不同種類的促滲劑對芍藥苷透皮吸收的影響

江蘇省泰州市中醫院（225300) 吳紅旗

赤芍具疏肝理氣、柔肝養血、緩中止痛、抗炎抗潰瘍之功效[1]，在多種中藥復方巴布劑中作為君藥或臣藥使用[2][3][4]，芍藥苷為此類巴布劑中散瘀鎮痛、抗炎的主要活性成分[5]，但其為親水性藥物，且分子量較大（480.45），如不加入促滲劑，透皮效果并不理想。因此研究不同促滲劑對赤芍中主成分芍藥苷透皮的影響，可為赤芍復方透皮制劑的研究提供基礎。選擇了氮酮、卡波姆、薄荷醇、丙二醇、β-環糊精及泊洛沙姆，這6種促滲劑來研究他們對芍藥苷透皮吸收的影響。選用增滲比(enhancement ratio, ER)、透皮速率常數(Js)及滯后時間(Tlag)作為考察指標，利用高效液相色譜法測定芍藥苷含量，對促滲劑品種及用量進行篩選。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀：包括DAD檢測器，四元泵；BP-211D分析電子天平(德國Sartorius公司)；TP-3透皮擴散儀(南京新聯電子設備有限公司)。

1.2 動物與試劑、藥品 實驗動物：雄性昆明種小鼠，體重(22±2) g(上海斯萊克實驗動物有限責任公司)。試劑、藥品：芍藥苷標準品（純度98%，南京澤朗醫藥科技有限公司）；乙腈(TEDIA)；氮酮、卡波姆、薄荷醇、丙二醇、β-環糊精、泊洛沙姆（均購于國藥集團化學試劑有限公司）。

2 實驗方法與結果

2.1 透皮擴散實驗方法

2.1.1 離體鼠皮的制備 將雄性小鼠斷頸處死，剃干凈腹部毛，剪取腹部皮膚，隨后平鋪于干凈的玻璃板上，仔細剝離皮下脂肪層和結締組織，用生理鹽水反復沖洗干凈，置于生理鹽水內，于低溫冰箱保存備用。

附圖 芍藥苷色譜圖 注：A.標準品；B.透皮樣品；1.芍藥苷

2.1.2 供給液的配置 配置濃度分別為0.1%、0.2%及0.3%的卡波姆溶液，及4%的氮酮、薄荷醇、環糊精、泊洛沙姆及丙二醇溶液，分別往上述溶液中加入芍藥苷，最終配置成濃度為1mg/mL的芍藥苷溶液。

2.1.3 透皮實驗 采用滲透擴散裝置為垂直式Franz擴散池。從冰箱中取出備用皮膚，自然解凍，將皮膚固定于Franz擴散池上(擴散池面積為2.0034cm2，體積為20.0mL)，用彈簧夾固定，在供給池中加入2mL的供給液，接受池中加滿生理鹽水作為接收液，以37℃水浴保溫，磁力攪拌子以100 r·min-1的速度攪拌。分別于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h取出接收室中1 mL接收液，隨即補加等量的新鮮接收介質。

2.2 分析方法

2.2.1 高效液相色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18(5μm,4.6 mm×150 mm)，流動相：乙腈-0.1%磷酸(14∶86)，檢測波長:230 nm，流速:1.0 mL/min，進樣量：20μL。見附圖。

2.2.2 標準品溶液的配制和標準曲線的建立 精密稱取芍藥苷對照品1.00mg，置10mL量瓶中，加甲醇使之溶解，并稀釋至刻度，搖勻，得標準儲備液。精密量取標準儲備液置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別配置得芍藥苷濃度分別為0.5、10、20、30、50、100μg/mL的系列標準液。以芍藥苷的質量濃度(x，μg/mL)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A= 33.572x-3.374，R = 0.9995。線性范圍為：0.5μg/mL～100μg/mL。

附表1 不同種類促滲劑對芍藥苷促滲作用的滲透動力學方程及滲透參數 (n=3, mean±s)

附表2 不同濃度卡波姆對芍藥苷促滲作用的滲透動力學方程及滲透參數(n=3, mean±s)

2.2.3 精密度試驗和穩定性試驗 取濃度為0.1mg/mL的標準品溶液，自動進樣20μL，重復6次，芍藥苷峰面積RSD值為1.49%。同樣取濃度為0.1mg/mL的標準品溶液，自動進樣20μL，每隔2h進樣1次，8h內4次測定結果的峰面積基本保持不變，芍藥苷峰面積RSD值為1.34%。

2.2.4 接受液的預處理 將分別在l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h時抽取的1.0mL接受液，置于1.5mL的離心管中，在恒溫水浴鍋上60℃揮干，加入1.0mL甲醇，超聲波振蕩溶解殘渣，14000 r/min離心15min，吸取上澄清液0.5mL移至高效液相樣品瓶中[6]。

2.3 結果

2.3.1 芍藥苷的累計滲透量(Q) 實驗中擴散池容積為20.0mL，有效擴散面積為2.0034cm2，取樣量為1 mL，按照下列公式計算累積透過量Q(μg/cm2)。其中，Cn為t時間濃度的測量值，Ci為t時間以前濃度的測量值，Vo為接收液的總體積，Vi為每次取樣的體積，A為有效擴散面積。實驗結果見附表1。

2.3.2 芍藥苷的透皮速率常數（Js） 以芍藥苷的累計滲透量(Q)對滲透時間t進行線性回歸，所得方程即為滲透動力學方程[7]，其斜率為芍藥苷的透皮速率常數Js（ μg·h-1·cm-2），結果見附表1、附表2 。直線與X軸的交點為滯后時間（Tlag）。增滲比（ER）為加入滲透促進劑后與未加入滲透促進劑時藥物在12h內的透皮速率常數之比。所有數據都用t檢驗進行統計學處理。

3 討論

本實驗考察了薄荷醇、丙二醇、卡波姆、泊洛沙姆、β-環糊精、及氮酮對芍藥苷的促滲作用。實驗的結果表明，卡波姆及氮酮對芍藥苷均具有顯著的促滲作用，與空白組相比，ER分別為5.598及5.300。泊洛沙姆、β-環糊精、薄荷醇、丙二醇的ER較小，均在1.5左右。

氮酮對芍藥苷的促滲效果較好，但與卡波姆相比氮酮存在皮膚刺激性[8]。卡波姆遇水后可形成溶脹的三維網狀結構，皮膚粘附效果好，形成的親水凝膠可以吸收組織滲透液，有利于分泌物的排除，增加皮膚角質層的含水量，使基底角質層的細胞膨脹，藥物在該層形成儲庫，從而維持一定的藥物釋放和作用時間，促進水溶性物質經水性通道滲透吸收，這也可能是卡波姆對芍藥苷促滲效果好的原因。

進一步選擇卡波姆作為芍藥苷的透皮吸收促滲劑，并考察了不同濃度卡波姆溶液對芍藥苷的促滲作用，實驗結果見附表2。結果表明，0.2%卡波姆凝膠促滲效果最好，促滲效果并沒有隨著卡波姆濃度的提高而增加，可能是因為隨著濃度的增加，卡波姆的粘度增大，阻滯作用增強，對藥物的促滲作用降低。因此，最終選擇0.2%卡波姆凝膠作為芍藥苷的透皮吸收促滲劑，這為芍藥苷透皮吸收制劑處方的優化提供了實驗依據。