澤瀉提取物制備澤瀉醇A的研究

阮征，徐光，白景，姜永濤

(1.山東綠葉制藥有限公司，山東 煙臺 264003；2.煙臺大學，山東 煙臺 264005)

澤瀉提取物制備澤瀉醇A的研究

阮征1，徐光1，白景1，姜永濤2*

(1.山東綠葉制藥有限公司，山東 煙臺 264003；2.煙臺大學，山東 煙臺 264005)

目的：提高澤瀉中澤瀉醇A的提取收率。方法：采用硅膠柱和HPLC制備色譜分離技術，從澤瀉乙醇提取物中分離得到24-乙酰澤瀉醇A及其異構體，通過堿降解的方法得到澤瀉醇A，根據色譜和光譜學數據鑒定化合物結構。結果：從澤瀉乙醇提取物中制備澤瀉醇A的轉化收率為0.14%。結論：與傳統工藝相比，收率提高近70倍，在一定程度上解決澤瀉醇A制備困難的問題。

澤瀉；24-乙酰澤瀉醇A；澤瀉醇A

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep.的干燥塊莖，具有利水滲濕，泄熱，化濁降脂功能。用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛，高脂血癥[1]。澤瀉含萜類、揮發油等多種化學成分，藥理活性研究表明，澤瀉醇類具有抑制動脈粥樣硬化、活血化瘀的功效，以及利尿、降血壓、抗脂肪肝等作用[2-3]。

澤瀉醇A是澤瀉醇類中重要的三萜類活性成分，文獻表明澤瀉醇A具有顯著的降膽固醇作用[4]。但由于在藥材中含量甚少，導致在臨床上不能廣泛應用。筆者通過研究，從澤瀉提取物中分離得到24-乙酰澤瀉醇A，并通過堿降解的方法得到澤瀉醇A[5]。與從藥材中直接提取的工藝相比，收率提高幾十倍，在一定程度上解決澤瀉醇A制備困難的問題。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀；Bruker AVANCE 400型超導核磁共振波譜儀；Mariner TOF-M型質譜儀。

1.2 試藥

澤瀉購自安徽亳州，經煙臺大學藥學院生藥室趙燕燕副教授鑒定為澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep.的干燥塊莖。

200～300目硅膠及GF254薄層色譜板(煙臺市化學工業研究所)。

2 化合物的提取分離和堿解

2.1 化合物的提取分離

取澤瀉塊莖500 g，先用250 mL 75%乙醇水溶液回流提取。回收乙醇，得到紫紅色油狀物，用乙酸乙酯萃取，分為乙酸乙酯層和水層，將乙酸乙酯層蒸干，進行硅膠柱色譜，以正己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脫，每100 mL為一個流分，以正己烷-乙酸乙酯(1∶4)為展開劑，TLC檢測，合并相同流分，得到兩種無色結晶(化合物10.538 g、化合物20.542 g)和一種黃色油狀物。

2.2 化合物的堿解

將化合物1、2混晶溶于40 mL新配制的5%乙醇鈉-乙醇溶液中，室溫放置4 h，真空抽干，丙酮溶解，揮干溶劑，干燥，得到一種無色粉末(0.695 g)，化合物3[6]。

3 結構鑒定

化合物1：無色針晶，通過ESI-MS測定其m/z為515[M-H2O+H]+，結合DEPT譜，提示其分子式為C32H53O6。在1H-NMR譜中，出現3個連氧碳上的質子信號δ 4.55(s)，3.86(m)，3.82(m)。在δ 2.16處給出一個乙酰基上特征的甲基質子信號，在高場區出現8個甲基質子信號。在13C-NMR譜中，在低場區給出2個羰基碳信號，其中δ 170.8應為乙酰基上的羰基碳信號。在烯碳區，由DEPT提示，含有一對雙鍵碳信號δ 138.2，135.0，且均為季碳。在連氧區，給出4個連氧碳信號δ 69.7，69.0，78.0，73.8，由DEPT譜提示，δ 73.8為一連氧季碳。以上信息提示其具有澤瀉醇類結構特征，其碳譜數據與24-乙酰澤瀉醇A基本一致[3]，其相關結果見表1。并進一步通過1H-1HCOSY、HMBC譜對其歸屬，其相關結果見圖1～4。

