HPLC-ELSD測定補(bǔ)中益氣顆粒中黃芪甲苷含量

陳曉虎

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)所 重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

中藥工業(yè)

HPLC-ELSD測定補(bǔ)中益氣顆粒中黃芪甲苷含量

陳曉虎*

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)所 重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

目的建立補(bǔ)中益氣顆粒中黃芪甲苷的含量測定方法。方法采用Diamonsil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈-水(35∶65)，流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃，蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度110 ℃，氣體流速為3.0 L·min-1。結(jié)果黃芪甲苷濃度在2.682～21.456 μg內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)；平均回收率為98.3%，RSD=1.0%。結(jié)論該方法靈敏、準(zhǔn)確，可用于補(bǔ)中益氣顆粒的質(zhì)量控制。

HPLC；ELSD；補(bǔ)中益氣顆粒；黃芪甲苷

補(bǔ)中益氣顆粒由黃芪、黨參、甘草等10味中藥組成，具有補(bǔ)中益氣，升陽舉陷的功效，用于脾胃虛弱，中氣下陷，體倦乏力，食少腹脹，久瀉、脫肛、子宮脫垂等癥[1-2]。黃芪為方中君藥，有補(bǔ)氣升陽，固表止汗的功效，而黃芪甲苷為黃芪中特征性成分。本實(shí)驗(yàn)參考《中國藥典》2010年版一部黃芪含量測定方法及相關(guān)文獻(xiàn)[3-4]，建立HPLC-ELSD測定補(bǔ)中益氣顆粒中黃芪甲苷含量的方法，可更全面地控制本品質(zhì)量。

1 儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜儀；黃芪甲苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110781-201001，含量測定用)；補(bǔ)中益氣顆粒(北京漢典制藥有限公司，規(guī)格：3 g/袋，批號：110301，111001，110502)；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18色譜柱(200 mm ×4.6mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(35∶65)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；蒸發(fā)光散射檢測器條件：漂移管溫度110 ℃，氮?dú)饬魉?.0 L·min-1；進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品10袋，混合均勻，研細(xì)，取約8 g，精密稱定，精密加入甲醇100 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50 mL，蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次25 mL，棄去乙醚液，水液用水飽和的正丁醇振搖提取5次(30，30，20，20，20 mL)，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，每次40 mL，正丁醇液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至2 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果見圖1。供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)位置上有色譜峰，主峰與其他成分分離良好，陰性對照對黃芪甲苷峰無干擾。

A.黃芪甲苷對照品 B.補(bǔ)中益氣顆粒 C.缺黃芪陰性對照品圖1 補(bǔ)中益氣顆粒HPLC圖

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取濃度為0.536 4 mg·mL-1的黃芪甲苷對照品溶液2，5，10，15，20，40 μL進(jìn)樣，測定峰面積，以黃芪甲苷的進(jìn)樣量(μg)的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，以峰面積的自然對數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=1.220 4X+11.771(r=0.999 9)，表明黃芪甲苷進(jìn)樣量在2.682～21.456 μg線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一黃芪甲苷對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測得RSD=1.5%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液(批號：110502)，分別于0，1，2，4，8，12 h測定，結(jié)果RSD=0.8%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品(批號：110502)，依法分別制備6份供試品溶液，測定含量，結(jié)果RSD=1.8%，表明方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

取補(bǔ)中益氣顆粒樣品(批號：110502，含量為0.229 4 mg·g-1)約4.0 g，精密稱定，平行做6份，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液(0.536 4 mg·mL-1)5 mL，再按供試品溶液制備方法處理，測定含量，并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)

注：黃芪甲苷對照品加入量均為0.976 0 mg

2.10 檢測限和定量限

在選定的色譜條件下，將黃芪甲苷對照品溶液進(jìn)行稀釋，進(jìn)樣，當(dāng)信噪比為3時，黃芪甲苷進(jìn)樣量為檢測限，當(dāng)信噪比為10時，黃芪甲苷進(jìn)樣量為定量限。結(jié)果表明黃芪甲苷檢測限和定量限分別為0.075，0.25 μg。

