云南紅景天對衰老模型大鼠的抗衰老作用

葉 剛 楊 銳 楊懷銘 (四川農業大學動物醫學院，四川 雅安 62504)

云南紅景天為景天科植物的根及全草〔1〕，主要產于我國云南省，湖北西部、四川、貴州和西藏有分布。紅景天全草都可入藥，氣微香、味苦、澀、寒，清熱解毒、燥濕，用于肺熱、脈熱、四肢腫脹。現代醫藥研究表明紅景天具有廣泛的藥理作用，包括抗缺氧、抗寒冷、抗缺氧、抗疲勞、抗輻射、抗腫瘤、強心、興奮中樞神經、調節內分泌、加強新陳代謝、增強免疫力等作用〔2〕。本文探討云南紅景天對亞急性衰老模型大鼠的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1 藥品 維生素E由青島雙鯨藥業有限公司提供;氯化鈉注射液由山東齊都藥業有限公司提供;云南紅景天購自成都市新都區國際商貿城荷花池中藥材專業市場。云南紅景天為其干燥根及根莖，粉碎后過120目篩后進行用純化水進行超聲提取。提取時料液為1∶20，在60℃下提取30 min，過濾，濾液備用。重復提取3次，合并提取液，置水浴濃縮至浸膏，將浸膏凍干，每克干膏相當于生藥2.403 g。

1.2 試劑 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒，均由南京建成科技有限公司提供;D-半乳糖，由美國amresco公司提供。

1.3 動物 健康SD大鼠50只，雌雄各半，由四川省人民醫院實驗動物研究所提供，生產許可證為SCXK(川)2013-15。在溫度為(23±2)℃、濕度為(50±10)%、12 h光照交替的環境中飼養。自由進食顆粒標準飼料、引用自來水，每天添加飼料、換水1次，每2 d換墊料1次。適應性喂養1 w后根據性別編號，隨機分為空白對照組，模型對照組，云南紅景天小劑量(0.3 g/kg)、中劑量(0.6 g/kg)及大劑量(1.2 g/kg)組，維生素E組(100 mg/kg)。每組10只，雌雄各5只。

1.4 造模及給藥 除空白對照組，其余大鼠皮下注射D-半乳糖造模。大鼠頸部每天皮下注射5%D-半乳糖120 mg/kg 42 d造成衰老模型。空白對照組大鼠頸部皮下注射等體積的氯化鈉注射液。各組大鼠在造模第13天起開始灌胃30 d，云南紅景天小劑量組、中劑量組和大劑量組大鼠分別按0.3、0.6、1.2 g/kg給藥，維生素E組100 mg/kg給藥，正常對照組和模型對照組以自來水進行給藥，各組給藥體積均為10 ml/kg。

1.5 測定指標 各組大鼠末次給藥后禁食不禁水24 h，眼底取血，室溫下靜置待血液完全凝固后離心，分離血清進行生化指標測定。各大鼠脫臼處死，迅速分離肝臟和大腦組織，氯化鈉溶液沖洗后制備10%組織勻漿，離心，分離得組織勻漿上清液進行生化指標測定。SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量分別采用黃嘌呤氧化酶法、二硫代二硝基苯甲酸法和硫代巴比妥酸分光法測定。操作嚴格按照試劑盒說明書。

1.6 統計學處理 應用SPSS15.0軟件進行方差分析。

2 結果

2.1 各組血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量比較 與正常對照組相比，模型對照組血清SOD活性和GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，血清MDA含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，云南紅景天中劑量組和大劑量組血清SOD活性和GSH-Px活性顯著升高(P均＜0.05)，血清MDA含量顯著降低(P均＜0.05)，并且云南紅景天低劑量組、中劑量組和高劑量組血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量差異顯著(P均＜0.05)。見表1。

2.2 各組肝臟組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的比較 與正常對照組比較，模型對照組肝臟組織SOD活性和GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，肝臟組織MDA含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，云南紅景天中劑量組和大劑量組大鼠肝臟組織SOD活性和GSH-Px活性顯著升高(P均＜0.05)，血清肝臟組織MDA含量顯著降低(P均 ＜0.05)，并且云南紅景天低劑量組、中劑量組和高劑量組肝臟組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量差異顯著(P＜0.05)。見表1。

2.3 各組大腦組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的影響 與正常對照組比較，模型對照組大腦組織SOD活性和GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，大腦組織MDA含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，云南紅景天中劑量組和大劑量組大腦組織SOD活性和GSH-Px活性顯著升高(P均＜0.05)，大腦組織MDA含量顯著降低(P均＜0.05)，并且云南紅景天低劑量組、中劑量組和高劑量組大腦組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量差異顯著(P均＜0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血清、肝臟和大腦組織血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的比較(n=10，s)

表1 各組大鼠血清、肝臟和大腦組織血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的比較(n=10，s)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與模型對照組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01;與小劑量組比較:4)P＜0.05，5)P＜0.01;與中劑量組比較:6)P＜0.05，7)P＜0.01

