免疫學參數HLA 與腹腔子宮內膜異位癥病因學關系

胡玉紅，徐 建

（佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003）

子宮內膜異位癥的發病機制尚不清楚，在過去的十年間，子宮內膜異位癥發生發展的研究中，宿主的免疫應答因素得到了越來越多的關注。腹水中的免疫細胞大多是單核細胞，以巨噬細胞為主，還有其他免疫細胞如淋巴細胞，NK細胞等。所有這些細胞應該具有正常的免疫活性，然而，當腹腔內尤其是巨噬細胞和NK 細胞的免疫系統損害了，導致子宮內膜的上皮細胞和基質細胞清除不徹底，這可能是子宮內膜異位癥發生的主要病理機制。在關于腹水中單核細胞的研究中，許多學者已經證實，單核細胞系的炎性因子在子宮內膜異位癥患者中過渡表達。而且，隨后的研究發現這些患者體內存在著很大程度的HLA 分子表達的減弱。HLA的功能為抗原遞呈，由此提示我們可以通過對腹水中單核細胞的數量或者活性來對免疫應答系統進行功能檢測。因此，免疫活性細胞的免疫應答功能的紊亂是子宮內膜異位癥的病因機制這一觀點得到了越來越多學者的關注。在本實驗中我們通過對子宮內膜異位癥患者及患有其他婦科疾病的女性PF巨噬細胞的表型和免疫活性的比較來研究子宮內膜異位癥在免疫學中的易感性。

1 材料和方法

1.1 實驗對象

實驗組為患有子宮內膜異位癥的患者，對照組為患有其他婦科疾病的患者并在術中排除子宮內膜異位癥。實驗對象均排除妊娠及GnRH 興奮治療的患者。

1.2 實驗材料器械

PF于術中取自患者的腹腔液保存在肝素鈉真空采血管內（武漢博士德生物公司）中。單克隆抗體（北京博奧森生物公司），FITC-標記的抗-CD14 單抗用于標記單核細胞。PE-標記的抗HLA-ABC和-DR 單抗用于評價抗原遞呈。流式細胞儀用于分析實驗。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗對象分組與處理：分為由子宮內膜異位癥患者組成的實驗組及非子宮內膜異位癥患者組成的對照組兩組，均來自佳木斯大學附屬第一醫院婦產科。實驗組有30例患有子宮內膜異位癥的女性（其中包括8例Ⅰ期，12例Ⅱ期，7例Ⅲ期，3例Ⅳ期患者（根據美國生殖醫學會內異癥評分方法）與對照組33例患有其他婦科疾病的女性（其中包括15例子宮肌瘤患者，11例卵巢囊腫患者，7例宮外孕患者）并且在術中排除子宮內膜異位癥。實驗組患者平均年齡為39歲，對照組的平均年齡為38歲，無明顯差異。實驗對象均排除妊娠，近12個月內接受過GnRH 興奮實驗的可能和能引起腹腔炎癥可能的慢性病。PF 均取于術中行使手術前，約5mL。

1.3.2 PFMC的制?。褐苽涓顾畣蝹€核細胞（PFMC），首先將PF樣本約2mL放入離心機中，行2000r15min后棄上清。然后以5∶1 比例加入ACK 進行紅細胞裂解。10min后再次離心2000r15min后棄上清，用PBS漂洗兩次。

1.3.3 單克隆抗體反映標記：每種單抗5μL 分別加入200μL PFMC中在室溫下反映1h。單抗反映后每組樣本放入離心機離心后加入0.5mL PBS混勻后即檢測分析。

1.4 流式細胞儀檢測

首先用散射光法設門，用FSC（正向散射光）和SSC（側向散射光）聯合設門。檢測出通過此區域的細胞所發生的熒光強度則及此區域的細胞數量。所以可以檢測出攜帶著HLA-ABC和-DR 陽性染色的巨噬細胞和CD14陽性的巨噬細胞量，并且計算出存在的百分比。

1.5 統計學方法

采用SPSS用Student’s t-test檢驗來比較實驗組和對照組患者體內HLA-ABC和-DR 的表達，P＜0.05為差異具有統計學意義?？傮w均數比較采用單因素方差分析。利用SPSS采用logistic回歸來檢驗免疫學參數和子宮內膜異位癥發生的關系。

