC 是ER、PR、HER-2 均陰性表達的乳腺癌亞型，在所有乳腺癌中占15% ～26%［3-4］。由于TNBC分化差、組織學分級高，因此臨床上容易發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移，預后不良［5］。目前TNBC 尚缺乏特異性的治療靶點，不能從內(nèi)分泌治療及分子靶向治療中獲益，因此尋找有效的治療靶點是TNBC 治療的關鍵。

表1 E-cad 表達與臨床病理特征的關系

圖1 不同E-cad 表達TNBC 患者5 a 總生存曲線

E-cad 是一種細胞與細胞之間的鈣調(diào)節(jié)黏附分子，在維持細胞上皮的正常結(jié)構(gòu)、細胞增殖和侵襲中發(fā)揮重要的作用。既往研究［1-2］發(fā)現(xiàn)在約70%的原發(fā)性乳腺腫瘤中存在E-cad 的表達減少甚至缺失，E-cad下調(diào)是上皮間質(zhì)化的標志，正是由于E-cad 的功能缺失導致細胞與細胞之間的黏附力下降，促使上皮間質(zhì)化的發(fā)生，進而引起腫瘤轉(zhuǎn)移。本文結(jié)果顯示:在TNBC 組織中E-cad 的陽性表達率為32%(47/147)，陰性表達率68%(100/147)，存在較高的缺失表達，與文獻［6-7］相符，說明E-cad 缺失在TNBC 的發(fā)展過程中具有重要作用。

圖2 不同E-cad 表達TNBC 患者5 a 無病生存曲線

既往研究［8］發(fā)現(xiàn)，E-cad 水平的下降與乳腺癌的不良預后有關，但是其在TNBC 中的研究數(shù)據(jù)很少，且存在不同的結(jié)論。Kashiwagi 等［7］雖然沒有發(fā)現(xiàn)E-cad的表達與TNBC 的臨床病理特征之間關系，但是隨訪顯示E-cad 缺失表達的患者具有較低的總生存率和較短的無病生存時間。作者發(fā)現(xiàn)在TNBC 中，E-cad 的缺失與不良預后相關因素有關，包括較大的腫瘤體積、較高的組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。在5 a 隨訪時間內(nèi)，E-cad 陰性表達組的總生存率與無病生存率也顯著低于E-cad 陽性表達組。

正是由于E-cad 在乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移中的重要作用，重新恢復E-cad 的表達能夠抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。目前尚無針對E-cad 通路的特異性藥物來誘導E-cad基因的表達，但是許多抗腫瘤藥物能夠通過各種機制上調(diào)E-cad 的表達，研究［9-10］顯示阿霉素能夠誘導乳腺癌細胞中E-cad 的表達，術(shù)前化療也能增加E-cad的表達。雌激素受體拮抗劑三苯氧胺能上調(diào)E-cad 的表達，而雌二醇能下調(diào)E-cad 的表達［11-12］。因此在TNBC 中系統(tǒng)深入的研究E-cad 通路，研制特異性上調(diào)E-cad 表達的藥物具有積極的意義。

［1］Singhai R，Patil VW，Jaiswal SR，et al.E-Cadherin as a diagnostic biomarker in breast cancer［J］.N Am J Med Sci，2011，3(5):227 -233.

［2］Thiery JP.Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression［J］.Nat Rev Cancer，2002，2(6):442 -454.

［3］Carey LA，Perou CM，Livasy CA，et al.Race，breast cancer subtypes，and survival in the Carolina Breast Cancer Study［J］. JAMA，2006，295(21):2492 -2502.

［4］Rakha EA，El-Rehim DA，Paish C，et al.Basal phenotype identifies a poor prognostic subgroup of breast cancer of clinical importance［J］.Eur J Cancer，2006，42(18):3149 -3156.

［5］Bauer KR，Brown M，Cress RD，et al.Descriptive analysis of estrogen receptor (ER)-negative，progesterone receptor (PR)-negative，and HER2-negative invasive breast cancer，the so-called triple-negative phenotype:a population-based study from the Californiacancer Registry［J］.Cancer，2007，109(9):1721 -1728.

［6］Tang D，Xu S，Zhang Q，et al.The expression and clinical significance of the androgen receptor and E-cadherin in triple-negative breast cancer［J］.Med Oncol，2012，29(2):526 -533.

［7］Kashiwagi S，Yashiro M，Takashima T，et al. Significance of Ecadherin expression in triple-negative breast cancer［J］.Br J Cancer，2010，103(2):249 -255.

［8］Gould Rothberg BE，Bracken MB. E-cadherin immunohistochemical expression as a prognostic factor in infiltrating ductal carcinoma of the breast:a systematic review and meta-analysis［J］. Breast Cancer Res Treat，2006，100(2):139 -148.

［9］Yang SZ，Kohno N，Kondo K，et al.Adriamycin activates E-cadherin-mediated cell-cell adhesion in human breast cancer cells［J］.Int J Oncol，1999，15(6):1109 -1115.

［10］Turner JR，Torres CM，Wang HH，et al.Preoperative chemoradiotherapy alters the expression and prognostic significance of adhesion molecules in Barrett’s-associated adenocarcinoma［J］. Hum Pathol，2000，31(3):347 -353.

［11］Oesterreich S，Deng W，Jiang S，et al. Estrogen-mediated downregulation of E-cadherin in breast cancer cells［J］. Cancer Res，2003，63(17):5203 -5208.

［12］張紅艷，李彥姝，王春玉，等.乳腺癌細胞系中雌激素下調(diào)E -鈣粘蛋白表達水平［J］. 解剖科學進展，2012，18(1):15 -17，21.