頭頸部鱗狀細胞癌組織中Smad7、Smad4蛋白的表達變化及意義

張 峰

(聊城市第二人民醫院，山東臨清252600)

研究［1］表明，Smad4及Smad7在多種腫瘤中均能通過調節轉化生長因子β(TGF-β)影響上皮—間質轉化(EMT)過程，而EMT在腫瘤侵襲、轉移過程中發揮重要作用。近年來，Smad4及Smad7在胃癌等惡性腫瘤組織中表達的研究較多，但兩者與頭頸部鱗狀細胞癌關系的報道較少見。2008年1月～2013年12月，我們觀察了頭頸部鱗狀細胞癌組織中Smad7、Smad4蛋白的表達變化，并分析了兩者表達與腫瘤臨床病理參數的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期于我院行頭頸部鱗狀細胞癌手術的患者101例(觀察組)，男59例、女42例，年齡28～61(51±5)歲，術前均未行放化療，術后病理檢查證實為低分化31例、中分化28例、高分化42例，腫瘤直徑≥10 mm者62例、＜10 mm者39例，有淋巴結轉移59例;選取性別、年齡等一般資料匹配的良性頭頸部病變患者49例(對照組)，男28例、女21例，年齡26～63(49±3)歲。觀察組術中留取腫瘤組織及距離腫瘤組織1 cm以外的癌旁組織，對照組均經活檢留取頭頸部正常組織。所有標本常規行HE染色，盡可能選取實性組織部分(避免囊變壞死區域)制作組織芯片，蠟塊包埋。

1.2 Smad4、Smad7 蛋白及 TGF-β1的檢測方法采用免疫組化SP法。所有標本常規脫蠟、梯度乙醇脫水，染色步驟嚴格按多克隆抗體和免疫組化檢測試劑盒(均為武漢博士德生物工程有限公司產品)說明書進行。染色完成后24 h內在光鏡(孚光精儀有限公司)下閱片并點片。Smad4、Smad7、TGF-β1陽性顆粒位于細胞質或細胞核內，陽性染色細胞數＜10%判為陰性。采用Sinicrope等［2］的判定標準對每張切片的陽性細胞數比例及著色深淺進行計分，積分數(IS)=陽性染色細胞百分率評分×染色強度評分。陽性染色細胞百分率判定標準:＜10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;染色強度判定標準:無著色或呈與背景均勻一致的淡黃色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。

1.3 統計學方法 采用SPSS14.0統計軟件。計量資料以±s表示，兩組間比較用成組t檢驗，多組間比較用方差分析;各變量間相關性分析采用Pearson等級相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中 Smad4、Smad7蛋白及 TGF-β1表達 TGF-β1及Smad7蛋白多在細胞質中表達，而Smad4蛋白多在細胞質和細胞核內表達且分布較為彌漫。TGF-β1和Smad7蛋白在腫瘤組織中的表達明顯高于癌旁組織和正常組織(F分別為5.71、7.31)，而Smad4蛋白在腫瘤組織中的表達明顯低于癌旁組織和正常組織(F為14.92)，P均＜0.05。詳見表1。

表1 不同組織中Smad4、Smad7蛋白及 TGF-β1表達比較(IS，± s)

表1 不同組織中Smad4、Smad7蛋白及 TGF-β1表達比較(IS，± s)

組織類別 Smad4蛋白 Smad7蛋白 TGF-β1腫瘤組織1.29 ±0.8 6.58 ±2.8 5.28 ±1.5癌旁組織 3.39 ±1.1 2.01 ±1.1 1.91 ±0.6正常組織4.42 ±1.2 0.65 ±0.4 0.52 ±0.3

2.2 頭頸部鱗狀細胞癌組織中Smad4、Smad7蛋白及TGF-β1表達與腫瘤臨床病理參數的關系 隨腫瘤分化程度增高，TGF-β1及Smad7蛋白表達呈降低趨勢(F 分別為 11.2、12.8)、Smad4 蛋白呈升高趨勢(F為7.91)，P 均 ＜0.05。Smad4蛋白表達與腫瘤直徑呈負相關，而Smad7蛋白表達與腫瘤直徑呈正相關，P均＜0.05;TGF-β1表達與腫瘤直徑無明顯相關性，P＞0.05。Smad4蛋白表達在有淋巴結轉移者明顯低于無轉移者，P＜0.05(t為6.92);有無淋巴結轉移者Smad7蛋白及TGF-β1表達比較，P＞0.05。詳見表2。

