硒與川芎嗪配伍對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用

遼寧衛生職業技術學院衛檢教研室(110101)范 穎 董 瑤 徐國鋒 馬月嬌

在缺血性疾病搶救和治療過程中，目前發現對組織造成損傷的主要因素不是缺血本身，而是恢復血液供應后出現了更加嚴重的腦機能障礙。腦缺血再灌注損傷發生機制十分復雜，與自由基的生成、細胞內鈣超載、興奮性氨基酸毒性、白細胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有關。多項實驗研究證明，這種病理生理變化存在一定的藥物干預性［1，2］。本實驗從硒與川芎嗪配伍對腦缺血再灌注損傷保護機制的研究，探討中藥復方制劑對其防治作用的可行性。

1 材料與方法

1.1 動物 SD大鼠50只，雌雄各半，體重(200±20)g，由遼寧長生生物技術有限公司提供。

1.2 藥物與試劑 亞硒酸鈉由沈陽市第五試劑廠生產，批號1304151，臨用時用生理鹽水配制。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 大鼠腦缺血再灌注損傷模型 參考文獻方法［3］，取健康大鼠腹腔注射3%戊巴比妥后固定于手術臺上。沿頸中線剪開頸部皮膚，分離雙側頸總動脈。用小動脈夾夾閉雙側頸總動脈30分鐘后，松開雙側小動脈夾再灌注60分鐘，縫合頸部皮膚。其他組麻醉后頸部切開，分離雙側頸總動脈，不夾閉。

1.3.2 分組及給藥 50只大鼠隨機分成5組。即假手術組、缺血再灌注組、硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組。1)假手術組:只繞頸總動脈穿線，不結扎。2)缺血再灌注組:術后4周生理鹽水灌胃處理。3)硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組:術后4周分別以亞硒酸鈉生理鹽水溶液0.625mL/100g、川芎嗪注射液1.25mL/100g、硒與川芎嗪配伍液1.875mL/100g灌胃處理。

1.3.3 指標檢測 抗凝頸總動脈血以3000r/min離心10分鐘，取上清液分別測定GSH-Px、MDA和SOD含量。測定時按照試劑盒說明書嚴格操作。

2 結果

缺血再灌注組與假手術組相比，MDA含量明顯高于假手術組(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量明顯低于假手術組(P＜0.05)。硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組與缺血再灌注組相比，MDA含量明顯低于缺血再灌注組(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量明顯高于缺血再灌注組(P＜0.05)。硒加川芎嗪組分別與硒組、川芎嗪組相比，MDA含量低于硒組、川芎嗪組(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量高于硒組、川芎嗪組(P＜0.05)。見表1。

表1 硒與川芎嗪配伍對大鼠腦缺血再灌注損傷血漿中SOD、GSH-Px、MDA含量()

表1 硒與川芎嗪配伍對大鼠腦缺血再灌注損傷血漿中SOD、GSH-Px、MDA含量()

注:缺血再灌注組與假手術組比較，*P＜0.05;硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組與缺血再灌注組比較，#P＜0.05。硒加川芎嗪組分別與硒組、川芎嗪組比較，△P＜0.05。

3 討論

大量自由基產生及其導致的質膜、細胞器膜脂質過氧化反應是腦缺血再灌注損傷的重要致病機制［4］。有效地自由基清除對腦缺血再灌注損傷可以起到重要的保護作用［5］。

MDA是體內重要的氧自由基代謝產物，能較好地反應組織過氧化程度。其含量是反映機體抗氧化潛在能力的重要參數，可以反應機體脂質過氧化速率和強度，也能間接反映組織過氧化損傷程度。缺氧可使腦組織生成大量氧自由基，氧自由基作用于細胞膜上的不飽和脂肪酸使膜脂質產生過氧化反應，進而導致細胞的損傷，并形成脂質過氧化物。本實驗中，硒與川芎嗪配伍能顯著降低大鼠腦缺血再灌注損傷時MDA含量，從而減少脂質過氧化反應。

SOD能專一性清除體內有害自由基，解除因自由基氧化體內某些組成成分而造成的機體損害。正常細胞內有自由基清除劑SOD，使氧自由基轉變為過氧化氫，后者又通過觸酶及GSH-Px的作用還原為水和分子氧，故小量氧自由基并不造成損傷。再灌注時產生了大量的氧自由基，造成內源性自由基清除系統活性降低［6］。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映機體硒水平。硒是GSH-Px酶系的組成成分，它能催化GSH變為GSSG，使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物，從而保護細胞膜的結構及功能不受過氧化物的干擾及損害。本實驗中，硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組均能能明顯增加缺血再灌注組血漿中SOD和GSH-Px的含量，而硒加川芎嗪組比硒組、川芎嗪組增加血漿中SOD和GSH-Px的含量更為明顯。

實驗結果表明，硒與川芎嗪配伍能明顯抑制腦缺血組織中SoD、GSH的降低以及MDA的增高。硒與川芎嗪聯合用藥比單獨用藥更能增強缺血腦組織清除氧自由基的能力。

［1］學海，楊永舉，曹奕豐，等.干預前后腦血管血液動力學指標對比分析［J］.中國公共衛生，2003，19(6):664

［2］孟慶年.川芎嗪注射液加補陽還五湯治療急性腦梗塞38例［J］.中西醫結合實用臨床急救，1999，6(1):12.

［3］汪遠金，申國明，王欽茂.川芎嗪對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.安徽中醫學院學報，2000，19(1):44

［4］陳玉敏，陳濤平，馮浩樓.腦缺血再灌注損傷機制與治療現狀［J］.醫學研究與教育，2012，29(6):47

［5］劉忠民，李向群，何麗婭，等.自由基在大鼠腦缺血再灌注損傷時的作用及藥物防護［J］.數理醫藥學雜志，1997，10(4):347

［6］Dimagl U，Lindauer U，Them A.Global cerebral ischemiain the rat:online monitoring of oxygen free radical productionusing chemiluminescence in vivo［J］.J Cereb Blood Flow Metab，1995，15(6):925