正交試驗優化穩心草總黃酮提取工藝

王秀麗++宋志堅++王小東++孟祥敏++張黎黎++王婷婷++李玲

摘 要：以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。通過L9（34）正交試驗優選穩心草總黃酮提取工藝條件。結果顯示，蘆丁濃度在0.008～0.048 mg/mL范圍內與吸光度呈良好線性關系（r=0.9999）；結合正交試驗結果和方差分析，確定最佳提取工藝為物料比1∶10，65%乙醇提取2次，2h/次。

關鍵詞：正交試驗 穩心草 總黃酮 提取工藝

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）08（a）-0192-02

穩心草為金絲桃科金絲桃屬植物烏腺金絲桃干燥全草或地上部分，主產于黑龍江省大興安嶺地區，具有止血、鎮痛、通乳功效[1]。北方習稱穩心草，長期以來為民間常用草藥，國內外對其化學成分、藥理作用研究較少，經文獻檢索，其主要成分為黃酮類化合物[2]，以總黃酮得率為指標，通過正交實驗考察了乙醇濃度、乙醇體積、提取時間和提取次數4個對提取因素的影響，確定了穩心草總黃酮的最佳提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

穩心草，產地大興安嶺地區，由大興安嶺林科所劉光研究員鑒定為金絲桃科金絲桃屬植物烏腺金絲桃干燥全草，蘆丁對照品，實驗所用試劑均為AR，水為蒸餾水。

1.2 儀器

電子天平（上海越平科學儀器有限公司），754型紫外分光光度計（上?，F科分光儀器有限公司）。

2 方法與結果

2.1 標準曲線的制備

精密稱取120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品20 mg，置50 mL量瓶中，加60%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加30%乙醇至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min。加4%氫氧化鈉試液10 mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在500 nm的波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。得線性回歸方程為：A=10.85C-0.0061，r=0.9999，線性范圍：0.008～0.048 mg/mL。

2.2 樣品溶液的制備及測定

精密稱取穩心草粉2 g，共9份，按正交實驗設計回流提取，過濾，合并濾液，濃縮，用60%乙醇轉移至50 mL容量瓶并稀釋至刻度，再精密量取2～25 mL容量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，濾過，作為樣品溶液。精密吸取3 mL不同提取條件下的樣品溶液至25 mL容量瓶中，按“2.1.1”項測定，并用回歸方程計算總黃酮含量。

2.3 正交試驗設計

選擇乙醇-水為提取溶劑，以乙醇濃度、物料比、提取時間和提取次數為考察因素，每個因素取3個水平（見表1），以總黃酮得率為考察指標，進行正交實驗。

2.4 結果分析

根據正交試驗分析，由極差值R可知對提取率影響大小因素為：B>C>A>D，理論最佳提取工藝為：A3B2C3D3，應用方差分析（見表3），乙醇濃度F值61.97，大于19，P<0.05，乙醇濃度對提取率影響顯著，其他因素影響不顯著，為次要因素。

3 結果與討論

經過正交試驗結果分析，穩心草總黃酮的提取最佳工藝為A3B2C3D3，即用物料比1∶12，65%乙醇提取3次，3 h/次。另從方差分析結果可見，提取工藝影響因素的大小順序為B>C>A>D，綜合各項指標，我們優選A2B2C2D2，即物料比1∶10，65%乙醇提取2次、2 h/次為最佳操作工藝。經實驗驗證，在此最佳工藝條件下，穩心草總黃酮得率為12.03%。

穩心草應粉碎為粗粉，粒度過小引起提取雜質增多，同時過濾困難，粒度過大提取不充分。提取溫度以提取充分，不超高80 ℃，溫度過高會破壞穩心草黃酮結構，溫度過低提取不充分。乙醇濃度是影響提取率的主要因素，濃度過低會溶出大量多糖雜質，粘度增加，過濾困難，濃度過高黃酮提取率下降。

參考文獻

[1] 孫明學.大興安嶺森林植物[M].哈爾濱：東北林業大學出版社，2005：428.

