辛伐他汀對高同型半胱氨酸血癥大鼠心肌梗死再灌注后無復流的影響及其機制

邵望舒 姜雅秋 張 華 (吉林大學白求恩第一臨床醫院心內科，吉林 長春 3002)

高同型半胱氨酸(Hhcy)血癥是近年來確認的心肌梗死(MI)獨立的危險因素〔1〕，不亞于高血壓、糖尿病、高脂血癥等因素的影響。再灌注治療是急性MI(AMI)最重要的治療方法。但治療過程中有高達5%～25%的患者會發生無復流現象(NRP)〔2〕，嚴重影響了AMI患者的預后。AMI再灌注后NRP的發生由多種因素所致，主要與氧化應激反應、炎癥反應和微血管結構、功能的異常相關。本實驗通過建立Hhcy血癥AMI再灌注模型，檢測大鼠血漿Hcy、丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、可溶性細胞間黏附因子(sICAM-1)、人蛋白S(P-S)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌鈣蛋白(Tn-I)的水平，觀察MI再灌注后NRP的范圍，旨在觀察Hhcy對大鼠AMI再灌注后NRP的影響，評價辛伐他汀對Hhcy大鼠AMI再灌注后NRP的作用，并探討其發生機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 SD大鼠，體重130～160 g，沈陽醫學院實驗動物中心提供〔SCXK(遼)2010-0001，遼寧省科學技術廳簽發〕，飼料為繁育鼠全價固體顆粒飼料，沈陽市于洪區前民動物飼料廠提供。L-半胱氨酸、伊文氏藍，Sigma公司產品。辛伐他汀(片劑)，天津施維雅制藥有限公司。Hcy、MDA、CAT、sICAM-1、P-S、SOD、TN-I檢測試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.2 實驗方法 SD大鼠隨機分為四組，雌性各半。正?？瞻捉M(10只)、正常對照組(12只):腹腔注射生理鹽水5 ml·kg-1·d-1，灌胃給予生理鹽水5 ml·kg-1·d-1;Hhcy模型組(12只):腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml·kg-1·d-1，灌胃給予生理鹽水5 ml·kg-1·d-1;辛伐他汀組(12只):腹腔注射2%L-半胱氨酸 5 ml·kg-1·d-1，灌胃給予辛伐他汀 3.5 ml·kg-1·d-1。所有大鼠均飼以常規動物飼料和水。連續給藥12 w后3%戊巴比妥鈉腹腔注射45 mg/kg麻醉，結扎冠狀動脈左室支90 min，再灌注90 min。以ST段明顯抬高為結扎成功的標志。正常空白組只穿線不接扎。實驗結束后每組隨機選2只大鼠，進行伊文氏藍心肌染色，并計算NRP范圍。余大鼠取血檢測血漿Hcy、MDA、CAT、sICAM-1、P-S、SOD、TN-I的水平。

1.3 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行分析，所得數據用s表示，兩組間數據對比采用配對t檢驗。

2 結果

2.1 AMI再灌注后心肌NRP范圍 采用Image-Pro Plus彩色圖像處理系統測量左心室室壁心肌面積及無復流區域的面積。正常對照組2只大鼠NRP區域與左心室面積比例分別為14.17%、16.30%;Hhcy模型組分別為30.47%、29.03%;辛伐他汀組分別為13.77%、14.58%。

2.2 血漿TN-I的比較 正常對照組大鼠血漿TN-I水平顯著高于正常空白組;Hhcy組明顯高于正常對照組。辛伐他汀組大鼠血漿Hcy水平與Hhcy組比較無明顯變化，但可使大鼠血漿TN-I含量顯著降低。見表1。

表1 辛伐他汀對Hhcy大鼠各組血漿中Hcy、TN-I含量的影響(s，n=10)

表1 辛伐他汀對Hhcy大鼠各組血漿中Hcy、TN-I含量的影響(s，n=10)

與正常空白組比較:1)P＜0.001;與Hhcy模型組比較:2)P＞0.05

組別 Hcy(μmol/L)TN-I(pg/ml)正?？瞻捉M 5.26±0.61 102.8±28.2正常對照組 4.93±0.51 191.1±12.41)Hhcy模型組 19.88±5.031) 220.4±18.41)辛伐他汀組 19.45±5.171)2) 148.8±31.62)

2.3 血漿SOD、CAT、MDA的比較 與正?？瞻捉M比較，正常對照組大鼠血漿 SOD、CAT活性顯著降低，MDA水平顯著升高。與正常對照組比較，Hhcy組大鼠MDA水平明顯升高，SOD、CAT活性明顯降低。辛伐他汀組可使Hhcy大鼠血漿MDA含量降低，SOD、CAT活性升高。見表2。

表2 辛伐他汀對Hhcy大鼠各組血漿中SOD、CAT、MDA含量的影響(s，n=10)

