瑞香狼毒對健康人體外外周血淋巴細胞微核率的影響

張三潤等

[摘要] 目的 初步探討瑞香狼毒對健康年輕人體外外周血淋巴細胞內染色體畸變的影響效應。 方法 在外周血培養過程中加入不同劑量的瑞香狼毒水煎液，顯微鏡下檢測微核率的變化，通過x2檢驗作統計學分析。 結果 瑞香狼毒終濃度為2.5、5、10mg/mL實驗組的微核出現率分別是1.63‰、5.13‰和7.25‰，對照組微核率為1.50‰，第1個低劑量實驗組微核率與對照組比較無統計學差異（P>0.05）。后兩個中劑量和高劑量實驗組微核率顯著高于對照組，并具有統計學差異（P<0.01）。 結論 超過一定劑量的瑞香狼毒水煎液可能對健康人體外外周血淋巴細胞遺傳物質有不同程度的毒性作用。

[關鍵詞] 瑞香狼毒；淋巴細胞；微核

[中圖分類號] Q464 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）16-40-03

Effects of Stellera chamaejasme L. on the health of human lymphocyte micronucleus rate of peripheral blood

ZHANG Sanrun ZHOU Haole ZHENG Mingxia BUREN Qiqige WANG Jinfeng ZHANG Dongze HAO Xingxia

Department of Genetics， Inner Mongolia Medical University， Hohhot 010059， China

[Abstract] Objective To discuss toxicity effect of Stellera chamaejasme L.on lymphocyte chromosome in healthy young human peripheral blood. Methods Stellera chamaejasme L.water decoction with different doses was added to the peripheral blood lymphocyte culture fluid， then micronucleus rates were detected under the microscope. The significance tests were conducted by x2 test method. Results The micronucleus rates of the experimental groups in stellera chamaejasme L. exposure concentration of 2.5， 5， 10mg/ml were 1.63‰， 5.13‰ and 7.25‰. The micronucleus rate of control group was 1.50‰. The micronucleus rate of the first low dose experimental group compared with the control group no significant difference（P>0.05）. The micronucleus rates of middle and high doses of the experimental groups were significantly higher than that of control group （P<0.01）. Conclusion Stellera chamaejasme L. of above a certain dose may exert different degree of damage to genetic material on the health of human peripheral blood lymphocytes.

[Key words] Stellera chamaejasme L.； Lymphocyte； Micronucleus

瑞香狼毒屬于瑞香科，是多年生草本植物，具有軟堅散結、去痛、止咳祛痰、抗菌和抗病毒等多種藥效，可作為一種理想的天然藥物進行開發。近年來的研究發現，狼毒提取物對腫瘤細胞有較強的抑制活性，例如，肺癌、食管癌、肝癌等惡性腫瘤的治療，已廣泛應用于我國民間[1]，國內外很多學者也報道，瑞香狼毒的各種提取物或分離出來的某種單一成分均具有顯著的抗腫瘤作用，通過誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞周期等機制而起到抗腫瘤功效[2-8]。但關于瑞香狼毒在治療疾病過程中，對人體是否有毒副作用方面的報道較少，本文就瑞香狼毒對人外體外周血淋巴細胞染色體毒性進行了初步研究，報道如下。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑

觀察微核所用的BK5000生物顯微鏡由重慶奧

特光學儀器有限責任公司生產；1640混合培養基由北京易世盛達科技發展有限公司提供。

1.2 血樣

外周血由內蒙古醫科大學8位健康大學生提供，男4例，女4例，平均年齡21歲。他們均具有良好的生活習慣，不抽煙不喝酒，沒有接觸過能引起染色體畸變的誘變劑以及其他不良環境因素，均無染色體病家族史。

1.3 藥品

瑞香狼毒購自包頭市醫藥有限責任公司，取瑞香狼毒生藥片10g，加蒸餾水100mL，煮沸后文火煎15min，濾去藥渣后，加蒸餾水至100mL，高壓滅菌后作為原液放入冰箱中備用。

