白細胞VCS參數在兒童支原體和細菌感染中的應用價值

崔 穎，趙曉丹，申東晉，馬 靜，遲冬梅，黃立娟

（哈爾濱醫科大學附屬第二臨床醫院 檢驗科，黑龍江 哈爾濱150086）

支原體和細菌感染均為兒科常見疾病。支原體感染的肺部體征輕，其病理形態可呈各種類型，疾病早期易誤診為細菌感染。血常規中白細胞計數（WBC）和中性粒細胞百分率明顯增高是診斷細菌感染的重要指標，但其影響因素很多。如果對細菌和支原體的鑒別診斷只基于白細胞計數和中性粒細胞百分比的改變，勢必造成部分患兒的漏診或誤診。美國貝克曼－庫爾特公司的LH 750血細胞分析儀采用白細胞體積、傳導率、激光散射（VCS）技術，對WBC在接近原始狀態下進行分析，除了檢測常規白細胞參數外，還可提供與細胞形態相關的參數，如細胞體積大小（V）、細胞漿和細胞核的比例（C）及細胞漿內顆粒的大小和密度（S）。迄今為止，VCS參數已廣泛用于細菌、瘧原蟲感染以及白血病診斷等的研究[1－3]。本研究將對支原體和細菌感染患兒外周血白細胞VCS參數的變化及臨床意義進行探討，旨在為小兒支原體和細菌感染的臨床診斷和鑒別診斷提供一種靈敏有效、快捷經濟的方法。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2011年1月－2012年12月哈醫大二院門診和住院處已確診的支原體和細菌感染患兒各60例。其中細菌感染組，男35例，女25例，年齡1－11歲，血培養陽性，同時排除外科手術、移植、腫瘤、血液病等。支原體感染組，男35例，女25例，年齡1－11歲，其診斷標準依據人民衛生出版社第七版《兒科學》。健康對照組為60例健康兒童，男35名，女25名，年齡1－11歲。WBC計數均在正常參考范圍內[（5.25－12.25）×109]，同時排除感染性及器質性病變，無肝功能異常，HBsAg陰性。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集：按測定要求采集受試者空腹靜脈血2.0mL于含有乙二胺四乙酸二鉀 （EDTA－K2，終濃度為20mg／ml全血）的真空采血管中，并充分混勻，2h以內上機完成分析。

1.2.2 檢測指標：白細胞計數（WBC）；中性粒細胞平均體積（MNV）、中性粒細胞體積分布寬度（NDW）、中性粒細胞平均傳導率（MNC）、中性粒細胞平均散射值（MNS）；淋巴細胞平均體積（MLV）、淋巴細胞體積分布寬度（LDW）、淋巴細胞平均傳導率（MLC）、淋巴細胞平均散射值（MLS）；單核細胞平均體積（MMV）、單核細胞體積分布寬度（MDW）、單核細胞平均傳導率（MMC）、單核細胞平均散射值（MMS）。

1.2.3 儀器和試劑 美國貝克曼－庫爾特公司LH 750血細胞分析儀及原裝配套試劑、定標液、質控液、VCS乳膠校準液。按儀器說明書進行校準、質量控制、保養及維護；美國BD公司BACTEC9240培養儀及各自配套的血培養瓶。

1.2.4 統計學處理 采用SPSS 10.0統計學軟件進行數據處理。檢測結果以均數±標準差（±s）表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK（q）檢驗，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗組與健康對照組的VCS參數比較

與健康對照組比較，支原體感染組的 WBC，MNV，NDW，MNC，MLC，MLS，MMV，MDW 和MMC明顯增高，而 MNS和 MMS明顯降低（P＜0.01）；細菌感染組的 WBC，MNV，NDW，MNC，MLC，MMV，MDW 和 MMC明顯增高，而 MNS、MLS和MMS明顯降低（P＜0.01）；其他指標無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2 支原體感染組與細菌感染組的VCS參數比較

支原體感染組MMV和MMC明顯增高，MNS和MMS明顯降低（P＜0.01）；而細菌感染組以MNV MNC和MNS明顯增高為特點（P＜0.01）。其他指標無統計學意義（P＞0.05），見表2、表3。

表1 各組WBC及中性粒細胞VCS參數（±s）

表1 各組WBC及中性粒細胞VCS參數（±s）

注：a：與健康時照組比較，P＜0.01；b：與細菌感染組比較，P＜0.01。

?

表2 各組淋巴細胞VCS參數（±s）

表2 各組淋巴細胞VCS參數（±s）

注：a：與健康時照組比較，P＜0.01。

?

表3 各組單核細胞VCS參數（±s）

表3 各組單核細胞VCS參數（±s）

注：a：與健康時照組比較，P＜0.01；b：與細菌感染組比較，P＜0.01。

?