2 結果

2.1 免疫參數結果與分析

PF巨噬細胞CD14 為陽性，其中HLA-ABC和-DR的表達在子宮內膜異位癥患者和對照組患者有很大的不同。子宮內膜異位癥患者體內HLA-ABC和-DR 的FI明顯低于對照組的。

2.2 HLA-ABC表達的結果分析

經過流式細胞儀分析，CD14陽性的PF 巨噬細胞中表達HLA-ABC的百分比是：子宮內膜異位癥實驗和對照組中分別為（98.7±1.0），（97.1±5.7），無統計學意義（P＞0.05）。HLA-ABC的FI在實驗組和對照組中的數據分別為（21.3±1.7），（12.9±1.5）。有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 HLA-DR

經流式細胞儀分析，表達HLA-DR 的在CD14陽性的PF巨噬細胞中的百分比在實驗組和對照組中分別是（88.3±6.5），（75.2±5.0），有統計學意義（P＜0.05）。HLAABC的FI在實驗組和對照組中的數據分別為（2.9±0.5），（2.3±0.5）。有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組免疫參數經流式細胞儀分析結果（±s）

表1 兩組免疫參數經流式細胞儀分析結果（±s）

HLA 表達的結果分析：通過Student’s t-test計算得出在兩組數據中，巨噬細胞表達HLA-ABC 的百分比P＞0.05，無統計學意義。而兩組PF 巨噬細胞HLAABC 的FI，有統計學意義（P＜0.05）。兩組中巨噬細胞表達HLA-DR 的百分比，有統計學意義（P＜0.05）。兩組HLA-DR 的FI，有統計學意義（P＜0.05）。logistic回歸證明這些免疫學參數是子宮內膜異位癥的危險因素。

3 討論

關于巨噬細胞的宿主免疫應答與子宮內膜異位癥關系的研究得到了越來越多的關注。對于PF中的巨噬細胞的功能活性的研究，我們通過對HLA 的表達的檢測來估測抗原遞呈系統的功能。在免疫監測系統中，存在于腹腔空洞內的巨噬細胞會在外來抗原入侵時，在做出最初的免疫應答過程中起到調節作用。在此過程中，HLA和協同刺激因子共同作用于以T 細胞的趨化作用為主要功能的免疫應答的抗原的遞呈過程。近期的研究表明，因為巨噬細胞膜鑲嵌有脂筏，脂筏是一種可以識別兩種細胞膜的結構。當巨噬細胞遞呈抗原與T 細胞時，協同刺激因子做為一種黏附因子，集聚在脂筏上或附近并且與T 細胞上的配合基結合。由此，巨噬細胞膜上的脂筏與T 細胞膜的間隙變小，HLA 位于脂筏的中心，其可更快的將抗原信息遞呈給T 細胞。子宮內膜異位癥患者PF巨噬細胞中HLA-ABC和-Dr細胞的FI降低以及HLA-Dr陽性細胞在巨噬細胞中的百分比的降低，說明子宮內膜異位癥患者體內抗原遞呈能力不足和對外源組織（如內膜組織）免疫應答功能減弱使得內膜組織在腹腔內殘留。子宮內膜異位癥患者PF中巨噬細胞表達HLA 的減少的原因并不清楚?？赡苁且驗閮犬惏Y患者體內的PB（外周血）中的巨噬細胞在變成PF 中的巨噬細胞前HLA 就已經減弱；或者可能因為是腹腔內的內膜組織上的免疫抑制因子（如轉化生長因子）減弱了PF 巨噬細胞上HLA 的表達。通過logistic回歸證明了免疫學參數中HLA-ABC和-DR表達的降低與子宮內膜異位癥的發生有關系。

經血逆流學說及上皮化生學說均為子宮內膜異位癥重要病理機制，無論那種學說是正確的，免疫損害，尤其是巨噬細胞免疫功能的損害可以更準確的說明子宮內膜異位癥的發生原因。PF巨噬細胞中HLA 這種免疫學參數的紊亂可以為子宮內膜異位癥的種植或上皮化生這些學說做出免疫學解釋。同樣對子宮內膜異位癥的發生發展有重要意義。

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