反相液相色譜法測定鹽酸去氧腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量

蔣宇丹 施建國

( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

鹽酸去氧腎上腺素為腎上腺素受體激動藥，具有收縮血管的作用。臨床上用于治療休克及維持血壓。鹽酸去氧腎上腺素具有酚羥基結(jié)構(gòu)，易被氧化，故制成注射液需加入依地酸二鈉作為穩(wěn)定劑[1]。常用的依地酸二鈉的濃度一般為0.005%～0.1%（W/V）[2]。依地酸二鈉大量吸收時將引起鈣的減少而出現(xiàn)低血鈣癥狀[3]。因此，控制依地酸二鈉的加入量是非常必要的。目前該注射液現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)尚未對依地酸二鈉的含量進(jìn)行控制，也未有相關(guān)報道。依地酸二鈉在中國藥典現(xiàn)行版中雖有收載，但含量測定方法為容量分析法[4]，無法對微量依地酸二鈉進(jìn)行測定，也無法消除注射液中其他成分的干擾，不適合注射液中依地酸二鈉的檢測。本文參考文獻(xiàn)[5]建立了反相液相色譜法測定鹽酸腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量。

1 儀器與試藥

Agilent L1260液相色譜儀，VWD檢測器、自動進(jìn)樣器（安捷倫科技中國有限公司）。Sartorius CPA225D電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。依地酸二鈉對照品（批號：20110601，含量100.2%，湖南爾康制藥股份有限公司）。鹽酸去氧腎上腺素注射液（1 ml：10 mg）由本公司提供。甲醇、10%四丁基氫氧化銨為色譜純，水為超純水，甲酸及其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Kromasil C8色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇-10%四丁基氫氧化銨-98%甲酸-水( 125：12：0.5：875)，檢測波長254 nm，柱溫40 ℃，流速1.5 ml/min，進(jìn)樣量 20 μl。

2.2 依地酸二鈉對照品溶液的配制

取依地酸二鈉對照品適量，加水溶解并稀釋制成1 mg/ml的溶液。測定前，精密量取1 ml置100 ml量瓶中，加水20 ml，再加0.1 mol/L的三氯化鐵溶液2.0 ml，搖勻，超聲15 min；加水至刻度搖勻，備用。

2.3 供試品溶液的配制

取鹽酸去氧腎上腺素注射液10 ml置100 ml量瓶中，加水20 ml，再加0.1 mol/L的三氯化鐵溶液2.0 ml，搖勻，超聲15 min，加水稀釋至刻度，搖勻。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性試驗

按處方量，不加依地酸二鈉，配制空白輔料溶液，按2.3項下方法配制溶液，結(jié)果顯示鹽酸去氧腎上腺素注射液中鹽酸去氧腎上腺素及其他輔料對本方法中依地酸二鈉的測定均無干擾，該方法具有較強專屬性（圖1）。2.4.2 線性范圍

B：含依地酸二鈉峰（1為依地酸二鈉峰）圖1 依地酸二鈉的RP-HPLC圖譜

分別精密量取依地酸二鈉對照品溶液0.5、0.8、1.0、1.5、2.0、3.0 和 5.0 ml置 100 ml量瓶中，加水 20 ml， 加0.1 mol/L的三氯化鐵溶液2.0 ml，搖勻，超聲15 min，加水稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為5.06，8.09，10.11，15.16，20.22，30.33，50.55 μg/ml的溶液。分別精密量取上述溶液20 μl，按2.1項下方法測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，做線性回歸，回歸方程（n=7）為：Y=20.27 X-17.08，r=0.999。結(jié)果表明，依地酸二鈉在5.06~50.55 μg/ml 濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.3 精密度試驗

取同一批供試品，分別按2.3配制6 份供試品溶液并測定，測得依地酸二鈉平均含量為0.010 0%（W/V），RSD為0.96% （n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.4 回收率試驗

分別按處方量配制含依地酸二鈉80%、100%、120%的鹽酸去氧腎上腺素注射液各3份，按2.3配制供試品溶液，測定并計算回收率，平均回收率為101.0%，RSD=0.31%（表1）。

表1 樣品的回收試驗

2.5 供試品測定

取2.2對照品溶液和2.3供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀分析，按外標(biāo)法以峰面積計算含量。測定三批鹽酸去氧腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量分別為0.009 3%，0.009 1%，0.010 0%（W/V）。

3 討論

3.1 依地酸二鈉與三氯化鐵反應(yīng)時間的確定

將依地酸二鈉與三氯化鐵溶液分別于超聲儀超聲5、10、15、20、25、30 min 后配制溶液，分別精密量取20μl注入液相色譜儀分析，結(jié)果表明測定樣品在超聲10 min時反應(yīng)已基本完全，為減少對照品與供試品的反應(yīng)誤差，將反應(yīng)時間定為15 min。

3.2 色譜柱的選擇

文獻(xiàn)[6]采用苯乙烯-二乙烯苯柱對依地酸二鈉進(jìn)行測定。考慮到色譜柱的通用性，本法采用三根不同品牌的C8柱進(jìn)行試驗，其對依地酸二鈉的測定無差異，峰形與分離效果均好，因此選用C8柱建立檢驗方法。

3.3 結(jié)論

經(jīng)方法學(xué)驗證，本文所建立的反相液相色譜法操作簡單、專屬性強，能準(zhǔn)確測定鹽酸去氧腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量。

[1] Smith G, Hasson K, Clements JA. Effects of ascorbic acid and disodium edetate on the stability of isoprenaline hydrochloride injection [J]. Pharm Sci, 1984, 9(3): 209-215.

[2] 羅RC，舍斯基PJ，韋勒PJ. 藥用輔料手冊[M]. 鄭俊民,譯. 4版. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 263.

[3] 蕭三貫. 最新國家藥用輔料標(biāo)準(zhǔn)手冊[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技電子出版社, 2006: 50-52.

[4] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典: 2010年版（二部）[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 1206.

[5] 盧京光, 裴琳, 周景岳, 等. 反相離子對色譜法測定硫普羅寧注射液中乙二胺四醋酸鹽的含量[J]. 藥物分析雜志,2011, 31(4): 772-775.

[6] Hall L, Takahashi L. Quantitative determination of disodium edetate in ophthalmic and contact lens care solutions by reversed-phase high-performance liquid chromatography [J].Pharm Sci, 1988, 77(3): 247-250.