蝴蝶蘭花梗離體培養中褐變的控制研究

黃靖

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節為外植體，比較了附加不同激素的MS培養基以及不同培養條件對控制外植體褐變的影響。結果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對控制花梗褐變及誘導叢生芽效果最為顯著。

關鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養；褐變；控制

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風姿綽約、體態輕盈、花色秀麗、氣質飄逸，被譽為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發芽率極低，很難利用種子播種的方式來進行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側枝，也難以采用常規分株法進行無性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術，對于擴大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養是當前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產中存在著極易褐變夭折的問題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養的正常進行，包括芽的萌發和增殖效果，生長緩慢，嚴重時會導致培養材料死亡。為此，筆者針對蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問題進行了相關試驗研究，以期為蝴蝶蘭工廠化生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產。試驗用藥品均為分析純。

1.2 試驗方法 選取健壯無病蟲害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水沖洗干凈，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無菌水沖洗5～8次，無菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長莖段，每瓶接種一個外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質，進行蝴蝶蘭離體培養。在光照培養室溫度為25℃，光照強度2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對花梗褐變的影響 將基本培養基分別設置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進行觀察，一個月后統計結果見表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開始萌動，以后陸續萌芽，長出芽苗。MS培養基處理首先出現褐變，20d后1/2MS培養基處理也開始出現褐化現象；一個月后進行統計觀察，1/2MS培養基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀察，1/4MS培養基處理的腋芽生長狀態較差。因此，生產上應選擇1/2MS培養基或適時更換培養基，以防止無機營養缺乏。

2.2 不同激素配比對花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節為外植體，以l/2MS為基本培養基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個外植體，接種培養10d后開始觀察，培養一個月后統計結果見表2。由表2可知，培養基中不含外源激素時，培養30d后也有少量花梗腋芽萌發，但培養基褐化現象較重（43.3%）；在培養基中添加BA 3.0mg/L時，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數最高（83個），繼續添加BA 5.0mg/L萌芽數有所降低（57個），褐變現象最為嚴重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數及褐變率都在最優范圍內，分別為79個和26.7%。

2.3 不同添加物對花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復合有機物，含有豐富的氨基酸、礦物質、維生素和碳水化合物等，這些物質具有促進培養物的生長，提高存活率，減少褐化死亡現象的作用。抗壞血酸是植物組織培養中常用的抗褐變劑，其對外植體褐變的抑制多有報道。活性炭具有較強的吸附能力，對抑制褐變起重要作用。本試驗以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎培養基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達物質的培養一個月后統計結果見表3。從表3可知，附加活性炭的培養基能明顯抑制外植體褐變產生，但是由于活性炭不但對培養基中的醌類化合物有吸附作用，同時也吸附了部分分裂素、生長素、維生素等相關成分，在抑制褐化的同時也嚴重影響到芽的萌發和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養基效果較添加抗壞血酸的優。

2.4 不同培養條件對花梗褐變及生長的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養基上的蝴蝶蘭花梗節放置于不同溫度及不同光照的培養環境內，比較其褐變及生長情況，結果見表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節培養過程中溫度應比較恒定，若溫度過低，形成原球莖叢生芽所需時間較長，生長緩慢，若溫度過高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養對控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長緩慢，在暗培養一定時間后應移至常規光照條件下放置。

3 結論與討論

國內外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會犧牲母株，造成不必要的浪費。因此，在實際的生產中，現階段代替蝴蝶蘭莖尖培養的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進行培養，其花梗通常只有4～5個腋芽，腋芽啟動培養的效果直接關系到增殖培養時無菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進行蝴蝶蘭的快速無性繁殖更具有應用價值。蘭科植物在外植體誘導和原球莖分化培養時都存在褐變死亡的問題，因而減輕或控制褐變發生是蘭科植物組織培養研究的重要內容。

本研究針對蝴蝶蘭組培褐變問題進行了試驗研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養過程中有效控制褐變的方法。試驗表明：適當降低無機離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當的細胞分裂素BA與生長素NAA配比，在控制褐變及誘導叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對外源激素的吸附較大；在培養環境上，短期暗培養有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗材料生長緩慢，對于工廠化育苗意義不大。

參考文獻

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術研究[J].熱帶林業，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發棣，陳鳳，等.不同培養基及添加物對蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農業科學，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質元素對蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問題的研究進展[J].探索，2010（5）：362. （責編：張宏民）endprint