表2 辛伐他汀對Hhcy大鼠各組血漿中SOD、CAT、MDA含量的影響(s，n=10)

與正?？瞻捉M比較:1)P＜0.001;與正常對照組比較:2)P＜0.001;與Hhcy模型組比較:3)P＜0.001;下表同

組別 SOD(U/ml)CAT(U/ml)MDA(nmol/ml)正?？瞻捉M 132.8±14.8 22.36±1.74 4.99±1.01正常對照組 101.2±15.11) 10.37±1.311) 8.50±1.591)Hhcy模型組 65.5±8.72) 5.70±1.712) 12.60±2.122)辛伐他汀組 100.6±14.03) 17.81±1.633) 8.34±1.633)

2.4 血漿sICAM-1、P-S的比較 與正?？瞻捉M比較，正常對照組大鼠血漿 sICAM-1、P-S含量顯著升高。與正常對照組比較，Hhcy組大鼠sICAM-1、P-S含量顯著升高。辛伐他汀組可使Hhcy大鼠血漿sICAM-1、P-S含量降低。見表3。

表3 辛伐他汀對Hhcy大鼠各組血漿中sICAM-1、P-S含量的影響(s，n=10)

表3 辛伐他汀對Hhcy大鼠各組血漿中sICAM-1、P-S含量的影響(s，n=10)

組別 sICAM-1(ng/L)P-S(ng/L)正?？瞻捉M 1.28±0.10 9.66±0.87正常對照組 1.89±0.081) 12.09±0.801)Hhcy模型組 1.98±0.142) 16.11±2.832)辛伐他汀組 1.61±0.173) 12.41±1.013)

3 討論

在AMI再灌注模型中，通過伊文氏藍染色心肌，再灌注區域呈藍色，NRP區域不著色。本實驗顯示TN-I與心肌梗死的范圍呈正相關〔3，4〕。

SOD、CAT是機體抗氧化酶體系的重要成員之一，可有效清除超氧陰離子自由基，防止脂質過氧化，保護細胞免受損傷。MDA是機體氧自由基引發脂質過氧化的反應產物，可反映機體氧自由基的水平，從而間接反映出細胞損傷的程度。sICAM-1、P-S為細胞黏附因子家族的成員之一，正常情況下表達很微弱，缺血再灌時大量表達，介導白細胞與血管內皮細胞之間的黏附，促進炎癥反應，增加NRP的發生。

辛伐他汀是常見的調脂藥物，大量研究表明，其除具有調脂作用外，還具有抗氧自由基作用〔5〕，可抑制炎癥反應〔6〕，并可抑制缺氧復氧心肌細胞凋亡〔7〕。可降低心血管事件發生率，減少缺血再灌注MI面積，對心臟有保護作用。

目前對辛伐他汀在心血管疾病尤其在心肌缺血再灌注損傷中的作用及機制的研究很少。本實驗研究表明辛伐他汀雖不能降低血漿Hcy濃度，但可明顯降低MI再灌注后NRP的范圍，降低血漿 TN-I、MDA、sICAM-1、P-S 水平，提高 SOD、CAT 活性，對Hcy及缺血再灌注引起的氧化應激反應有明顯的抑制作用，同時可降低炎癥反應，從而有效防止NRP的發生，起到再灌注時期心肌保護的作用，降低氧化應激反應、炎癥反應可能是其機制之一。

1 寧玉珍，陳鳳英，崔曉迎，等.急性心肌梗死患者血漿同型半胱氨酸水平與冠狀動脈病變的相關性研究〔J〕.實用心腦肺血管病雜志，2012;20(6):959-61.

2 Kelly RV，Cohen MG，Stouffer GA.Incidence and managenment of＇no-reflow＇following percutaneous coronary interventions〔J〕.Am J Med Sci，2005;329(2):78-85.

3 邱 曼，孫樂標.急性心肌梗死患者生化指標的變化與心肌梗死范圍的研究〔J〕.重慶醫學，2012;41(26):2765-7.

4 Correché RE，Andujar SA，Kurdelas RR，et al.Antioxidant and cytotoxic activities of canadine:biological effects and structural aspects〔J〕.Bioorg Med Chem，2008;16(7):3641-51.

5 Ravingerová T，Adameová A，Kelly T，et al.Changes in PPAR gene ex-pression and myocardial tolerance to ischaemia:relevance to pleiotropic effects of statins〔J〕.Can J Physiol Pharmacol，2009，87(12):1028-36.

6 Dombrecht EJ，Van Offel JF，Bridts CH，et al.Influence of simvastatin on the production of proinflammatory cytokines and nitric oxide by activated human chondrocytes〔J〕.Clin Exp Rheumatol，2007;25(4):534-39.

7 李 倩，武維恒，李東野，等.辛伐他汀在心肌細胞缺血再灌注中的作用及機制〔J〕.中華全科醫學，2011;9(11)1668-70.