雙參活血膠囊中藥成分鑒定與丹參酮ⅡA的測定

于天蔚

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，河北 唐山 063000)

近年來，隨著科學技術的發(fā)展及新的檢驗設備應用，尤其是高效液相色譜(HPLC)儀在藥品檢驗方面的推廣，提高了實驗室的檢測水平［1］。HPLC具有快速、靈敏的特點，能同時進行定性及定量的測定。中成藥的檢測較之西藥更具有一定的難度與復雜性，特別是復方制劑［2］。雙參活血膠囊為研發(fā)自制藥，主要成分為人參、丹參及益母草。為了確保藥品質量，本研究通過對其中人參、丹參及益母草采用薄層色譜(TLC)法對其進行鑒別，并采用HPLC法測定雙參活血膠囊中丹參酮ⅡA的含量，結果如下。

1 材料

1.1 儀器 美國Waters公司2690 HPLC儀、雙通道2487紫外檢測器及Millennium32色譜數(shù)據(jù)工作站;日本島津公司UV2401型紫外-可見分光光度計、CTO-10ASVP柱溫箱及SPD-10Avp型紫外檢測器;美國G1311A Agilent四元泵及G13222-脫氣機;北京瑞邦興業(yè)科技有限公司KQ-250DE臺式數(shù)控超聲波清洗器;上海天平儀器廠TG-332A微量天平。

1.2 藥品及試劑 雙參活血膠囊，中國藥品生物檢定所提供，批號:766200213;人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、丹參酮ⅡA、鹽酸小蘇堿及色譜純，上海豪申化學試劑有限公司;滅菌蒸餾水，安徽雙鶴藥業(yè)有限責任公司;甲純?yōu)樯V純，其余均為分析純。

2 方法與結果

2.1 丹參酮ⅡA的測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil G18(4.6 mm ×200.0 mm，10 μm);流動相:甲醇 - 水(80∶20);柱溫:30℃;流量:1.0 mL/min;檢測波長:268 nm;進樣量:20 μL［3-4］。

2.1.2 溶液制備 雙參活血膠囊內容物，研細，精密稱取1 g置于50 mL容量瓶中，加入25 mL甲醇，超聲處理15 min，搖勻，過濾，制成供試品溶液。另按處方比例稱取處方量的人參及益母草等除丹參以外的藥材，同工藝、同方法制成陰性對照品溶液。

2.1.3 制備標準曲線 首先取4 mg丹參酮ⅡA，置于10 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解并定容為0.40 mg/mL的對照品溶液，分別取 0.6、0.5、0.4、0.3、0.2 mL 的0.40 mg/mL對照品溶液置于10 mL容量瓶中，分別加入甲醇定容，搖勻后以0.45 μm微孔濾膜過濾，分別取20 μL進樣。按樣品處理標準操作，制備標準曲線，以待測物濃度C為縱坐標，待測物峰面積A為橫坐標，回歸方程:Y=1.424 ×105+4.107 ×104(r2=0.999 40)。計算出濃度為0.08 ～0.24 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

2.1.4 干擾試驗 分別精密吸取20 μL丹參酮ⅡA對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，進樣，測定。結果在供試品溶液色譜及對照品溶液色譜相應位置均有一保留時間相同的色譜峰，而陰性對照溶液在此保留時間內無干擾。

2.1.5 精密度試驗 精密吸取 20 μL 0.24 μg/mL 的丹參酮ⅡA對照品溶液，進樣測定5次。測定結果相對標準差(RSD)=0.65%。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 首先取在室溫下保存的丹參酮ⅡA 0.40 mg/mL 對照品溶液分別在第1、2、4、6、8 h 進樣測定，測定結果顯示丹參酮ⅡA峰面積的RSD為0.7%，顯示該方法具有較好的穩(wěn)定性。

2.1.7 重復性試驗 取同一樣品，精密稱取5份，按1.3.2項方法制成供試品溶液，重復進樣5次，平均每份含丹參酮ⅡA 0.220 g，RSD=0.56%。

2.1.8 樣品含量測定 精密稱取5份雙參活血膠囊各1 g按 1.3.2 項方法制成供試品溶液，吸取 20 μL 24 μg/mL丹參酮ⅡA對照品溶液及供試品溶液，進樣，分別對丹參酮ⅡA的峰面積進行測定，并用外標法對測定結果的含量進行計算，含量分別為 0.218、0.217、0.216、0.212、0.210 mg。

