結(jié)腸腺癌患者癌組織MDM2、TBX2和Pokemon表達及相關(guān)性

崔 婷 魏 強 (中衛(wèi)市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，寧夏 中衛(wèi) 755000)

結(jié)腸腺癌患者進展較快，且病變進展與基因和蛋白密切相關(guān)。TBX2基因是T-BOX基因基因家族成員之一，其編碼蛋白TBX2是一個指導組織器官軸向發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子，TBX2在多種腫瘤中高表達〔1，2〕。MDM2是從一個含有雙微體的自發(fā)轉(zhuǎn)化的BALB/3T3細胞中克隆出來的一個高度擴增基因，學者認為其高度擴增與腫瘤性進程有關(guān)〔3，4〕。Pokemon是調(diào)節(jié)腫瘤進展的原癌基因，可促進多種蛋白異常釋放〔5，6〕。本實驗關(guān)注結(jié)腸腺癌患者癌組織TBX2、MDM2和Pokemon表達及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料 我院2010年1月至2013年11月行結(jié)腸癌根治手術(shù)患者119例術(shù)后均留取新鮮組織，置于-80℃冰箱中凍存。均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)2008版診斷標準，同時由病理醫(yī)師再次確診并分型。術(shù)前均未進行放療和化療。男60例，女59例，年齡52～76(平均67.7)歲。選取距腫瘤邊緣＞5 cm的正常結(jié)腸黏膜新鮮組織78例為對照組，樣本保存方法同上。男40例，女38例，年齡54～73(平均65.4)歲。兩組一般臨床特征無明顯差別(P均＞0.05)。

1.2 流式細胞術(shù)檢測TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達 實驗用兔抗人TBX2、MDM2和Pokemon蛋白均由福建邁新公司代購。將凍存的新鮮標本取出后置于75%的酒精中存放24～48 h，用眼科剪子剪碎組織后過濾，制備1×106/ml的單細胞懸液，取1 ml，嚴格按實驗步驟加入一抗及二抗后上機檢測，應(yīng)用美國BC公司生產(chǎn)的流式細胞儀及系統(tǒng)自帶軟件分析。

1.3 TBX2、MDM2和 Pokemon蛋白結(jié)果判讀 TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達應(yīng)用熒光指數(shù)(FI)。FI=(TBX2、MDM2或Pokemon蛋白表達的熒光強度)/對照樣品的平均熒光強度。

1.4 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行t檢驗和線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達量比較 兩組TBX2、MDM2和Pokemon表達量差別顯著(P＜0.000 1)。見表1。

表1 兩組TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達量比較(s)

表1 兩組TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達量比較(s)

TBX2 MDM2 Pokemon觀察組分組 n 119 1.43±0.24 1.38±0.38 1.39±0.28對照組 78 1.00±0.25 1.00±0.29 1.00±0.21 t/P值8.75/＜0.000 1 7.68/＜0.000 1 7.99/＜0.000 1

2.2 觀察組不同臨床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達比較 觀察組TBX2、MDM2和Pokemon表達與腫瘤分化程度、浸潤深度、臨床分期和 Ki67表達密切相關(guān)(P均 ＜ 0.05)。見表2。

表2 觀察組中不同臨床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達的比較(s)

表2 觀察組中不同臨床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達的比較(s)

臨床病理特征 n TBX2 χ2值 P值 MDM2 χ2值 P值 Pokemon t值 P值分化程度 高 55 1.28±0.32 6.43 0.008 2 1.23±0.32 7.64 0.0043 1.32±0.16 7.54 0.006 7中+低 64 1.54±0.25 1.48±0.31 1.46±0.41浸潤深度 未及漿膜 70 1.35±0.42 6.92 0.007 6 1.28±0.35 6.75 0.009 2 1.33±0.43 6.42 0.008 5漿膜及以外 49 1.60±0.32 1.49±0.25 1.48±0.26臨床分期 Ⅰ+Ⅱ 69 1.37±0.20 6.12 0.010 2 1.30±0.39 6.57 0.007 2 1.31±0.29 6.11 0.011 0Ⅲ+Ⅳ 50 1.54±0.25 1.50±0.28 1.50±0.34 Ki67表達 ＜25% 67 1.32±0.14 7.21 0.005 7 1.32±0.32 5.65 0.017 2 1.32±0.29 5.23 0.013 1≥25% 52 1.55±0.43 1.45±0.37 1.45±0.36