血清肝臟組織大腦組織組別SOD活性(U/ml)GSH-Px活性(U/ml)MDA含量(nmol/ml)SOD活性(U/ml)GSH-PX活性(U/ml)MDA含量(nmol/ml)SOD活性(U/ml)GSH-Px活性(U/ml)MDA含量(nmol/ml)±1.85 1.73±0.28模型對照組 127.46±11.561)63.14±5.251)6.97±0.631)114.35±10.471)72.35±6.341)3.64±0.281)54.28±5.211)8.27±0.941)4.26±0.311)小劑量組 130.29±11.27 66.39±5.62 6.89±0.59 118.73±11.47 75.47±6.75 3.48±0.27 55.79±5.25 8.59±0.84 3.99±0.37中劑量組 142.86±12.662)4)75.52±6.762)5)5.56±0.522)5)132.47±11.763)4)86.42±7.523)5)2.74±0.253)5)63.74±5.433)5)10.29±1.573)5)3.17±0.343)5)大劑量組 158.67±12.843)5)6)85.54±6.532)5)7)5.02±0.483)5)6)145.68±12.173)5)6)95.47±7.743)5)6)2.16±0.293)5)7)69.54±5.573)5)6)13.47±1.743)5)7)2.37±0.293)5)7)維生素E組 164.37±13.743)86.15±6.963)4.87±0.503)148.45±12.763)106.37±8.463)1.76±0.43 71.16±6.243)14.56±1.723)2.14±0.303)正常對照組 173.52±14.73 87.69±6.73 4.75±0.55 156.43±12.33 113.47±8.46 1.56±0.25 76.42±6.73 15.48

3 討論

近年研究表明自由基及其代謝產物引起的脂質過氧化可導致老化與老年性疾病〔3〕。機體內時刻產生著自由基，但同時SOD、GSH-Px共同組成消除自由基的酶系防御體系，兩者維持平衡。隨著年齡的增長，機體的氧化和抗氧化系統之間平衡發生變化，抗氧化酶活性降低而導致機體清除氧自由基的能力減弱，體內積累的氧自由基使類脂質中不飽和脂肪酸發生過氧化反應，細胞膜結構受到破壞而導致細胞死亡，引起衰老、退行性疾病和腫瘤等的發生〔4～6〕。SOD和GSH-Px活性是與機體氧化還原狀態密切相關〔7〕，是評價機體衰老的重要指標。SOD是體內清除氧自由基的關鍵酶，可清除H2O2，·OH和O2-·，其含量的高低可以反映出組織的抗氧化能力。GSH-Px是機體內催化過氧化分解的酶，廣泛存在機體內。GSH-Px可特異性催化GSH對H2O2的還原反應，抑制鹽酸胺腺嘌呤二核苷酸形成HO-，可保護細胞膜結構和功能的完整性〔8〕。MDA作為脂質的過氧化產物，與機體內自由基的產生情況和機體組織細胞的脂質過氧化程度密切相關，可反映出機體組織的氧化應激的損傷狀態，也作為評價衰老的重要指標之一〔9，10〕。

D-半乳糖衰老模型大鼠是研究藥物抗衰老的重要動物模型〔11〕，得到自由基衰老學說的支持和驗證，常用于衰老機制研究和抗氧化劑、延緩衰老藥物的藥效學評價。本研究說明衰老大鼠造模成功。云南紅景天為景天科植物的根及全草，故又名云南景天、三臺觀、鐵腳蓮〔1〕。云南紅景天主含紅景天苷，含量約為0.76%。云南紅景天可能通過提高機體抗氧化和清除機體自由基能力而延緩衰老，其抗衰老的物質基礎及其分子機制需進一步研究。

1 陳孝雨，蔣桂華，王亞云，等.17種紅景天的品質研究與開發現狀〔J〕.華西藥學雜志，2010;25(2):224-8.

2 王云美，王元忠，趙自仙，等.大花紅景天中鎘和鉛的電感耦合等離子體原子發射光譜法測定〔J〕.時珍國醫國藥，2010;21(5):1062-3.

3 楊蘭澤，王宜娟，李三強，等.白藜蘆醇的抗衰老作用〔J〕.中國老年學雜志，2013;33(3):628-9.

4 袁淑蘋，馬生吉，周小平.補益營衛方對D-半乳糖衰老模型抗氧化酶及免疫因子的影響〔J〕.時珍國醫國藥，2013;24(2):259-60.

5 程莉娟，劉群良，譚 峰，等.還少丹對D-半乳糖致衰小鼠的抗衰老作用〔J〕.湖南中醫藥大學學報，2012;32(12):11-3.

6 Reiter RJ，Paredes SD，Korkmaz A，et al.Melatonin in relation to the“strong”and“weak”versions of the free radical theory of aging〔J〕.Adv Med Sci，2008;53(2):119-29.

7 Yin J，Zhangwen ZW，Jun Y，et al.stachydrine，a major constituent of the Chinese herb leonurus heterophyllus sweet，ameliorates human umbilical vein endothelial cells injury induced by anoxia-reoxygenation〔J〕.AJCM，2010;38(1):157-71.

8 王春梅，李香艷，崔新穎.酸櫻桃汁對衰老模型小鼠的抗衰老作用及其機制〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(3):455-7.

9 Brunk UT，Terman A.Lipofuscin:mechanisms of age-related accumulation and influence on cell function〔J〕.Free Radic Biol Med，2002;33(5):611-9.

10 崔 瑋，楊愛梅，李玉蘭.藏藥甘青虎耳草總黃酮的抗衰老作用〔J〕.中國老年學雜志，2013;33(4):877-9.

11 Chen B，Zhong Y，Peng W，et al.Increased mitochond rial DNA damage and decreased base excision repair in the audjlory conex of D-galactoseinduced aging rats〔J〕.Mol Biol Rep，2011;38(6):3635-42.