豬萎縮性鼻炎滅活疫苗免疫效果試驗(yàn)

李國(guó)江，劉 彪，鄭 偉，宋英華，尹柏雙

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，吉林 吉林 132101）

豬萎縮性鼻炎（AR）是由支氣管敗血波氏桿菌和產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌共同作用所引起的一種上呼吸道傳染病，以淚斑、噴嚏、鼻甲骨萎縮或消失、鼻骨變形扭曲等為特征，并造成豬只生長(zhǎng)緩慢、飼料轉(zhuǎn)化率明顯下降、繼發(fā)感染增多，從而造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失。該病在世界各地廣為流行，在我國(guó)分布亦相當(dāng)廣泛。

由于AR在臨床上并不直接導(dǎo)致豬只死亡，因而目前在國(guó)內(nèi)對(duì)該病所致危害尚未引起足夠的重視。在大部分小規(guī)模豬場(chǎng)，流鼻血、歪鼻等典型的AR臨床癥狀隨處可見(jiàn)；而在較大規(guī)模的豬場(chǎng)，因飼養(yǎng)管理及環(huán)境的改善，典型癥狀較為少見(jiàn)或難于見(jiàn)到，但是淚斑、噴嚏、結(jié)膜炎等相關(guān)癥狀仍屢見(jiàn)不鮮[1]。大多數(shù)豬場(chǎng)對(duì)于豬群中的非典型癥狀均視而不見(jiàn)，即使是典型癥狀，也僅僅是加點(diǎn)抗菌藥物處理，甚至只是在防制其他呼吸道病的同時(shí)“順便”治療該病。因而，AR所造成的損失并未得到有效的控制，也很少對(duì)其診治作深入的探討，鑒于此，本論文進(jìn)行了豬萎縮性鼻炎滅活疫苗的免疫效果試驗(yàn)，旨在說(shuō)明進(jìn)行豬萎縮性鼻炎免疫的必要性。

1 試驗(yàn)材料

豬萎縮性鼻炎滅活疫苗,由上海海利生生物制品公司生產(chǎn)。豬傳染性萎縮性鼻炎凝集抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清、PBS稀釋液、96孔微量反應(yīng)板、移液器等。由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

試驗(yàn)用豬：選擇除萎縮性鼻炎疫苗外，其他以正常免疫程序進(jìn)行免疫，個(gè)體、膘情、胎次、配種日期差異不大，同一棟豬舍的15頭懷孕母豬及其所產(chǎn)仔豬作參試，由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院神內(nèi)豬場(chǎng)提供（試驗(yàn)期間所有的飼養(yǎng)管理均相同）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)分組 將15頭懷孕母豬隨機(jī)分為3個(gè)組，每組5頭母豬（母豬本身不參與試驗(yàn),同組母豬所產(chǎn)的仔豬均屬于該組參與試驗(yàn)），隨機(jī)設(shè)定豬萎縮性鼻炎免疫1組、免疫2組及對(duì)照組[2]。

免疫1組的母豬按預(yù)產(chǎn)期推算，均在產(chǎn)前30 d深部肌肉注射豬萎縮性鼻炎疫苗2 mL，檢測(cè)其所產(chǎn)仔豬不同日齡血清抗體含量。

免疫2組的母豬未免疫豬萎縮性鼻炎疫苗，母豬所產(chǎn)的仔豬在產(chǎn)下7日齡和28日齡分別在頸部肌肉注射豬萎縮性鼻炎疫苗1 mL、2 mL、檢測(cè)所有仔豬不同日齡血清抗體含量。

對(duì)照組母豬和其所生產(chǎn)的仔豬均不注射豬萎縮性鼻炎疫苗,檢測(cè)所有仔豬不同日齡血清抗體含量。

豬血樣的采集：分別在試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和對(duì)照組采集所有仔豬血樣。在6日齡、16日齡、26日齡、36日齡、46日齡采血。

