HPLC法測定卡托普利片含量不確定度分析

北京市大興區食品藥品安全監控中心（102600）苗立紅

卡托普利片為血管緊張素轉化酶抑制藥，其適用于各型高血壓，是治療輕、中度原發性或腎性高血壓的首選藥物之一。卡托普利的降壓特點是能降低高血壓患者的外周血管阻力，預防和逆轉血管平滑肌增殖及左心室肥厚，顯著改善高血壓患者的生活質量。為《中國藥典》2010版二部[1]收載的品種。采用高效液相色譜法測定其含量，根據《測定不確定度評定與表示》（JJF1059-1999）, 本文對HPLC法測定不確定度進行計算和評定，最終給出檢測結果、置信區間；和置信水平，建立適合于HPLC法測定含量的不確定度方法，以提高HPLC法含量測定結果的準確性。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT 高效液相色譜儀；AE-100電子天平；賽多利斯CP225D電子天平；卡托普利對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100318-2006含量為99.5%）。

2 溶液的制備

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取卡托普利對照品約10.55mg、10.53mg兩份，分別置100ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取卡托普利片20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉0.0581g、0.0578g兩份樣品，分別置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

3 測定方法

3.1 色譜條件 用十八烷基鍵和硅膠為填充劑；以0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇-乙腈（70∶25∶5）（用磷酸調pH值至3.0）為流動相；檢測波長為215nm；柱溫為40℃。

3.2 方法 分別精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀測定，按外標法計算，即為卡托普利（C9H15NO3S）的含量。

4 數據

20片總片重2.8313g;平均片重0.1416g。

5 測定不確定度

6 不確定度來源

卡托普利片含量測定不確定度的來源由對照品和供試品兩方面所構成，對照品的不確定度包括：對照品的稱量引入的不確定度，對照品稀釋引入的不確定度，對照品色譜峰面積引入的不確定度。同理，供試品的不確定度也包括在稱量、稀釋和色譜峰面積三個方面。

6.1 對照品稱量引入的不確定度

6.1.1 對照品稱量引入的不確定度由對照品質量和純度構成。

賽多利斯CP225D電子天平分辨率為0.01mg，按矩形分布，取包含因子則天平稱量不確定度U=0.0058mg,天平稱量重復性的不確定度：檢定證書給出的重復性誤差為±0.02mg,按矩形分布，則不確定度U(M2)=0.02/=0.0115mg,由于稱量使用減重法，則U對照品稱樣分別為10.55mg、10.53mg,樣1為U(W1)=0.0182/10.55=0.00173，樣2為U(W2)=0.0182/10.53=0.00173，即合成

對照品純度的不確定度：卡托普利對照品純度為99.5%，未給出限度標識，假定其分布區間為±0.05%，按矩形分布，其不確定度U（P純）=0.05%/=0.000289。

6.1.2 對照品定容不確定度U(VS) 校準：因A級100ml容量瓶的允值為（100±0.1）ml，按矩形分布，取包含因子K=,則100ml容量瓶引入的標準不確定度U(容

環境溫度：實驗室環境溫度在空調調節下，設置（20±5）℃，水的體積膨脹系數為2.1×10-4℃-1按矩形分布，取包含因子K=，標準不確定度：5×2.1×10-4/=0.000606ml。

6.1.3 對照品溶液濃度引入的合成相對不確定度U(CS)

6.1.4 對照品溶液色譜峰面積引入的不確定度 試驗中對照品S1 S2,分別進樣5次、2次，取峰面積平均值計算。

第一份對照品溶液測量5次，峰面積分別為2906480、2904908、2904464、2899933、2899596。平均峰面積為2903076，標準差為3117，RSD(%)為0.1%，其引入的不確定度U×2903076）=0.000480。第二份對照品溶液測量2次，峰面積分別為2887773、2890410，平均峰面積為2889092，標準差為1864 ，RSD(%)為0.06%，采用極差法計算，n=2,C=1.13，其引入的不確定度U(AS2)=S1-2/(C×(AS)平）=(2890410-2887773)/(1.13×2889092)=0.000807。對照品溶液峰面積引入相對不確定度：

6.2 供試品引入的不確定度

6.2.1 供試品溶液峰面積引入的不確定度試驗中供試品R1 R2,分別進樣2次，取峰面積平均值計算。

第一份供試品溶液峰面積為2833625、2832697，平均峰面積為2833161，RSD(%)為0.02%,采用極差法計算，n=2,C=1.13，其引入的不確定度U(AR1)=R1-2/(C×(AS)平）=0.000290。 第二份供試品溶液峰面積為2847930、2845111，平均峰面積為2846520，RSD(%)為0.07%,采用極差法計算，n=2,C=1.13，其引入的不確定度U(AR2)=R1-2/(C×(AS)平）=0.000876。供試品溶液峰面積引入的相對不確定度：

6.2.2 供試品溶液濃度引入的合成相對不確定度包括：對照品溶液的濃度、對照品溶液峰面積、供試品溶液峰面積，U（CR）==0.00285。

6.2.3 供試品稱量引入的不確定度U(WR)，供試品稱量分別為0.0581g、0.0578g。使用電子天平AE100，檢定證書給出的最大允值為±0.2mg,按矩形分布，則不確定度為：天平稱量重復性的不確定度，檢定證書給出的重復性誤差為±0.1mg，按矩形分布，則不確定度為則合成：供試品稱樣分別為0.0581g、0.0578g,樣1為U(W1)=0.1833/0.0581×103=0.00315，樣2為U(W2)=0.1833/0.0578×103=0.00317，即合成U(WR)=

6.2.4 供試品定容引入不確定度 校準：因A級100ml容量瓶的允值為（100±0.1）ml,按矩形分布，取包含因子K=,則100ml容量瓶引入的標準不確定度U(容100)=0.1/=0.0577。

環境溫度：實驗室環境溫度在空調調節下，設置（20±5）℃，水得體積膨脹系數為2.1×10-4℃-1，按矩形分布，取包含因子K=，標準不確定度：5×2.1×10-4/

6.3 平均片重0.1416g,使用電子天平AE100，檢定證書給出的最大允值為±0.2mg,按矩形分布，則不確定度為：天平稱量重復性的不確定度，檢定證書給出的重復性誤差為±0.1mg，按矩形分布，則不確定度為則合成：U(WR)=U(W平)=0.1833/0.1416×103=0.00129。

6.4 合成不確定度 供試品溶液濃度，供試品稱樣量，供試品的定容，平均片重等影響因素合成不確定度為U(X供)試驗測得X=100.5%,則標準不確定度U(X)=U(X供)×X=0.00549×100.5%=0.55%

6.5 擴展不確定度 取包含因子K=2，則含量測定結果的擴展不確定度為U(X)=K×U(X)=1.10%。

6.6 報告 卡托普利片含量測定結果：標示含量（%）=（100.5±1.1）%（P=95%,K=2）。

7 討論

本方法測定結果不確定度主要來源色譜峰面積因素、溶液的定容及稱量。由于高效液相色譜儀本身影響因素很多，可通過加強對儀器的保養維修，保持其穩定的工作狀態，選用較大的定容體積，嚴格控制實驗條件，規范其操作。