[2] 顧麗貞，張宏彬.穩心草化學成分研究[J].植物學報，1980，22（2）：151.endprint

摘 要：以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。通過L9（34）正交試驗優選穩心草總黃酮提取工藝條件。結果顯示，蘆丁濃度在0.008～0.048 mg/mL范圍內與吸光度呈良好線性關系（r=0.9999）；結合正交試驗結果和方差分析，確定最佳提取工藝為物料比1∶10，65%乙醇提取2次，2h/次。

關鍵詞：正交試驗 穩心草 總黃酮 提取工藝

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）08（a）-0192-02

穩心草為金絲桃科金絲桃屬植物烏腺金絲桃干燥全草或地上部分，主產于黑龍江省大興安嶺地區，具有止血、鎮痛、通乳功效[1]。北方習稱穩心草，長期以來為民間常用草藥，國內外對其化學成分、藥理作用研究較少，經文獻檢索，其主要成分為黃酮類化合物[2]，以總黃酮得率為指標，通過正交實驗考察了乙醇濃度、乙醇體積、提取時間和提取次數4個對提取因素的影響，確定了穩心草總黃酮的最佳提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

穩心草，產地大興安嶺地區，由大興安嶺林科所劉光研究員鑒定為金絲桃科金絲桃屬植物烏腺金絲桃干燥全草，蘆丁對照品，實驗所用試劑均為AR，水為蒸餾水。

1.2 儀器

電子天平（上海越平科學儀器有限公司），754型紫外分光光度計（上海現科分光儀器有限公司）。

2 方法與結果

2.1 標準曲線的制備

精密稱取120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品20 mg，置50 mL量瓶中，加60%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加30%乙醇至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min。加4%氫氧化鈉試液10 mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在500 nm的波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。得線性回歸方程為：A=10.85C-0.0061，r=0.9999，線性范圍：0.008～0.048 mg/mL。

2.2 樣品溶液的制備及測定

精密稱取穩心草粉2 g，共9份，按正交實驗設計回流提取，過濾，合并濾液，濃縮，用60%乙醇轉移至50 mL容量瓶并稀釋至刻度，再精密量取2～25 mL容量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，濾過，作為樣品溶液。精密吸取3 mL不同提取條件下的樣品溶液至25 mL容量瓶中，按“2.1.1”項測定，并用回歸方程計算總黃酮含量。

2.3 正交試驗設計

選擇乙醇-水為提取溶劑，以乙醇濃度、物料比、提取時間和提取次數為考察因素，每個因素取3個水平（見表1），以總黃酮得率為考察指標，進行正交實驗。

2.4 結果分析

根據正交試驗分析，由極差值R可知對提取率影響大小因素為：B>C>A>D，理論最佳提取工藝為：A3B2C3D3，應用方差分析（見表3），乙醇濃度F值61.97，大于19，P<0.05，乙醇濃度對提取率影響顯著，其他因素影響不顯著，為次要因素。

3 結果與討論

經過正交試驗結果分析，穩心草總黃酮的提取最佳工藝為A3B2C3D3，即用物料比1∶12，65%乙醇提取3次，3 h/次。另從方差分析結果可見，提取工藝影響因素的大小順序為B>C>A>D，綜合各項指標，我們優選A2B2C2D2，即物料比1∶10，65%乙醇提取2次、2 h/次為最佳操作工藝。經實驗驗證，在此最佳工藝條件下，穩心草總黃酮得率為12.03%。

穩心草應粉碎為粗粉，粒度過小引起提取雜質增多，同時過濾困難，粒度過大提取不充分。提取溫度以提取充分，不超高80 ℃，溫度過高會破壞穩心草黃酮結構，溫度過低提取不充分。乙醇濃度是影響提取率的主要因素，濃度過低會溶出大量多糖雜質，粘度增加，過濾困難，濃度過高黃酮提取率下降。

參考文獻

[1] 孫明學.大興安嶺森林植物[M].哈爾濱：東北林業大學出版社，2005：428.

