一種中藥材粉末的永久玻片的制備方法

石蔚華 陳藍(lán) 曹琦蕾 張麗萍 林芳 鄧同樂

摘 要：在一般生藥學(xué)教學(xué)中，顯微觀察是一種用以鑒定生藥真?zhèn)魏图兌鹊囊环N重要方法，通常是制作臨時(shí)顯微玻片進(jìn)行觀察鑒定，但是臨時(shí)玻片存在長時(shí)間觀察液體干燥而影響觀察效果的問題。因此，該文通過探索，尋找可以長時(shí)間觀察并不影響觀察效果的新的制備方法，并且與臨時(shí)玻片進(jìn)行比較。

關(guān)鍵詞：中藥材粉末 顯微觀察玻片 制備方案

中圖分類號：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）06（c）-0231-01

中藥材粉末顯微鑒定是利用顯微鏡來觀察生藥的組織碎片、細(xì)胞形狀及內(nèi)含物的特征，用以鑒定生藥的真?zhèn)魏图兌鹊囊环N重要方法，同時(shí)通過顯微觀察藥材特有的細(xì)胞、內(nèi)含物等是保證臨床用藥安全有效的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。通過觀察玻片標(biāo)本，可以驗(yàn)證已學(xué)知識，加深理解，便于記憶，提高學(xué)習(xí)效果。玻片標(biāo)本按保存時(shí)間分為臨時(shí)玻片標(biāo)本和永久玻片標(biāo)本[2]。該文通過摸索制作粉末永久性玻片，可以長時(shí)間觀察不影響觀察效果，對生藥學(xué)教學(xué)有一定的幫助。在實(shí)驗(yàn)中選用大黃作為藥材進(jìn)行制作顯微玻片。大黃草酸鈣簇晶大，直徑60～140 μm，草酸鈣結(jié)晶的解剖學(xué)特征比較穩(wěn)定，且已廣泛用于生藥學(xué)的鑒定研究，特別是對粉末類藥材的鑒定具有十分重要的意義[3]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)中藥材 大黃（購于杭州九洲大藥房連鎖有限公司）

1.1.2 儀器設(shè)備 打粉機(jī)，40目網(wǎng)篩，倒置生物顯微鏡（Nikon eclipse TS100），鑷子，大頭針，濾紙，載玻片，蓋玻片，藥匙，膠頭滴管。

1.1.3 試劑 無水乙醇，二甲苯，甘油，中性樹脂，水合氯醛試液（制作方法：取水合氯醛50 g，加水15 mL與甘油10 mL使溶解[4]。

1.2 方法

1.2.1 粉末的制備 先將購得的大黃放置打粉機(jī)，打粉1～2 min，將打好的粉末過40目網(wǎng)篩[5]，得到的粉末裝于玻璃瓶，貼好標(biāo)簽。

1.2.2 觀察粉末制備 將經(jīng)上述所得的粉末一小勺藥匙置于濾紙，滴加2滴無水乙醇，浸沒粉末，等待至微干，可用吹風(fēng)機(jī)吹干。然后再滴加2滴二甲苯溶液，浸沒粉末，等待至干，可用吹風(fēng)機(jī)吹干。

1.2.3 試驗(yàn)組觀察玻片制備 將經(jīng)上述操作的粉末移至載玻片，滴加3滴中性樹脂，要求完全浸潤粉末，用大頭針將粉末與中性樹脂攪拌并推平。然后直接加蓋玻片，要求蓋玻片置中，且不能多次改變位置。等待完全干透，大概1w左右，顯微鏡觀察，貼標(biāo)簽。

1.2.4 對照組觀察玻片試驗(yàn)

對照組包括：對照組A為水合氯醛的臨時(shí)觀察片，取制得的少量大黃粉末置于載玻片，滴加2至3滴現(xiàn)配制的水合氯醛試液，浸沒粉末，然后直接加蓋玻片觀察。

對照組B為取少量制得的大黃粉末置于濾紙，滴加2至3滴水合氯醛試液，浸沒粉末，等待至微干。與1.2.3步驟相同，顯微鏡觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 觀察的結(jié)果 在顯微鏡（×400）進(jìn)行觀察

新制備的玻片顯微觀察草酸鈣簇晶均清晰可見，對照組A的清晰度較高，且視野顏色較深，對照組B視野顏色較淺，且與實(shí)驗(yàn)制備方法所的的玻片存在有少量氣泡。

2.2 實(shí)驗(yàn)放置1w后觀察

對照組A明顯失水，完全喪失觀察效果。對照組B放視野仍清楚，但是有少量氣泡，1w后氣泡減少量少。試驗(yàn)組放置視野仍清楚，氣泡明顯不存在。

3 結(jié)語

對照組A所得的臨時(shí)玻片，觀察清楚，但是長時(shí)間后失水喪失觀察效果，因此適合較短時(shí)間觀察，不易保存。對照組B采用水合氯醛浸潤，干燥，中性樹脂封片，觀察效果較好，但是存在水合氯醛干燥時(shí)間較長，會(huì)產(chǎn)生明顯有刺激性氣味，干燥不徹底則與樹脂封片造成糊化，影響觀察。

試驗(yàn)組所采用的先用無水乙醇浸潤，干燥，然后二甲苯浸潤，干燥，最后中心樹脂封片，雖然操作較復(fù)雜，但是干燥時(shí)間快且方便，不會(huì)產(chǎn)生糊化現(xiàn)象。另外，制備初期仍有氣泡產(chǎn)生，但由于無水乙醇有很強(qiáng)的消泡作用，靜置一段時(shí)間后，氣泡會(huì)明顯消失，有利于玻片的觀察。二甲苯是很好的溶劑，具有透化作用，增強(qiáng)中性樹脂封片作用。二甲苯為無色透明液體，具有一定的毒性和致癌性。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)注意的安全防范和通風(fēng)操作。

該文的制備方法適用于其他中藥材，具有普遍意義。因此可用本文制備方法用于中藥材粉末顯微觀察，方便長時(shí)間顯微觀察，不影響觀察效果。

參考文獻(xiàn)

[1] 周佐林，譚華芬.253種中藥材粉末顯微鑒別主要特征[J].時(shí)珍國藥研究，1997，8（4）.

[2] 馮玉樺.玻片標(biāo)本的種類和制作[J].生物學(xué)教學(xué)，2004，29（5）.

[3] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：第二部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4] 王皎，張順貞.草酸鈣結(jié)晶石細(xì)胞及分泌組織在中藥鑒定中的應(yīng)用[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2007，28（8）.

[5] 王桂香.生藥粉末顯微鑒定的實(shí)用技術(shù)[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2008，22（26）.