外周血 T細胞亞群、IL－32、IL－6水平在乙型肝炎患者的表達及相關性分析

滿昌軍，董香玉

（濟寧市傳染病醫院1.檢驗科；2.門診部，山東 濟寧272031）

乙型肝炎病毒（HBV）感染是世界范圍內導致慢性肝臟疾病最常見的原因，是全球關注的一個健康問題。全球慢性乙肝病毒感染者有3.5－4.0億人。在我國，乙型肝炎感染率高達60%[1]。乙型肝炎是一種與免疫相關的疾病，其對肝細胞的損傷并不是直接的，而是通過誘發機體的免疫反應間接損傷肝細胞[2]。乙型肝炎病毒侵入機體后，可以引起體液免疫應答和細胞免疫應答，其中T細胞介導的細胞免疫應答在清除病毒和誘導肝細胞損傷中具有重要意義。T細胞根據其表達分子的不同可以分為CD4＋T細胞和CD8＋T，在正常情況下，這兩種細胞相互協調，其比例維持在一定范圍內[3]。有研究表明，若其比例發生失調，CD4＋T與CD8＋T比值降低，則提示疾病嚴重且預后不良。而細胞因子則有調控T細胞分化的功能，如IL－6可以促進乙型肝炎病毒的感染，IL－32是一種促炎的細胞因子，可以激活多種途徑促進炎癥介質的釋放，誘導T細胞凋亡[4]。本研究中，我們對乙型肝炎患者外周血中的T細胞亞群以及細胞因子水平進行分析，以期為揭示乙型肝炎的發病機制提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年6月—2012年6月來我院就診的乙型肝炎患者120例，男性72例，女性48例，年齡24－62歲，平均年齡43歲，均為漢族。所有患者均符合《病毒性肝炎防治方案》的診斷標準，且在6個月內均未接受過保肝、抗病毒以及免疫調節治療，且排除其他亞型肝炎的感染，排除脂肪性肝炎、酒精性肝炎等其他肝炎，排除心血管疾病、自身免疫性疾病和腫瘤。120例患者中有急性乙型肝炎患者25例（急性乙肝組），慢性乙型肝炎95例（慢性乙肝組），其中輕度34例，中度31例，重度30例。同期選取來我院體檢健康的志愿者30例作為對照組，其中男19例，女11例，年齡22－62歲，平均年齡40.2歲。

1.2 標本采集

用含EDTA的真空管抽取空腹靜脈血10ml，分離血清，于－70℃保存。常規檢測肝功能和HBV DNA。

1.3 檢測方法

使用德國Partec公司生產的PAS流式細胞儀檢測T細胞亞群（T細胞亞群檢測盒購自上海億欣生物科技有限公司）；采用Elisa法檢測細胞因子IL－6（IL－6Elisa試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供）、IL－32（IL－32Elisa試劑盒由由南京森貝伽公司提供）水平。操作方法均按試劑盒說明書進行。

1.4 統計學分析

采用SPSS 11.0統計軟件進行統計分析，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK檢驗，相關性分析采用直線相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 外周血中T細胞亞群

通過流式細胞儀檢測和FlowJo軟件分析發現，與對照組相比，乙肝患者外周血中的CD4＋T細胞比例降低，CD4＋／CD8＋細胞的比值也降低，而CD8＋T細胞的比例升高，差異均有統計學意義（P＜0.05）。而急性乙肝以及輕、中、重度慢性乙肝之間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。進一步將乙肝患者分為HBV DNA（＋）組和HBV DNA（－）組進行分析發現，兩組之間T細胞亞群比例差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 乙肝患者與對照組外周血中T細胞亞群比較

2.2 血清中IL－32、IL－6的水平

通過Elisa法檢測細胞因子水平發現，與對照組相比，急性乙肝以及輕、中、重度慢性乙肝之間差異有統計學意義（P＜0.05），且各病例組與對照組血清中IL－32、IL－6水平平行比較均有差異有統計學意義（P＜0.001）。進一步將乙肝患者分為 HBV DNA（＋）組和HBV DNA（－）組進行分析發現，兩組之間血清中細胞因子水平差異無統計學意義（P＞0.05）。且IL－32水平在急性乙肝組最高，慢性乙肝組次之，且按照病情嚴重程度逐漸升高；而慢性乙肝組患者IL－6水平較急性乙肝組IL－6水平高，也隨著病情嚴重程度逐漸升高，見表2。

表2 乙肝患者與對照組血清中IL－32、IL－6水平比較

2.3 血清中肝功能指標變化情況

通過檢測血清中肝功能指標丙氨酸轉氨酶（ALT）、總膽紅素（TB）、白蛋白（ALB）發現，乙肝HBV DNA（＋）組與乙肝HBV DNA（－）組之間比較各項肝功能指標比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 乙肝患者血清中肝功能指標變化情況

2.4 血清中IL－32、IL－6水平與肝功能指標的相關性分析

通過對血清中IL－32、IL－6水平與肝功能指標進行相關性分析發現，乙型肝炎患者血清中的IL－32水平與丙氨酸轉氨酶、總膽紅素水平呈正相關（r＝0.57，P＜0.05；r＝0.69，P＜0.05），而與白蛋白水平呈負相關（r＝－0.45，P＜0.05）；血清中的IL－6水平也與丙氨酸轉氨酶、總膽紅素水平呈正相關（r＝0.38，P＜0.05；r＝0.39，P＜0.05），而與白蛋白水平呈負相關（r＝－0.43，P＜0.05）。

