注射用阿奇霉素及其輔料對貓血壓的影響

北京市藥品檢驗所（100035）孫圓媛

1 前言

阿奇霉素為15元大環內酯類抗生素，是由紅霉素進一步合成而得。阿奇霉素在稀酸中易溶，在水中幾乎不溶[1]，故在生產過程中選用酸性物質作為其助溶劑。由于抗生素藥物生產技術復雜且不易控制，異物污染可能性較大，多數不穩定，分解產物的帶入使其藥效降低，無效或有毒性。生產過程中易混入組胺、腐胺、尸胺及其他降壓物質。因而除各國藥典均規定的注射劑常規檢查外，還應進行降壓物質檢查，以確保臨床安全用藥[2]。

枸櫞酸為注射用阿奇霉素的助溶劑。截至目前，國內尚無法定的無菌枸櫞酸的質量標準，所以使用無菌枸櫞酸的企業，幾乎都是通過借鑒無菌粉生產的通用規定對普通藥用級別的枸櫞酸進行處理，使其無菌，熱原項指標符合無菌粉針劑的相應要求[3]。因枸櫞酸酸性較強，且它同時也是一種鈣離子螯合劑[4]，高濃度下能完全結合去除細胞外的Ca2+，從而對血壓造成一定程度的影響，因此在試驗中有必要對枸櫞酸進行降壓物質檢查。

降壓物質檢查法系比較組胺對照品（S）與供試品（T）引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質的限度是否符合規定。針對原料藥做降壓物質檢查不僅可以從源頭把關而且對之后制劑生產有重要意義。同時對助溶劑（輔料）進行降壓物質檢查，可為生產企業開發此類品種選擇合適的助溶劑提供依據和借鑒，并為臨床安全用藥提供保障。由此我們采用《中國藥典》2010年版中降壓物質檢查法對該品種進行試驗。在劑量設計過程中，我們參考“注射用阿奇霉素”的國家標準規定劑量：2000IU/kg，和“注射用阿奇霉素”的最大臨床用量：0.5g/60kg，先進行預試。從預試中可確定該原料藥是否與其制劑的國家標準規定降壓物質檢查的劑量一致。最后依據預試結果對三批阿奇霉素和枸櫞酸進行試驗，以確保在該劑量下所引起麻醉貓降壓幅度均小于對照品所引起的降壓幅度，根據結果可以確定注射用阿奇霉素引起降壓的主要物質基礎。

附圖1 批號： 120801 劑量：8000 IU/kg

附圖2 批號：120801 劑量：4000 IU/kg

附圖3 批號： 120801 劑量：2000 IU/kg

附圖4 批號： 120801 劑量：1000 IU/kg

附圖5 批號： 120801

附圖6 批號： 120802

附圖7 批號： 120803

附圖8 批號：20121001 劑量：4.2mg/kg

2 實驗材料

2.1 供試品

2.1.1 原料藥 阿奇霉素；北京太陽藥業有限公司；批號：120801，120802，120803；規格：原料，類白色結晶性粉末；貯藏：室溫保存。

2.1.2 助溶劑：枸櫞酸；生產廠家：湖南爾康制藥有限公司；批號：20121001，20121005，20121007。

2.2 試劑及配制

2.2.1 苯巴比妥鈉注射液 批號：0605111；單位：天津金耀化學氨基酸有限公司。

2.2.2 戊巴比妥鈉 批號：WS20050411；生產單位：批號：國藥集團化學試劑有限公司；稱取戊巴比妥鈉0.10g，加注射用水10ml配成1%溶液。

2.2.3 氯化鈉注射液 批號：120412403；生產單位：石家莊四藥有限公司。

2.2.4 肝素鈉溶液 批號：120218；常州千紅生化制藥股份有限公司；規格：2ml：12500單位；用時加氯化鈉注射液配成100 IU/ml的溶液。

2.3.5 組胺對照品溶液的配制 精密稱取磷酸組胺對照品適量，按組胺計算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內，4℃～8℃貯存，如無沉淀析出,可在3個月內使用。