3 討論

本研究發現支原體感染組MMV和MMC明顯增高，MNS和MMS明顯降低；而細菌感染組則以MNV和MNC明顯增高為特點。可能是因為中性粒細胞在抗細菌感染中發揮重要作用，而肺炎支原體能直接激活單核－巨噬細胞系統的緣故[4]。

肺炎支原體是介于病毒和細菌之間能自行繁殖的最小原核生物，是引起兒童呼吸道感染及非典型肺炎的主要病原體之一，占兒童肺炎的10%－40%。支原體侵入機體后引起一系列免疫反應，其中細胞免疫占有重要地位，各種炎性因子、抗原提呈細胞及T細胞參與其中[5]。單核／巨噬細胞作為重要的抗原提呈細胞可被支原體直接激活，其在吞噬病原體、抗原呈遞和分泌細胞因子的過程中，細胞體積及細胞內部結構發生很大的變化。胞體大小由于吞噬物的增加而逐漸增大，同時因吞噬物的多少不同，胞體大小極不一致，表現為MMV和MDW增大。細胞內部出現空泡增多，吞噬顆粒增加，復雜性增強等變化，引起VCS參數也發生相應改變，表現為MMC的升高和MMS的降低。此外，T淋巴細胞在支原體感染中也發揮重要作用，國外研究報道支原體對T淋巴細胞和B淋巴細胞具有絲裂原作用[6]。它在誘導淋巴細胞多克隆活化、增殖一段時間后，發生明顯的活化誘導細胞死亡現象，引起外周血成熟淋巴細胞凋亡加速。被活化的淋巴細胞表現為細胞體積增大，胞漿增多，細胞核著色變淺、疏松，可見到核仁。凋亡的淋巴細胞體積變小，胞質濃縮，胞核固縮、核染色質邊集，有的形成凋亡小體。這些細胞形態學的變化可以通過淋巴細胞VCS參數真實的反映出來，表現為 MLV的基本無變化及 MLC、MLS的明顯增加。另外，中性粒細胞在支原體感染過程中也被激活，但其作用遠小于前兩者。

當機體發生細菌感染時，中性粒細胞作為主要的吞噬細胞被激活，隨著中性粒細胞在殺滅病原體的過程中被消耗，骨髓在細胞因子刺激下釋放大量不成熟中性粒細胞到外周血，表現為中性粒細胞核左移，按照血細胞發育過程的形態演變規律，粒系細胞隨細胞逐漸成熟，體積由大變小，核漿比由大變小[7]。因此核左移引起中性粒細胞體積偏大伴大小懸殊，同時核漿比變大，因此表現為MNV、NDW和MNC的顯著升高。除了核左移之外，在病原體刺激下，中性粒細胞還會出現中毒顆粒、空泡、杜勒小體等毒性改變，對于MNS而言，中毒性顆粒可使其增高，但核左移又可使其降低。由于個體差異，機體對細菌感染的反應及表現往往不同，只有在外周血出現嚴重核左移時MNS才明顯降低，可見MNS在細菌感染時并不是一個非常敏感的指標。由于本研究中病例均為兒童，細菌感染時較成人更易于出現核左移、細胞核漿比升高等不成熟表現，因而使MNS在小兒細菌感染時有一定的敏感性，表現為降低，但降低幅度小于支原體感染組。除此之外，單核細胞和淋巴細胞在細菌感染過程中也發揮一定的作用。單核細胞在吞噬病原體、抗原呈遞和分泌細胞因子的過程中，細胞體積及細胞內部結構發生變化，表現為MMV、MDW和MMC升高，MMS降低，但程度均較支原體感染時低。淋巴細胞VCS參數的改變可能與病原微生物及其產物刺激淋巴細胞使外周血中出現異型淋巴細胞所致。

綜上所述，白細胞VCS參數是鑒別小兒支原體和細菌感染的有意義的指標，特別是在常規白細胞參數不能正確反映病人的臨床癥狀和體征時。VCS數據來源于血常規分析得出的結果，具有快速、客觀、經濟等優點，有很好的臨床應用前景。但國外相關研究表明VCS參數受人種的影響，同時國內現有數據也顯示我國健康人的VCS參數與國外資料中報道的數值確有差異[8]，目前亟待建立針對國人的VCS醫學參考范圍。

[1]郭希超，楊大干，俞研迎，等.白細胞VCS參數在血液細菌感染中的應用研究[J].中華檢驗醫學雜志，2008，31（12）：1330.

[2]Briggs C，DaCosta A，Freeman L，et al.Development of an automated malaria discriminant factor using VCS technology[J].Am J Clin Pathol，2006，126（5）：691.

[3]金 紅，楊肅文，金春蘭，等.VCS技術在急性白血病及其亞型判斷中的應用評價[J].中華檢驗醫學雜志，2010，33（8）：740.

[4]劉愛琳，李 利.小兒肺炎支原體感染與細菌感染血常規及C反應蛋白的比較[J].中國中西醫結合雜志，2010，2（4）：357.

[5]Yang J，Hooper WC，Phillips DJ，et al.Cytokines in Mycoplasma pneumoniae infection[J].Cytokine Growth Factor Rev，2004，15（2－3）：157.

[6]Romero RA，Ponce HC，Ciprian A，et al.Immunomodulatory properties of mycoplasma pulmonis I characterization of the immunomodulatory activity[J].Int Immunopharmacol，2001，1（9）：1679.

[7]Al－Gwaiz LA，Babay HH.The diagnostic value of absolute neutrophil count，band count and morphologic changes of neutrophils in predicting bacterial infections[J].Med Princ Pract，2007，16（5）：344.

[8]徐 超，嚴懷軍，何 丹.健康人白細胞VCS參數參考范圍的建立[J].Chin J Convalescent Med，2009，18（3）：262.