1.4 實驗分組

上述每位大學生被抽取的外周血分為兩份，一份用于染毒實驗組，另一份用于對照實驗組。染毒

注：與對照組比較，*P<0.01endprint

實驗組培養3瓶，每瓶培養液在加入外周血的同時分別加入不同濃度的瑞香狼毒水煎液0.5mL，使3瓶培養液中瑞香狼毒的終濃度分別為2.5、5、10mg/mL。對照實驗組培養1瓶，培養時在加入外周血的同時加入0.5mL生理鹽水。

1.5 微核觀察和數據分析

微核標本的制備與檢測方法參考Chang等[9]的方法進行。每瓶培養液制作的微核標本在顯微鏡下觀察1000個胞漿完整的淋巴細胞。在這1000個細胞中，如果看到與細胞核顏色一樣，并且位于細胞核附近游離的圓形或橢圓形小核（小于細胞核1/3）的細胞計為1個微核細胞，用千分率（‰）表示微核率。微核觀察數據用x2檢驗方法進行統計分析。

2 結果

3 討論

微核是由染色體數目或結構畸變導致的。在有絲分裂過程中，如果細胞受到某些環境因子的刺激會引起染色體發生斷裂，形成無著絲粒的短片，或導致紡錘絲斷裂，使整條染色體失去紡錘絲的牽引作用，上述無著絲粒的短片或失去紡錘絲的整條染色體，在分裂末期不能參與子細胞核的形成，而形成了位于子核之外的核塊。當子細胞進入下一次分裂間期時，這些核塊便濃縮成主核之外的獨立小核，即微核。所以，在間期細胞中的微核是染色體畸變的結果，它是染色體畸變后所表現出來的一種形式，它在細胞中的出現頻率一般與染色體畸變率呈正相關[10]。大量研究結果表明，隨著環境中誘變劑劑量的增加或輻射的不斷累積微核的出現率會隨之增高。所以，現在國內外很多學者以微核率為指標來檢測染色體畸變程度。例如，一些食品添加劑、某些化學試劑、某些新藥以及其他環境因素是否具有遺傳毒性效應均可利用檢測微核率的簡易手段進行有效的評價。國內外學者運用不同的研究方法，以不同的指標檢測了狼毒的毒性作用。劉萍等[11]報道狼毒大載水提物在較高劑量下對小鼠有致突變作用，但在低劑量下無明顯毒性。楊珺等[12]研究表明：用瑞香狼毒提取液干預，結果對大鼠原代培養的肺成纖維細胞的增殖有比較明顯的抑制效應，并且隨著瑞香狼毒提取液劑量的增加而這種抑制效應也隨著加強。同時當瑞香狼毒提取液超過一定劑量時表現出一定的細胞毒性作用。本實驗結果表明，外周血淋巴細胞培養液中瑞香狼毒終濃度為2.5mg/mL時未檢測到微核率的顯著變化，說明低劑量的瑞香狼毒可能不會引起遺傳損傷；而中劑量（5mg/mL）和高劑量（10mg/mL）的瑞香狼毒可使健康人體外淋巴細胞微核率明顯增高，說明超過一定劑量的瑞香狼毒水煎液可能對人體染色體有致損傷作用，其損傷機理是引起染色體斷裂還是染色體不分離還有待于進一步研究。我們知道，染色體即使是微小片段的改變也會累及到很多基因，與致癌、致畸以及其他疾病的發生有著密切的聯系。所以，狼毒雖然有抗腫瘤等治療多種疾病的功效，但不能忽視對人體可能具有的潛在的遺傳毒性作用。

[參考文獻]

[1] 潘國鳳，楊慶，翁小剛，等.瑞香狼毒抗腫瘤作用機制研究進展[J].中華中醫藥雜志，2007，22（12）：873.

[2] 王敏，賈正平，馬駿，等.瑞香狼毒總黃酮提取物的抗腫瘤作用[J].中國中藥雜志，2005，30（8）：603.

[3] 邢立強，李旺，孫黎，等.瑞香狼毒提取物逆轉肺癌細胞耐藥的免疫組化研究[J].陜西中醫，2007，28（4）：500.