2.3.6 對照品稀釋液的配制 臨用前，精密量取組胺對照品溶液適量，用氯化鈉注射液配成每1ml中含組胺0.5μg的稀釋液。

2.3.7 滅菌注射用水 批號：12060431 生產廠家：天津藥業焦作制藥有限公司。

2.3 主要儀器及用具

2.3.1 天平 型號BS 224S；生產單位：梅特勒－托利多（上海）有限公司。

2.3.2 多導生理記錄儀 型號DC－120H；生產單位：日本光電工業株式會社。

2.3.3 其他用具 注射器、吸管、移液管、容量瓶、測量尺、三通開關、脫脂棉、線繩、手術器械。

2.4 實驗動物 健康無傷、體重2kg以上的貓，雌雄均可，雌者無孕。

3 實驗方法

3.1 劑量設計

3.1.1 阿奇霉素劑量設計 阿奇霉素為大環內酯類抗生素，屬于原料藥。我們根據《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅧ B中降壓物質檢查設定限值[6]和“注射用阿奇霉素”的最大臨床用量（0.5g/60kg），同時參照其制劑的質量標準（國家藥品標準WS1-(X-296)-2003Z）制定試驗劑量，選擇系列劑量為8000單位/kg、4000單位/kg、2000單位/kg、1000單位/kg，進行試驗。

3.1.2 枸櫞酸劑量設計 枸櫞酸為注射用阿奇霉素的助溶劑，屬于輔料。根據“注射用阿奇霉素”制劑處方中阿奇霉素與枸櫞酸的比例，可知枸櫞酸的最大人用量為2.1mg/kg。我們按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅧ B中降壓物質檢查設定限值[6]，同時參照預試驗劑量進行降壓物質檢查試驗。選擇系列劑量為4.2mg/kg、1.05mg/kg、0.5mg/kg進行試驗。

附圖9 批號：20121001 劑量：1.05mg/kg

附圖10 批號：20121001 劑量：0.5mg/kg

附圖11 批號：20121001

附圖12 批號：20121005

附圖13 批號：20121007

3.2 試驗方法 取上述動物，選用1%戊巴比妥鈉（1ml/kg）和10%苯巴比妥鈉（1ml/kg），1∶1混合腹腔注射麻醉后，按照《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ G降壓物質檢查的方法進行檢驗，將阿奇霉素用枸櫞酸稀釋成4萬單位/ml、2萬單位/ml、1萬單位/ml、5000單位/ml系列濃度（溶液中阿奇霉素和枸櫞酸的比例與 “注射用阿奇霉素”制劑處方中阿奇霉素與枸櫞酸的比例一致），注入體積0.2ml/kg 。將枸櫞酸用注射用水稀釋成4.2mg/ml、1.05mg/ml、0.5mg/ml系列濃度，注入體積1.0ml/kg。將供試品降壓幅度與磷酸組胺對照品降壓幅度進行比較。

4 實驗結果與分析

4.1 阿奇霉素降壓物質檢查試驗

4.1.1 預試試驗結果 血壓圖譜見附圖1～4。預試驗結果表明：阿奇霉素在8000單位/kg和4000單位/kg的劑量下，貓血壓的下降幅度均超過對照品所致的血壓下降；在2000單位/kg的劑量下，引起的貓血壓下降幅度均未超過對照品所致的血壓下降；在1000單位/kg的劑量，貓血壓下降幅度均未超過對照品所致的血壓下降的一半。

4.1.2 正式試驗結果 根據預試驗的結果提示，阿奇霉素的劑量規定為：2000 IU/kg，對三批供試品進行降壓物質檢查試驗，血壓圖譜見附圖5～7。結果表明，將阿奇霉素的劑量規定為：2000 IU/kg進行降壓物質檢查，結果三批阿奇霉素引起貓血壓下降幅度均低于對照品所致血壓下降幅度，符合《中國藥典》2010年版二部的有關規定。