3 討論

乙型肝炎以其高發病率和隱性感染的特點逐漸成為研究的熱點，而乙型肝炎病毒感染后不同轉歸的機制卻尚不清楚[5]。在乙型肝炎病毒感染后，其轉歸受到病毒強弱及宿主免疫應答強弱雙方面的影響。

本研究探討了乙型肝炎侵犯宿主后機體產生的免疫應答。宿主的免疫功能主要表現為體液免疫應答和細胞免疫應答，而細胞免疫應答是以T細胞為主發揮功能的[6]，所以，研究外周血中的T細胞亞群及其比例能夠很好地反映機體免疫應答的變化。研究發現，乙肝患者外周血中的CD4＋T細胞比例降低，CD4＋T細胞與CD8＋T細胞的比值也降低，而CD8＋T細胞的比例升高，急性乙肝以及輕、中、重度慢性乙肝之間無明顯差異，且 HBV DNA（＋）與HBV DNA（－）兩組之間的T細胞亞群比例也無明顯差異。CD4＋T細胞包括 Th1、Th2、Th17、Treg細胞等亞群，各細胞亞群的比例失衡可能會引起細胞因子表達紊亂，導致病毒長期存在而不能被機體清除[7]。CD8＋T細胞主要包括殺傷性T細胞和抑制性T細胞，在病毒的清除過程中，殺傷性T細胞也起著較為重要的作用[8]。本研究發現，在乙型肝炎患者的外周血中CD8＋T細胞比例上調，可能是抑制性T細胞的比例升高導致免疫應答被抑制，使得機體不能及時清除乙肝病毒。

而細胞免疫除了與T細胞亞群及其比例有關，細胞因子的變化也在其中起著重要作用[9]。IL－6是一種由T細胞、單核細胞、成纖維細胞等產生的多效細胞因子[9]。在乙型肝炎病毒感染時，組織中有大量的單核巨噬細胞浸潤，導致肝臟產生炎癥并發生肝細胞壞死，從而激活單核巨噬細胞產生大量的IL－6[10]。而 研 究 顯 示，IL－23 可 以 誘 導 IL－6 的 產生[11]，在本研究中IL－32水平在急性乙肝組最高，在慢性乙型肝炎中，按照輕度、中度和重度的嚴重程度逐漸升高，提示IL－23可能通過誘導單核細胞向巨噬細胞分化，增強了吞噬功能，并進一步刺激IL－6以及其他促炎因子的產生，加重肝細胞壞死和肝臟損傷。

本研究分析血清中IL－32、IL－6水平與肝功能指標的相關性發現，乙型肝炎患者血清中的IL－32水平與ALT、TB水平呈正相關，而與ALB水平呈負相關（r＝－0.45，P＜0.05）；血清中的IL－6也表現出相似的相關性。說明在乙型肝炎病毒感染后，IL－32、IL－6參與了機體內環境的免疫應答，在肝臟損傷中起重要作用。

[1]王 煜，閆躍武，王海燕，等.乙肝病毒大蛋白在慢性乙型肝炎中檢測的臨床意義[J].寧夏醫科大學學報，2012，34（10）：1005.

[2]張 艷，許春梅，左維澤，等.乙型肝炎患者外周血T細胞亞群、IL－32、IL－6水平的變化及其臨床意義[J].胃 腸病學，2010，15（8）：471.

[3]劉 明，沈韻，陸 穎，等.慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T細胞亞群變化與其血清HBV DNA的水平分析[J].中國實驗診斷學，2008，12（2）：232.

[4]Raziorrouh B，Schraut W，Gerlach T，et al.The immunoregulatory role of CD244in chronic hepatitis B infection and its inhibitory potential on virus－specific CD8＋T－cell function[J].Hepatology，2010，52（6）：1934.

[5]楊智剛，李勇富，張 流，等.阿德福韋酯短程聯合拉米夫定治療慢性乙型肝炎療效分析[J].現代生物醫學進展，2012，12（6）：1146.

[6]Kitagishi Y，Kobayashi M，Yamashina Y，et al.Elucidating the regulation of T cell subsets（review）[J].Int j Mol Med，2012，30（6）：1255.

[7]Bemark M，Holmqvist J，Abrahamsson J，et al.Translational Mini－Review Series on B cell subsets in disease.Reconstitution after haematopoietic stem cell transplantation－revelation of B cell developmental pathways and lineage phenotypes[J].Clin Exp Immunol，2012，167（1）：15.

[8]李 生，陳欽艷.不同臨床類型乙型肝炎患者HBV血清標志物與HBV DNA含量關系的研究[J].廣西醫學，2012，34（10）：1279.

[9]孫書書，賈德興，孫翠蘭，等.轉化生長因子－β1與慢性乙型病毒性肝炎肝纖維化形成相關性探討[J].遼寧醫學院學報，2012，33（6）：499.

[10]Xiang WQ，Feng WF，Ke W，et al.Hepatitis B virus X protein stimulates IL－6expression in hepatocytes via a MyD88－dependent pathway[J].J Hepatol，2011，54（1）：26.

[11]Wang Q，Zhou J，Zhang B，et al.Hepatitis B Virus Induces IL－23 Production in Antigen Presenting Cells and Causes Liver Dam－age via the IL－23／IL－17Axis[J].PLoS Pathog，2013，9（6）：e1003410.