2.3 頭頸部鱗狀細胞癌組織中Smad4、Smad7蛋白及TGF-β1表達的關系 Smad4蛋白表達與TGF-β1呈負相關(r=-0.32，P ＜0.05)，與 Smad7 蛋白呈正相關(r=0.39，P ＜0.05)。

3 討論

表2 Smad4、Smad7 蛋白及 TGF-β1表達與腫瘤臨床病理參數的關系(IS，±s)

表2 Smad4、Smad7 蛋白及 TGF-β1表達與腫瘤臨床病理參數的關系(IS，±s)

臨床病理參數 Smad4蛋白 Smad7蛋白 TGF-β1分化程度低1.02 ±0.5 6.82 ±2.5 5.92 ±1.5中1.21 ±0.9 6.59 ±1.9 5.31 ±1.9高1.64 ±0.8 6.33 ±1.4 4.61 ±1.3淋巴結轉移有1.13 ±0.3 6.39 ±1.1 5.32 ±1.5無1.72 ±0.5 6.51 ±1.2 5.39 ±1.3腫瘤直徑(mm)≥10 1.22 ±0.3 6.71 ±1.5 5.49 ±1.2＜10 1.69 ±0.3 6.39 ±1.2 5.36 ±1.1

TGF-β1是TGF-β家族中的主要成員，廣泛參與細胞分化、增殖、凋亡等過程［3～5］，其自分泌抑制作用消失可能是導致細胞惡性轉化的重要途徑［6］。多位學者［7～8］認為，胃癌組織中 TGF-β1蛋白表達明顯高于非腫瘤胃黏膜組織，且其表達水平隨胃癌分化程度降低而升高。、本研究表明，TGF-β1在頭頸部鱗狀細胞癌組織中的表達水平明顯高于癌旁組織和正常組織，且隨腫瘤分化程度增高呈降低趨勢。證實TGF-β1在頭頸部鱗狀細胞癌的惡性轉化中起重要作用。

Smad是Mad和Sma蛋白及其類似物的統稱，此蛋白家族是TGF-β信號轉導的關鍵蛋白，對腫瘤的抑制、轉化、侵襲起重要作用。Smad蛋白表達異常可引起傳導通路紊亂，導致腫瘤發生［9］。在Smad家族中，Smad4是目前被證實的惟一共同通道型蛋白，主導TGF-β信號的轉導，對腫瘤發生起到至關重要的作用。Smad4在多種腫瘤中均發現表達缺失，在胃癌、胰腺癌中的表達缺失程度與病理組織分級相關［10］，在腸癌和宮頸癌中的表達缺失率分別達30%［11］、24.4%［12］，其表達水平越低患者預后越差［13］。本研究表明，Smad4蛋白在腫瘤組織中的表達明顯低于癌旁組織和正常組織，隨腫瘤分化程度增高呈升高趨勢，與腫瘤直徑呈負相關，在有淋巴結轉移者明顯低于無轉移者。提示Smad4蛋白表達與腫瘤侵襲、轉移有關，可作為評估臨床遠期療效的重要指標之一。有關Smad7的研究較少，尤其是與頭頸部鱗狀細胞癌的關系。一般認為，Smad7對TGF-β的轉化有抑制作用，其表達異常有助于腫瘤發生。本研究表明，Smad7蛋白在腫瘤組織中的表達明顯高于癌旁組織和正常組織，隨腫瘤分化程度增高呈降低趨勢。說明Smad7蛋白表達與腫瘤轉化、侵襲有關，亦可作為臨床預后評估的重要指標之一。本研究還顯示，Smad4蛋白表達水平與TGF-β1呈負相關，而與Smad7蛋白呈正相關。提示在TGF-β信號轉導過程中Smad4和Smad7起至關重要的作用，均與腫瘤發生有關。

綜上所述，頭頸部鱗狀細胞癌組織中Smad7、Smad4蛋白的表達異常，且可能通過調控EMT參與腫瘤的侵襲、分化;檢測兩者(尤其是Smad4蛋白)表達可為臨床分期、預后評估提供依據。

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