2.2 待檢血清的準(zhǔn)備 每頭豬從前腔靜脈采集2～4 mL血液，室溫靜置2～6 h后，3 000 r/min離心15 min，取上清液置于滅菌小瓶?jī)?nèi)，4℃冰箱保存?zhèn)溆肹3]。

2.3 測(cè)定項(xiàng)目 試驗(yàn)?zāi)肛i本身不測(cè)定、只測(cè)定其所產(chǎn)的仔豬從1日齡至180日齡出欄的臨床發(fā)病率、增重情況和抗體含量。

2.3.1 豬萎縮性鼻炎發(fā)病率 在臨床上，將有常打噴嚏，鼻孔流化膿性、混有血絲的分泌物，鼻癢，鼻常摩擦硬物，鼻變短或扭曲，兩側(cè)鼻孔大小不一癥狀的判定為臨床發(fā)病，反之，判定為正常[4]。

2.3.2 增重率 分別于1日齡（初生）、30日齡（斷奶）、60日齡(轉(zhuǎn)群)、180日齡（出欄），空腹稱重，計(jì)算各階段的平均體重[5]、試驗(yàn)期的增重率。

2.3.3 血清學(xué)檢測(cè) （1）取96孔微量反應(yīng)板，第1～11孔加50 μL的無(wú)菌PBS；（2）于第1孔加50 μL 血清樣品，混合均勻后，吸50 μL至第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，吸棄50 μL，第12孔加50 μL標(biāo)陽(yáng)血清為對(duì)照；（3）然后每孔加AR微量凝結(jié)反應(yīng)抗原各50 μL微型振蕩器上混勻后，第11孔為抗原對(duì)照，置37℃恒溫箱靜置l h，再4℃靜置24 h，觀察和判定結(jié)果[6]；（4）判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)凝集反應(yīng)試驗(yàn)比較確定，孔底有明顯的凝集物，且孔內(nèi)液體完全透明，可判為100%凝集(++++)；凝集物明顯，液體不甚透明，可判為75%凝集(+++)；凝集物稍薄，液體略呈混濁，可判為50%凝集(++)；凝集物較少，液體不透明，可判為25%凝集(+)；孔底無(wú)凝集物，液體不透明，為無(wú)凝集現(xiàn)象(—)；抗體水平達(dá)“++”以上判為陽(yáng)性，否則為陰性[7]。

表1 凝集試驗(yàn)的操作方法 （μL）

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 臨床發(fā)病率 對(duì)照組仔豬從哺乳15 d后開(kāi)始，少量豬出現(xiàn)打噴嚏現(xiàn)象；從斷奶前后開(kāi)始，流淚、眼角分泌物增多，出現(xiàn)少量眼角淚斑，鼻癢、甩頭、用鼻子摩擦地面或墻壁；斷奶后半個(gè)月左右，打噴嚏的次數(shù)和比例增加；到保育中后期鼻腔分泌物增加、流鼻涕，咳嗽明顯增多，有一定比例的豬有結(jié)膜炎，并伴有繼發(fā)感染等現(xiàn)象；保育轉(zhuǎn)欄后到育成早期生長(zhǎng)發(fā)育受阻開(kāi)始顯露，均勻度差，有淚斑的豬的比例大約為35%；而試驗(yàn)組則打噴嚏、淚斑、結(jié)膜炎、咳嗽等癥狀明顯減少，生長(zhǎng)速度快，僵豬頭數(shù)少，均勻度好，各種呼吸道疾病明顯減少，死亡率也有一定降低。

表2 豬萎縮性鼻炎臨床發(fā)病率

由表2可見(jiàn)，3組母豬所產(chǎn)仔豬養(yǎng)至180日齡時(shí)，存欄頭數(shù)差異并不大，但免疫組豬萎縮性鼻炎的臨床發(fā)病頭數(shù)僅為3頭和2頭，占該組180日齡豬存欄頭數(shù)的6.7%、4.3%，而對(duì)照組豬傳染性萎縮性鼻炎臨床發(fā)病卻達(dá)10頭，占該組180日齡存欄頭數(shù)的24.4%。豬傳染性萎縮性鼻炎的臨床發(fā)病率免疫2組比對(duì)照組下降20.1%，差異極顯著（P＜0.01）。