化合物2：根據化合物2的柱色譜行為及制備純化時HPLC圖譜特征(圖2)，發現化合物2會向化合物1轉化。進一步通過HPLC-MS及HPLC-ELSD對照檢測，該化合物的分子量與化合物1相同，其ESI-MS m/z：515[M-H2O+H]+，并與化合物1碳譜對比，初步推測該化合物可能為23-乙酰澤瀉醇A。

化合物3：無色粉末；ESI-MS m/z：473[M-H2O+H]+，推測該化合物為去乙酰化產物；1H-NMR(CDCl3)，δH1.00(3H，s)，1.04(3H，s)，1.07，1.14，1.24，1.27(3H，s)，1.66(1H，m，H-22)，1.77(1H，d，J=10.6 Hz，H-9)，2.78(1H，m，H-12)，3.00(1H，brs，H-24)，3.77(1H，dd，J=3.5，9.3 Hz，H-23)，3.88(1H，ddd，J=5.9，10.7，10.7 Hz，H-11)；13C-NMR(CDCl3)：C-1→C-30，δC：31.2，33.7，220.0，46.8，48.7，20.1，34.5，40.7，49.8，37.0，70.0，34.9，137.4，57.0，30.6，29.5，135.5，23.1，25.7，28.5，20.1，40.1，69.4，77.6，74.0，27.5，26.2，29.5，20.3，24.2。以上數據與文獻報道基本一致[3]，即為澤瀉醇A。

表1 化合物1的核磁共振數據

圖1 化合物1的1H-1HCOSY譜

圖2 化合物1的1H-1HCOSY相關信息

圖3 化合物1的HMBC譜

圖4 化合物1的HMBC相關信息

圖5 化合物2的HPLC圖

4 討論

資料[6]，澤瀉提取物中澤瀉醇A含量約為0.002%，而通過本研究工藝，澤瀉醇A的收率約為0.14%，是文獻收率的近70倍。本研究與傳統工藝相比，在一定程度上解決澤瀉醇A制備困難的問題。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：212-213.

[2] 徐暉.澤瀉藥理作用研究進展[J].湖南中醫雜志，2004，20(3)：77.

[3] 胡雪艷，陳海霞，高文遠，等.澤瀉化學成分的研究[J].中草藥，2008，39(12)：1788-1790.

[4] 徐飛，吳啟南.澤瀉醇類化合物調脂作用的研究進展[G].廣州：全國第九屆天然藥物資源學術研討會論文集，2010：707-709.

[5] 邱東鳳.澤瀉化學成分研究[D].蘭州：蘭州大學，2009.

[6] 彭國平，朱國元，樓鳳昌.澤瀉中二個三萜新成分的研究Ⅱ[J].天然藥物研究與開發，2002，14(4)：5.

PreparationofAlisolAfromAlismaorientalisExtract

RUAN Zheng1，XUGuang1，BAIJing1，JIANGYongtao2*

(1.ShandongLuyePharmaceuticalCo.，Ltd.，Yantai264003，China；2.YanTaiUniversity，Yantai264005，China)

Objective：To improve the yield of alisol A fromAlismaorientalis.Methods：Silica and HPLC column chromatography were used to purify the chemical constituents and their structures were elucidated on the basis of spectral data of mass and NMR.Alisol A-24-acetate was isolated from fraction of ethanol extract ofA.orientalisand was used to prepare alisol A by alkali degradation.Results：The conversion yield of preparing alisol A was 0.14%.Conclusion：Compared with the traditional process，the yield of new process can increase 70 times，to a certain extent，which can solve the difficulty of preparing alisol A.

Alismaorientalis；Alisol A-24-acetate；Alisol A

2014-01-28)

*

姜永濤，副教授，研究方向：天然藥物新藥；Tel：(0535)6706025，E-mail：yongtao@luye.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.09.005