[4] 楊柯，張京玲，黃謙，等.狼毒水提液對人A549肺癌細胞凋亡的影響[J].實用中西醫結合臨床，2011，11（5）：88.

[5] 劉曉霓，李玉潔，楊慶，等.瑞香狼毒醇提物體外抗腫瘤作用研究[J].中國中藥雜志，2010，35（22）：3048-3051.

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[6] 李鴻君，邢立強，李旺，等.瑞香狼毒水提取物對肺腺癌細胞株耐藥及凋亡的影響[J].河北醫藥，2013，35（6）：823-825.

[7] 潘國鳳，楊慶，劉安，等.瑞香狼毒藥效組分抑制小鼠皮下移植瘤H22的實驗研究[J].中華中醫藥雜志，2009，24（4）：438-442.

[8] 王義善，鄭秋生，賈喜鳳，等.狼毒抑制降低癌細胞惡性表型小鼠體內轉移及彗星電泳實驗研究[J].中醫雜志，2006，47（增刊）：148-149.

[9] Chang WP，Tsai MS，Hwang JS，et al. Follow-up in the micronucleus frequencies and its subsets in human population with chronic lowdose gamma-irradiation exposure[J].Mutat Res，1999，428（1-2）：99-105.

[10] 楊茜，杜金茹，栗淑媛，等.錳中毒患者外周血淋巴細胞微核率的觀察[J].化工勞動保護（工業衛生與職業病分冊），1995，16（3）：110-111.

[11] 劉萍，杜娟，于麗華，等.大戟水提物對小鼠致突變作用的實驗研究[J].山東醫科大學學報，2000，38（1）：27，31.

[12] 楊珺，王世嶺，吳坤，等.瑞香狼毒提取液對大鼠肺成纖維細胞增殖的抑制與其細胞毒性作用[J].中國臨床康復，2005，9（31）：139-141.

（收稿日期：2014-03-24）endprint

實驗組培養3瓶，每瓶培養液在加入外周血的同時分別加入不同濃度的瑞香狼毒水煎液0.5mL，使3瓶培養液中瑞香狼毒的終濃度分別為2.5、5、10mg/mL。對照實驗組培養1瓶，培養時在加入外周血的同時加入0.5mL生理鹽水。

1.5 微核觀察和數據分析

微核標本的制備與檢測方法參考Chang等[9]的方法進行。每瓶培養液制作的微核標本在顯微鏡下觀察1000個胞漿完整的淋巴細胞。在這1000個細胞中，如果看到與細胞核顏色一樣，并且位于細胞核附近游離的圓形或橢圓形小核（小于細胞核1/3）的細胞計為1個微核細胞，用千分率（‰）表示微核率。微核觀察數據用x2檢驗方法進行統計分析。