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節為外植體，比較了附加不同激素的MS培養基以及不同培養條件對控制外植體褐變的影響。結果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對控制花梗褐變及誘導叢生芽效果最為顯著。

關鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養；褐變；控制

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風姿綽約、體態輕盈、花色秀麗、氣質飄逸，被譽為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發芽率極低，很難利用種子播種的方式來進行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側枝，也難以采用常規分株法進行無性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術，對于擴大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養是當前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產中存在著極易褐變夭折的問題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養的正常進行，包括芽的萌發和增殖效果，生長緩慢，嚴重時會導致培養材料死亡。為此，筆者針對蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問題進行了相關試驗研究，以期為蝴蝶蘭工廠化生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產。試驗用藥品均為分析純。

1.2 試驗方法 選取健壯無病蟲害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水沖洗干凈，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無菌水沖洗5～8次，無菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長莖段，每瓶接種一個外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質，進行蝴蝶蘭離體培養。在光照培養室溫度為25℃，光照強度2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對花梗褐變的影響 將基本培養基分別設置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進行觀察，一個月后統計結果見表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開始萌動，以后陸續萌芽，長出芽苗。MS培養基處理首先出現褐變，20d后1/2MS培養基處理也開始出現褐化現象；一個月后進行統計觀察，1/2MS培養基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀察，1/4MS培養基處理的腋芽生長狀態較差。因此，生產上應選擇1/2MS培養基或適時更換培養基，以防止無機營養缺乏。

2.2 不同激素配比對花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節為外植體，以l/2MS為基本培養基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個外植體，接種培養10d后開始觀察，培養一個月后統計結果見表2。由表2可知，培養基中不含外源激素時，培養30d后也有少量花梗腋芽萌發，但培養基褐化現象較重（43.3%）；在培養基中添加BA 3.0mg/L時，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數最高（83個），繼續添加BA 5.0mg/L萌芽數有所降低（57個），褐變現象最為嚴重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數及褐變率都在最優范圍內，分別為79個和26.7%。

2.3 不同添加物對花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復合有機物，含有豐富的氨基酸、礦物質、維生素和碳水化合物等，這些物質具有促進培養物的生長，提高存活率，減少褐化死亡現象的作用。抗壞血酸是植物組織培養中常用的抗褐變劑，其對外植體褐變的抑制多有報道。活性炭具有較強的吸附能力，對抑制褐變起重要作用。本試驗以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎培養基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達物質的培養一個月后統計結果見表3。從表3可知，附加活性炭的培養基能明顯抑制外植體褐變產生，但是由于活性炭不但對培養基中的醌類化合物有吸附作用，同時也吸附了部分分裂素、生長素、維生素等相關成分，在抑制褐化的同時也嚴重影響到芽的萌發和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養基效果較添加抗壞血酸的優。

2.4 不同培養條件對花梗褐變及生長的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養基上的蝴蝶蘭花梗節放置于不同溫度及不同光照的培養環境內，比較其褐變及生長情況，結果見表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節培養過程中溫度應比較恒定，若溫度過低，形成原球莖叢生芽所需時間較長，生長緩慢，若溫度過高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養對控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長緩慢，在暗培養一定時間后應移至常規光照條件下放置。

3 結論與討論

國內外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會犧牲母株，造成不必要的浪費。因此，在實際的生產中，現階段代替蝴蝶蘭莖尖培養的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進行培養，其花梗通常只有4～5個腋芽，腋芽啟動培養的效果直接關系到增殖培養時無菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進行蝴蝶蘭的快速無性繁殖更具有應用價值。蘭科植物在外植體誘導和原球莖分化培養時都存在褐變死亡的問題，因而減輕或控制褐變發生是蘭科植物組織培養研究的重要內容。

本研究針對蝴蝶蘭組培褐變問題進行了試驗研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養過程中有效控制褐變的方法。試驗表明：適當降低無機離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當的細胞分裂素BA與生長素NAA配比，在控制褐變及誘導叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對外源激素的吸附較大；在培養環境上，短期暗培養有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗材料生長緩慢，對于工廠化育苗意義不大。

參考文獻

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術研究[J].熱帶林業，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發棣，陳鳳，等.不同培養基及添加物對蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農業科學，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質元素對蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問題的研究進展[J].探索，2010（5）：362. （責編：張宏民）endprint