2.1.9 加樣回收率實驗 取5份已測含量的丹參酮ⅡA，分別加入丹參酮ⅡA 0.40 mg/mL對照品溶液，對回收率進行測定。樣品測定丹參酮ⅡA平均回收率為97.6%，DRS=1.05%，符合規(guī)定。見表1。

表1 5份已測含量的丹參酮ⅡA加樣回收率測定結果

2.2 中藥成份鑒定

2.2.1 人參的鑒定

2.2.1.1 溶液制備 取雙參活血膠囊10粒研勻，加乙醚30 mL，超聲處理10 min后常規(guī)過濾，加入50 mL水飽和的正丁醇，超聲處理30 min后過濾，加入0.5%氫氧化鈉溶液洗滌后，將0.5%氫氧化鈉溶液棄去，加入水飽和的正丁醇水洗至中性。取正丁醇液，蒸干，殘渣加入甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。同時按照上述供試品溶液制備方法，精密稱取人參1 g，制成對照藥材溶液;另取人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1加入甲醇配制為1 mg/mL的混合對照品溶液。根據(jù)雙參活血膠囊處方比例，稱取丹參、益母草等除人參以外的藥材，同工藝制成陰性成品，按照上述方法制備陰性對照溶液。

2.2.1.2 鑒定方法 分別吸取上述不同溶液各4～6 μL，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以13∶7∶2的三氯甲烷-甲醇-水于10℃以下放置12 h的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，雙參活血膠囊各供試品在與對照品色譜相應的位置上，顏色斑點相同，在此位置上陰性對照無斑點顯示(見圖1)。

2.2.2 丹參的鑒定

2.2.2.1 溶液制備 取雙參活血膠囊10粒研勻，加乙醚40 mL，超聲處理30 min后常規(guī)過濾，殘渣加乙酸乙酯1 mL溶解，作為供試品溶液。精密稱取丹參1 g，加入75%乙醇30 mL，加熱回流1 h，過濾并蒸干濾液，殘渣加熱水10 mL溶解，稀鹽酸調節(jié)pH至2，后用乙醚振搖提取并合并乙醚液，蒸干，加入乙酸乙酯使殘渣溶解，作為對照藥材溶液。取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成1 mg/mL的對照品溶液。根據(jù)雙參活血膠囊處方比例，稱取人參、益母草等除丹參以外的藥材，同工藝制成陰性成品，按照上述方法制備陰性對照溶液。

2.2.2.2 鑒定方法 分別吸取上述不同溶液各10～15 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，雙參活血膠囊各供試品在與對照品色譜相應的位置上，顏色斑點相同，在此位置上陰性對照無斑點顯示(見圖1)。

2.2.3 益母草的鑒定

2.2.3.1 溶液制備 取雙參活血膠囊30粒研勻，加80%乙醇50 mL，加熱回流l h，過濾，濾液蒸干，殘渣加l%鹽酸5 mL溶解，過濾，由碳酸鈉調節(jié)濾液滴pH至8，過濾，蒸干，殘渣加乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液。精密稱取鹽酸水蘇堿對照品1 mg，制成1 mg/mL的對照品溶液。根據(jù)雙參活血膠囊處方比例，稱取人參、丹參等除益母草以外的藥材，同工藝制成陰性成品，按照上述方法制備陰性對照溶液。

2.2.3.2 鑒定方法 分別吸取上述不同溶液分別點于同一硅膠G薄層板上，以比例為4∶1∶1的正丁醇-醋酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，晾干。供試品色譜中，雙參活血膠囊各供試品在與對照品色譜相應的位置上，顏色斑點相同，在此位置上陰性對照無斑點顯示(見圖1)。

3 討論

雙參活血膠囊是治療心腦血管疾病、各種血栓癥的復方純中藥制劑，具有通暢脈絡、活血化瘀的作用。為了對雙參活血膠囊的質量進行控制，本研究對制劑中的丹參、人參、益母草采用TCL定性鑒別，從鑒別結果顯示，供試品色譜中，雙參活血膠囊中人參、益母草及丹參各供試品在與對照品色譜及對照藥材相應的位置上，顏色斑點相同，在此位置上陰性對照無斑點顯示［5-7］。采用HPLC法對雙參活血膠囊中的主要成分丹參酮ⅡA進行檢測，顯示5 份樣品含量分別為 0.218、0.217、0.216、0.212、0.210 mg。本研究結果說明，TLC法可對雙參活血膠囊中各中藥材進行鑒定，丹參酮ⅡA是中藥丹參的脂溶性有效成分，以此指標作為雙參活血膠囊的質控指標可準確掌握每批藥品的質量。

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