[2] 顧麗貞，張宏彬.穩心草化學成分研究[J].植物學報，1980，22（2）：151.endprint

摘 要：以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。通過L9（34）正交試驗優選穩心草總黃酮提取工藝條件。結果顯示，蘆丁濃度在0.008～0.048 mg/mL范圍內與吸光度呈良好線性關系（r=0.9999）；結合正交試驗結果和方差分析，確定最佳提取工藝為物料比1∶10，65%乙醇提取2次，2h/次。

關鍵詞：正交試驗 穩心草 總黃酮 提取工藝

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）08（a）-0192-02

穩心草為金絲桃科金絲桃屬植物烏腺金絲桃干燥全草或地上部分，主產于黑龍江省大興安嶺地區，具有止血、鎮痛、通乳功效[1]。北方習稱穩心草，長期以來為民間常用草藥，國內外對其化學成分、藥理作用研究較少，經文獻檢索，其主要成分為黃酮類化合物[2]，以總黃酮得率為指標，通過正交實驗考察了乙醇濃度、乙醇體積、提取時間和提取次數4個對提取因素的影響，確定了穩心草總黃酮的最佳提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

穩心草，產地大興安嶺地區，由大興安嶺林科所劉光研究員鑒定為金絲桃科金絲桃屬植物烏腺金絲桃干燥全草，蘆丁對照品，實驗所用試劑均為AR，水為蒸餾水。

1.2 儀器

電子天平（上海越平科學儀器有限公司），754型紫外分光光度計（上海現科分光儀器有限公司）。

2 方法與結果

2.1 標準曲線的制備

精密稱取120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品20 mg，置50 mL量瓶中，加60%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加30%乙醇至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min。加4%氫氧化鈉試液10 mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在500 nm的波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。得線性回歸方程為：A=10.85C-0.0061，r=0.9999，線性范圍：0.008～0.048 mg/mL。

2.2 樣品溶液的制備及測定

精密稱取穩心草粉2 g，共9份，按正交實驗設計回流提取，過濾，合并濾液，濃縮，用60%乙醇轉移至50 mL容量瓶并稀釋至刻度，再精密量取2～25 mL容量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，濾過，作為樣品溶液。精密吸取3 mL不同提取條件下的樣品溶液至25 mL容量瓶中，按“2.1.1”項測定，并用回歸方程計算總黃酮含量。

2.3 正交試驗設計

選擇乙醇-水為提取溶劑，以乙醇濃度、物料比、提取時間和提取次數為考察因素，每個因素取3個水平（見表1），以總黃酮得率為考察指標，進行正交實驗。

2.4 結果分析

根據正交試驗分析，由極差值R可知對提取率影響大小因素為：B>C>A>D，理論最佳提取工藝為：A3B2C3D3，應用方差分析（見表3），乙醇濃度F值61.97，大于19，P<0.05，乙醇濃度對提取率影響顯著，其他因素影響不顯著，為次要因素。

3 結果與討論

經過正交試驗結果分析，穩心草總黃酮的提取最佳工藝為A3B2C3D3，即用物料比1∶12，65%乙醇提取3次，3 h/次。另從方差分析結果可見，提取工藝影響因素的大小順序為B>C>A>D，綜合各項指標，我們優選A2B2C2D2，即物料比1∶10，65%乙醇提取2次、2 h/次為最佳操作工藝。經實驗驗證，在此最佳工藝條件下，穩心草總黃酮得率為12.03%。

穩心草應粉碎為粗粉，粒度過小引起提取雜質增多，同時過濾困難，粒度過大提取不充分。提取溫度以提取充分，不超高80 ℃，溫度過高會破壞穩心草黃酮結構，溫度過低提取不充分。乙醇濃度是影響提取率的主要因素，濃度過低會溶出大量多糖雜質，粘度增加，過濾困難，濃度過高黃酮提取率下降。

參考文獻

[1] 孫明學.大興安嶺森林植物[M].哈爾濱：東北林業大學出版社，2005：428.

[2] 顧麗貞，張宏彬.穩心草化學成分研究[J].植物學報，1980，22（2）：151.endprint