2 結果

3 討論

微核是由染色體數目或結構畸變導致的。在有絲分裂過程中，如果細胞受到某些環境因子的刺激會引起染色體發生斷裂，形成無著絲粒的短片，或導致紡錘絲斷裂，使整條染色體失去紡錘絲的牽引作用，上述無著絲粒的短片或失去紡錘絲的整條染色體，在分裂末期不能參與子細胞核的形成，而形成了位于子核之外的核塊。當子細胞進入下一次分裂間期時，這些核塊便濃縮成主核之外的獨立小核，即微核。所以，在間期細胞中的微核是染色體畸變的結果，它是染色體畸變后所表現出來的一種形式，它在細胞中的出現頻率一般與染色體畸變率呈正相關[10]。大量研究結果表明，隨著環境中誘變劑劑量的增加或輻射的不斷累積微核的出現率會隨之增高。所以，現在國內外很多學者以微核率為指標來檢測染色體畸變程度。例如，一些食品添加劑、某些化學試劑、某些新藥以及其他環境因素是否具有遺傳毒性效應均可利用檢測微核率的簡易手段進行有效的評價。國內外學者運用不同的研究方法，以不同的指標檢測了狼毒的毒性作用。劉萍等[11]報道狼毒大載水提物在較高劑量下對小鼠有致突變作用，但在低劑量下無明顯毒性。楊珺等[12]研究表明：用瑞香狼毒提取液干預，結果對大鼠原代培養的肺成纖維細胞的增殖有比較明顯的抑制效應，并且隨著瑞香狼毒提取液劑量的增加而這種抑制效應也隨著加強。同時當瑞香狼毒提取液超過一定劑量時表現出一定的細胞毒性作用。本實驗結果表明，外周血淋巴細胞培養液中瑞香狼毒終濃度為2.5mg/mL時未檢測到微核率的顯著變化，說明低劑量的瑞香狼毒可能不會引起遺傳損傷；而中劑量（5mg/mL）和高劑量（10mg/mL）的瑞香狼毒可使健康人體外淋巴細胞微核率明顯增高，說明超過一定劑量的瑞香狼毒水煎液可能對人體染色體有致損傷作用，其損傷機理是引起染色體斷裂還是染色體不分離還有待于進一步研究。我們知道，染色體即使是微小片段的改變也會累及到很多基因，與致癌、致畸以及其他疾病的發生有著密切的聯系。所以，狼毒雖然有抗腫瘤等治療多種疾病的功效，但不能忽視對人體可能具有的潛在的遺傳毒性作用。

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[5] 劉曉霓，李玉潔，楊慶，等.瑞香狼毒醇提物體外抗腫瘤作用研究[J].中國中藥雜志，2010，35（22）：3048-3051.

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[6] 李鴻君，邢立強，李旺，等.瑞香狼毒水提取物對肺腺癌細胞株耐藥及凋亡的影響[J].河北醫藥，2013，35（6）：823-825.

[7] 潘國鳳，楊慶，劉安，等.瑞香狼毒藥效組分抑制小鼠皮下移植瘤H22的實驗研究[J].中華中醫藥雜志，2009，24（4）：438-442.

[8] 王義善，鄭秋生，賈喜鳳，等.狼毒抑制降低癌細胞惡性表型小鼠體內轉移及彗星電泳實驗研究[J].中醫雜志，2006，47（增刊）：148-149.

[9] Chang WP，Tsai MS，Hwang JS，et al. Follow-up in the micronucleus frequencies and its subsets in human population with chronic lowdose gamma-irradiation exposure[J].Mutat Res，1999，428（1-2）：99-105.

[10] 楊茜，杜金茹，栗淑媛，等.錳中毒患者外周血淋巴細胞微核率的觀察[J].化工勞動保護（工業衛生與職業病分冊），1995，16（3）：110-111.

[11] 劉萍，杜娟，于麗華，等.大戟水提物對小鼠致突變作用的實驗研究[J].山東醫科大學學報，2000，38（1）：27，31.

[12] 楊珺，王世嶺，吳坤，等.瑞香狼毒提取液對大鼠肺成纖維細胞增殖的抑制與其細胞毒性作用[J].中國臨床康復，2005，9（31）：139-141.

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實驗組培養3瓶，每瓶培養液在加入外周血的同時分別加入不同濃度的瑞香狼毒水煎液0.5mL，使3瓶培養液中瑞香狼毒的終濃度分別為2.5、5、10mg/mL。對照實驗組培養1瓶，培養時在加入外周血的同時加入0.5mL生理鹽水。

1.5 微核觀察和數據分析

微核標本的制備與檢測方法參考Chang等[9]的方法進行。每瓶培養液制作的微核標本在顯微鏡下觀察1000個胞漿完整的淋巴細胞。在這1000個細胞中，如果看到與細胞核顏色一樣，并且位于細胞核附近游離的圓形或橢圓形小核（小于細胞核1/3）的細胞計為1個微核細胞，用千分率（‰）表示微核率。微核觀察數據用x2檢驗方法進行統計分析。