2.11 樣品含量測定

取3批補(bǔ)中益氣顆粒(批號：110301，111001，110502)，按上述方法測定黃芪甲苷的含量，結(jié)果分別為0.83，0.86，0.71 mg/袋。

3 討論

黃芪中特征性成分黃芪甲苷無紫外吸收，無法用常規(guī)的紫外檢測器檢測，故參考《中國藥典》2010年版一部黃芪項(xiàng)下黃芪甲苷測定方法，選用通用型質(zhì)量檢測器ELSD[5-6]，結(jié)果響應(yīng)值良好。

分別考察了甲醇-水，乙腈-水等流動相，結(jié)果采用乙腈-水(35∶65)，黃芪甲苷色譜峰保留時間合適，峰形對稱，分離度好。

分別考察了甲醇、乙醇、50%甲醇、50%乙醇等提取溶劑，結(jié)果甲醇提取效率最高；分別考察了加熱回流和超聲提取兩種提取方式，結(jié)果相同時間下回流提取方式所得黃芪甲苷含量高于超聲提取方式；分別考察了水飽和正丁醇提取次數(shù)、正丁醇飽和的水洗滌次數(shù)，結(jié)果采用上述方法，黃芪甲苷基本提盡，雜質(zhì)干擾最小。

此方法提取步驟較多，目標(biāo)成分容易損失，尤其是在萃取過程中，切忌振搖過于劇烈，產(chǎn)生乳化現(xiàn)象時，可采用適當(dāng)加熱的方式破除，或放置較長時間使自然分層。

上述方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用HPLC-ELSD法測定補(bǔ)中益氣顆粒中黃芪甲苷的含量，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，可用于補(bǔ)中益氣顆粒中黃芪甲苷的定量分析。

[1] 徐家騮，張誠光，劉廣南.補(bǔ)中益氣顆粒劑與湯劑、丸劑藥理作用比較研究[J].中藥藥理與臨床，1998，14(1)：14-16.

[2] 唐艷，陳冬梅.補(bǔ)中益氣丸預(yù)防盆腔炎復(fù)發(fā)62例療效觀察[J].中成藥，2011，33(1)：189-190.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283.

[4] 吳宏華，宋劍鋒.RP-HPLC法測定補(bǔ)中益氣顆粒中橙皮苷含量[J].海峽藥學(xué)，2012，24(6)：54-56.

[5] 陳乃江.HPLC-ELSD法測定肝速康膠囊中齊墩果酸的含量[J].中國現(xiàn)代中藥，2008，10(10)：34-36.

[6] 崔麗娜，孫佳明，張輝.HPLC-ELSD法測定血栓心脈寧膠囊中膽酸的含量[J].吉林中醫(yī)藥，2011，31(2)：165-167.

DeterminationofAstragalosideⅣinBuzhongYiqiGranulesbyHPLC-ELSD

CHENXiaohu*

(ChongqingInstituteforFoodandDrugControl，ChongqingengineeringresearchcenterforPharmaceuticalprocessandqualitycontrol，Chongqing401121，China))

Objective：To establish HPLC-ELSD method for determination of Astragaloside Ⅳ in Buzhong Yiqi Granules.MethodsDiamonsil C18column(200 mm×4.6 mm，5 μm)was adopted and mobile phase consisted of acetonitrile-water(35∶65).The flow rate was 1.0 mL·min-1.The column temperature is 30 ℃.The ELSD inlet heater was set at 110 ℃，and the flow rate of N2is 3.0 L·min-1.ResultsThe linear range was 2.682～21.456 μg(r=0.999 9).The average recovery rate was 98.3%(RSD=1.0%).ConclusionThe method is sensitive，accurate，and can be used for the quality control of Buzhong Yiqi Granules.

HPLC；ELSD；Buzhong Yiqi Granules；Astragaloside Ⅳ

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陳曉虎，主管中藥師，研究方向：藥品質(zhì)量；Tel：(023)65072753，E-mail：chenxiaohu78@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.03.014

2013-09-10)