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節為外植體，比較了附加不同激素的MS培養基以及不同培養條件對控制外植體褐變的影響。結果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對控制花梗褐變及誘導叢生芽效果最為顯著。

關鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養；褐變；控制

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風姿綽約、體態輕盈、花色秀麗、氣質飄逸，被譽為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發芽率極低，很難利用種子播種的方式來進行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側枝，也難以采用常規分株法進行無性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術，對于擴大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養是當前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產中存在著極易褐變夭折的問題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養的正常進行，包括芽的萌發和增殖效果，生長緩慢，嚴重時會導致培養材料死亡。為此，筆者針對蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問題進行了相關試驗研究，以期為蝴蝶蘭工廠化生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產。試驗用藥品均為分析純。

1.2 試驗方法 選取健壯無病蟲害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水沖洗干凈，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無菌水沖洗5～8次，無菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長莖段，每瓶接種一個外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質，進行蝴蝶蘭離體培養。在光照培養室溫度為25℃，光照強度2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對花梗褐變的影響 將基本培養基分別設置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進行觀察，一個月后統計結果見表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開始萌動，以后陸續萌芽，長出芽苗。MS培養基處理首先出現褐變，20d后1/2MS培養基處理也開始出現褐化現象；一個月后進行統計觀察，1/2MS培養基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀察，1/4MS培養基處理的腋芽生長狀態較差。因此，生產上應選擇1/2MS培養基或適時更換培養基，以防止無機營養缺乏。

2.2 不同激素配比對花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節為外植體，以l/2MS為基本培養基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個外植體，接種培養10d后開始觀察，培養一個月后統計結果見表2。由表2可知，培養基中不含外源激素時，培養30d后也有少量花梗腋芽萌發，但培養基褐化現象較重（43.3%）；在培養基中添加BA 3.0mg/L時，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數最高（83個），繼續添加BA 5.0mg/L萌芽數有所降低（57個），褐變現象最為嚴重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數及褐變率都在最優范圍內，分別為79個和26.7%。

2.3 不同添加物對花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復合有機物，含有豐富的氨基酸、礦物質、維生素和碳水化合物等，這些物質具有促進培養物的生長，提高存活率，減少褐化死亡現象的作用。抗壞血酸是植物組織培養中常用的抗褐變劑，其對外植體褐變的抑制多有報道。活性炭具有較強的吸附能力，對抑制褐變起重要作用。本試驗以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎培養基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達物質的培養一個月后統計結果見表3。從表3可知，附加活性炭的培養基能明顯抑制外植體褐變產生，但是由于活性炭不但對培養基中的醌類化合物有吸附作用，同時也吸附了部分分裂素、生長素、維生素等相關成分，在抑制褐化的同時也嚴重影響到芽的萌發和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養基效果較添加抗壞血酸的優。

2.4 不同培養條件對花梗褐變及生長的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養基上的蝴蝶蘭花梗節放置于不同溫度及不同光照的培養環境內，比較其褐變及生長情況，結果見表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節培養過程中溫度應比較恒定，若溫度過低，形成原球莖叢生芽所需時間較長，生長緩慢，若溫度過高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養對控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長緩慢，在暗培養一定時間后應移至常規光照條件下放置。

3 結論與討論

國內外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會犧牲母株，造成不必要的浪費。因此，在實際的生產中，現階段代替蝴蝶蘭莖尖培養的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進行培養，其花梗通常只有4～5個腋芽，腋芽啟動培養的效果直接關系到增殖培養時無菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進行蝴蝶蘭的快速無性繁殖更具有應用價值。蘭科植物在外植體誘導和原球莖分化培養時都存在褐變死亡的問題，因而減輕或控制褐變發生是蘭科植物組織培養研究的重要內容。

本研究針對蝴蝶蘭組培褐變問題進行了試驗研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養過程中有效控制褐變的方法。試驗表明：適當降低無機離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當的細胞分裂素BA與生長素NAA配比，在控制褐變及誘導叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對外源激素的吸附較大；在培養環境上，短期暗培養有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗材料生長緩慢，對于工廠化育苗意義不大。

參考文獻

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術研究[J].熱帶林業，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發棣，陳鳳，等.不同培養基及添加物對蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農業科學，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質元素對蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問題的研究進展[J].探索，2010（5）：362. （責編：張宏民）endprint