2 結果

3 討論

微核是由染色體數目或結構畸變導致的。在有絲分裂過程中，如果細胞受到某些環境因子的刺激會引起染色體發生斷裂，形成無著絲粒的短片，或導致紡錘絲斷裂，使整條染色體失去紡錘絲的牽引作用，上述無著絲粒的短片或失去紡錘絲的整條染色體，在分裂末期不能參與子細胞核的形成，而形成了位于子核之外的核塊。當子細胞進入下一次分裂間期時，這些核塊便濃縮成主核之外的獨立小核，即微核。所以，在間期細胞中的微核是染色體畸變的結果，它是染色體畸變后所表現出來的一種形式，它在細胞中的出現頻率一般與染色體畸變率呈正相關[10]。大量研究結果表明，隨著環境中誘變劑劑量的增加或輻射的不斷累積微核的出現率會隨之增高。所以，現在國內外很多學者以微核率為指標來檢測染色體畸變程度。例如，一些食品添加劑、某些化學試劑、某些新藥以及其他環境因素是否具有遺傳毒性效應均可利用檢測微核率的簡易手段進行有效的評價。國內外學者運用不同的研究方法，以不同的指標檢測了狼毒的毒性作用。劉萍等[11]報道狼毒大載水提物在較高劑量下對小鼠有致突變作用，但在低劑量下無明顯毒性。楊珺等[12]研究表明：用瑞香狼毒提取液干預，結果對大鼠原代培養的肺成纖維細胞的增殖有比較明顯的抑制效應，并且隨著瑞香狼毒提取液劑量的增加而這種抑制效應也隨著加強。同時當瑞香狼毒提取液超過一定劑量時表現出一定的細胞毒性作用。本實驗結果表明，外周血淋巴細胞培養液中瑞香狼毒終濃度為2.5mg/mL時未檢測到微核率的顯著變化，說明低劑量的瑞香狼毒可能不會引起遺傳損傷；而中劑量（5mg/mL）和高劑量（10mg/mL）的瑞香狼毒可使健康人體外淋巴細胞微核率明顯增高，說明超過一定劑量的瑞香狼毒水煎液可能對人體染色體有致損傷作用，其損傷機理是引起染色體斷裂還是染色體不分離還有待于進一步研究。我們知道，染色體即使是微小片段的改變也會累及到很多基因，與致癌、致畸以及其他疾病的發生有著密切的聯系。所以，狼毒雖然有抗腫瘤等治療多種疾病的功效，但不能忽視對人體可能具有的潛在的遺傳毒性作用。

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[5] 劉曉霓，李玉潔，楊慶，等.瑞香狼毒醇提物體外抗腫瘤作用研究[J].中國中藥雜志，2010，35（22）：3048-3051.

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[6] 李鴻君，邢立強，李旺，等.瑞香狼毒水提取物對肺腺癌細胞株耐藥及凋亡的影響[J].河北醫藥，2013，35（6）：823-825.

[7] 潘國鳳，楊慶，劉安，等.瑞香狼毒藥效組分抑制小鼠皮下移植瘤H22的實驗研究[J].中華中醫藥雜志，2009，24（4）：438-442.

[8] 王義善，鄭秋生，賈喜鳳，等.狼毒抑制降低癌細胞惡性表型小鼠體內轉移及彗星電泳實驗研究[J].中醫雜志，2006，47（增刊）：148-149.

[9] Chang WP，Tsai MS，Hwang JS，et al. Follow-up in the micronucleus frequencies and its subsets in human population with chronic lowdose gamma-irradiation exposure[J].Mutat Res，1999，428（1-2）：99-105.

[10] 楊茜，杜金茹，栗淑媛，等.錳中毒患者外周血淋巴細胞微核率的觀察[J].化工勞動保護（工業衛生與職業病分冊），1995，16（3）：110-111.

[11] 劉萍，杜娟，于麗華，等.大戟水提物對小鼠致突變作用的實驗研究[J].山東醫科大學學報，2000，38（1）：27，31.

[12] 楊珺，王世嶺，吳坤，等.瑞香狼毒提取液對大鼠肺成纖維細胞增殖的抑制與其細胞毒性作用[J].中國臨床康復，2005，9（31）：139-141.

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