4.1.3 分析 試驗結果表明：阿奇霉素以2000單位/kg劑量，按照《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ G降壓物質檢查，結果3批樣品降壓幅度均未超過磷酸組胺對照品所致血壓下降幅度，此劑量與“注射用阿奇霉素”的質量標準（國家藥品標準WS1－(X－296)－2003Z）中規定的降壓物質檢查劑量相同。此劑量為“注射用阿奇霉素”最大人用量的1/4。

4.2 枸櫞酸降壓物質檢查試驗4.2.1 預試試驗結果 預試血壓圖譜見附圖8～10。預實驗結果表明：枸櫞酸在4.2mg/kg和1.05mg/kg的劑量下，引起的貓血壓下降幅度均超過對照品所致的血壓下降；在0.5mg/kg的劑量下，引起的貓血壓下降幅度均未超過對照品所致的血壓下降。

4.2.2 正式試驗試驗結果 將枸櫞酸的劑量規定為：0.5mg/kg，對三批供試品進行降壓物質檢查試驗，血壓圖譜見附圖11～13。結果表明：枸櫞酸在0.5mg/kg劑量下時，3批枸櫞酸引起貓血壓下降幅度均低于磷酸組胺對照品所致血壓下降幅度。

4.2.3 分析 試驗結果表明：枸櫞酸以0.5mg/kg劑量，按照《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ G降壓物質檢查，結果3批樣品降壓幅度均未超過磷酸組胺對照品所致血壓下降幅度，此劑量為“注射用阿奇霉素”在最大人用量時，所含枸櫞酸量的1/4。

4 結論與討論

4.1 結論 阿奇霉素（枸櫞酸溶解）在2000IU/kg（1萬IU/ml,0.2ml/kg）劑量時降壓物質檢查符合規定；枸櫞酸 在0.5mg/kg（0.5mg/ml,1.0ml/kg）劑量時降壓物質檢查符合規定。可以初步確定阿奇霉素的降壓作用主要是由枸櫞酸助溶劑引起的。

4.2 討論 阿奇霉素作為新一代大環內酯類抗生素，其抗菌效果明顯，但由于生產過程不當易混入組胺、腐胺、尸胺及其它降壓物質，需要對其進行降壓物質檢查。枸櫞酸作為該原料藥注射用的助溶劑，其酸性較強且本身是一種Ca2+螯合劑對血壓有一定影響，因而也需要單獨對其進行降壓物質檢查。

我們根據《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅧ B中降壓物質檢查限值，參照其制劑的質量標準（國家藥品標準WS1-(X-296)-2003）以及“注射用阿奇霉素”制劑處方中阿奇霉素與枸櫞酸的比例制定試驗劑量。通過預試及正式試驗，分別對三批樣品進行降壓物質檢查，確定出樣品降壓幅度小于組胺對照品所致血壓下降幅度的劑量，阿奇霉素為2000IU/kg，此劑量與“注射用阿奇霉素” 國家標準中規定檢查的劑量一致，相當人用阿奇霉素最大量的1/4。枸櫞酸為0.5mg/kg，此劑量相當于枸櫞酸最大人用量的1/4倍。

由于枸櫞酸是一種鈣離子螯合劑本身對血壓有一定影響，而阿奇霉素在稀酸中易溶，在水中幾乎不溶。通過本次試驗可以推斷出：注射用阿奇霉素產生的降壓反應主要是來自于枸櫞酸輔料。由于枸櫞酸自身具有引起血壓下降的藥理特性，輔料是否合理，劑量如何把握，都是有待解決的問題。嘗試選擇刺激性小，使用更安全，更穩定的助溶劑，降低藥物的不良發應，以確保人民的用藥安全。本試驗為合理使用抗生素及助溶劑的選擇問題提供借鑒。