3.2 免疫疫苗對(duì)增重的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明,在哺乳期間,注射疫苗對(duì)增重?zé)o明顯影響。保育期間（斷奶后），免疫組豬的平均日增重明顯高于對(duì)照組，免疫1組平均日增重增加0.O23 kg，免疫2組平均日增重增加0.037 kg；兩組日增重提高率分別為5.8%和9.3%。育成期間，免疫豬的增重效果明顯，兩組免疫豬比對(duì)照組的日增重分別增加0.020 kg和0.028 kg，日增重提高率分別為4.0%和5.6%。

試驗(yàn)豬的整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程中，免疫組平均日增重分別為0.634 kg、0.645 kg，而對(duì)照組平均日增重為0.610 kg，日增重提高率分別為3.9%、5.7%。按180日齡出欄，經(jīng)計(jì)算對(duì)照組平均體重達(dá)到免疫組的水平，飼養(yǎng)時(shí)間至少要增加7 d、10.3 d。

注：對(duì)照組飼養(yǎng)增加天數(shù)=（免疫組增重—對(duì)照組增重）/對(duì)照組平均日增重

在180日齡個(gè)體平均增重，免疫組與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01）；免疫2組與免疫1組差異顯著（P＜0.05）如表3所示。

表3 平均個(gè)體體重比較 （kg）

表4 三組仔豬180日齡平均增重 （kg）

3.3 抗體檢測(cè)結(jié)果 從表3～表4結(jié)果看，免疫1組仔豬出生后至30日齡左右抗體含量減少到保護(hù)臨界值以下；免疫2組7日齡接種疫苗開(kāi)始，10 d后產(chǎn)生的抗體效價(jià)平均值達(dá)到保護(hù)值以上，而且二免之后至50日齡左右抗體含量一直保持較高水平，抗體效價(jià)高出保護(hù)臨界值較多，具有較強(qiáng)的保護(hù)作用；對(duì)照組的抗體效價(jià)平均值一直低于保護(hù)值，且抗體含量極少。

表5 應(yīng)用凝集抗原對(duì)血清樣本檢測(cè)結(jié)果

4 討論與分析

4.1 發(fā)病率與增重率 本試驗(yàn)結(jié)果表明，免疫AR疫苗使AR發(fā)病率下降20.1%，有效的降低了AR的發(fā)生，是預(yù)防本病的有效手段，應(yīng)進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

本試驗(yàn)中，180日齡出欄平均體重，免疫組比對(duì)照組平均體重增加多達(dá)3～5 kg，平均增重率提高5.7%，說(shuō)明免疫AR疫苗可促進(jìn)育肥豬增重。

4.2 免疫方法和效果 豬萎縮性鼻炎是條件性疾病，主要通過(guò)空氣飛沫和直接接觸傳播，因此，除合理接種免疫預(yù)防外，通過(guò)降低飼養(yǎng)密度，搞好環(huán)境衛(wèi)生，保持豬舍干燥，改善空氣質(zhì)量，加強(qiáng)消毒等對(duì)控制和預(yù)防本病也有一定的作用[9]。

免疫組與對(duì)照組增重率的差異極顯著。以此說(shuō)明免疫疫苗比未免疫效果好，免疫疫苗可以增加養(yǎng)殖利潤(rùn)。免疫母豬操作更方便些，但是其產(chǎn)仔豬抗體消失的要早于免疫仔豬。

推薦免疫程序：母豬不免疫，仔豬在7日齡和28日齡分別免疫1 mL、2 mL豬萎縮性鼻炎滅活疫苗。免疫效果好，發(fā)病率下降、增重率提高，免疫組比對(duì)照組至少早出欄7天（180 d出欄）；仔豬體內(nèi)抗體可持續(xù)至50日齡左右。

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