2.3 觀察組TBX2、MDM2和Pokemon表達相關(guān)性 觀察組TBX2和MDM2(r=0.49，P=0.014 3)表達正相關(guān);而TBX2和Pokemon、MDM2和Pokemon表達無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

結(jié)腸腺癌發(fā)病及進展中的癌基因促癌進展機制、浸潤性生長的過程和腫瘤細胞的異常增殖均是近年研究的熱點〔7〕。由此引發(fā)學者關(guān)注多種蛋白的結(jié)構(gòu)及其在腫瘤中調(diào)節(jié)的功能〔8〕。TBX2定位于17q23染色體，其編碼的蛋白TBX2主要通過其C末端的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用〔9〕，也有學者認為TBX2是一個具有指導胚胎、組織器官軸向發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子〔10〕。TBX2的作用還有:①與 RAS、MYC等相關(guān)基因協(xié)同作用，引起細胞癌變〔11〕;②TBX2可以抑制細胞衰老和凋亡進程，使細胞停滯在G/S和Q/M期，此時當TBX2的異常表達累積后，引起細胞突破臨界值，進而引起細胞的惡性轉(zhuǎn)化〔12〕;③TBX2通過抑制P21基因的表達抑制細胞凋亡，此種作用主要是與 TBX2參與 p21WAF1/CIP1突變的致瘤作用相關(guān)〔13〕。MDM2是P53的重要負性調(diào)節(jié)因子，通過P53途徑、非P53依賴途徑等多種方式調(diào)節(jié)細胞的增殖和凋亡進展。有學者認為MDM2在多種腫瘤中高表達，并認為其不僅促進腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移，還可以對判斷腫瘤的預后有一定作用〔14，15〕。Pokemon是由ZBTB7編碼的基因，具有2個外顯子和2個內(nèi)含子。Pokemon氨基末端的BTB/POZ結(jié)構(gòu)域被廣泛發(fā)現(xiàn)存在于人體細胞和組織中〔16，17〕，Pokemon家族羧基末端的鋅指結(jié)構(gòu)可以調(diào)節(jié)特定DNA的識別和結(jié)合，其作用機制是以染色質(zhì)重構(gòu)實現(xiàn)的〔18，19〕。

本實驗提示TBX2、MDM2和Pokemon可能對腫瘤的發(fā)生過程和癌變過程起重要促進作用，Pokemon是經(jīng)典的原癌基因，而TBX2和MDM2在結(jié)腸腺癌中的作用與癌基因類似，其調(diào)節(jié)過程中也可能具有相關(guān)級聯(lián)反應(yīng)的相關(guān)蛋白被激活。TBX2、MDM2和Pokemon參與腺癌的分化過程，分化是腫瘤惡變和腫瘤形成中內(nèi)在基因變化的鏡下特征，因此三種蛋白對腫瘤的成熟過程有重要影響。3種蛋白與腫瘤的侵襲性生長密切相關(guān)，結(jié)腸癌的浸潤生長過程中受到多種蛋白的調(diào)節(jié)，尤其是其在向肌層生長過程中，當TBX2、MDM2和Pokemon高表達，對肌層的破壞越強，腫瘤生長越快，腫瘤危險性明顯增加，分期越高。TBX2、MDM2和Pokemon的表達與臨床分期密切相關(guān)，由于臨床分期是判斷腫瘤生物學行為和預后的重要指標，因此三者蛋白高表達可能提示腫瘤患者預后較差。TBX2、MDM2和Pokemon蛋白作用過程中均對腫瘤異常增殖起明顯作用，也提示蛋白的異常表達使腫瘤細胞的增殖是失控狀態(tài)的。TBX2和MDM2在腫瘤進展中起協(xié)同作用。二者的聯(lián)系可能與內(nèi)在結(jié)構(gòu)有相似位點相關(guān)，也可能是通過對增殖的影響聯(lián)系在一起的。研究認為TBX2和MDM2在增殖活性過程中可能對細胞分裂有明顯增效作用〔20〕。此機制在結(jié)腸腺癌細胞增殖和分化過程中表現(xiàn)明顯。當TBX2和MDM2有效的活化后，能有效抑制細胞凋亡，促進細胞分化和細胞增殖進程，最終引起結(jié)腸腺癌細胞的異常增生并形成腫瘤，同時加速腫瘤侵襲和進展〔21〕。本實驗未發(fā)現(xiàn)Pokemon與其他兩種蛋白的協(xié)同作用，因此Pokemon的促癌機制是另有通路的〔22〕，其調(diào)節(jié)過程也有待更多實驗證實。

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