草魚魚種養殖中的免疫研究進展

李剛

摘要通過對草魚養殖研究典型試驗和報道進行分析，用當代免疫理論和試驗成果證明草魚魚種養殖中應引起重視的免疫措施和方法，分析了免疫途徑、投餌、密度、拉網鍛煉等措施對免疫力的影響，介紹了提高草魚魚種免疫力的新途徑。

關鍵詞草魚；魚種養殖；免疫研究；養殖密度；飼料投喂量；措施

中圖分類號S943文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0280-02

ResearchProgressofImmuneinGrassCarpFishBreeding

LI Gang

（Animal Husbandry and Veterinary Administration of Lixian County in Hunan Province，Lixian Hunan 415500）

AbstractThrough analyzing the grass carp aquaculture research typical test and report，with contemporary immune theory and experimental results it′s proved that the measures and methods in the grass carp fish breeding should be pay attention，effects of the immunization route，bait casting，density，net exercise and other measures on immunity were analyzed，and new ways to increase the grass carp fish immunity were introduced.

Key wordsgrass carp；fish breeding；immune research；breeding density；feed feeding amount；measures

免疫是草魚魚種養殖中控制疾病的基礎。為此科研人員進行了大量的研究，得到了許多研究成果。用現有的免疫研究成果對這些試驗方法、過程和結果進行再分析，可以節省人力物力，并得到一些新的認識，可以為探索更好、更有效的魚病防治辦法提供參考。

1草魚魚種的免疫研究進展

1.1免疫方法的研究

何福林對草魚的免疫方法進行了研究，從其得出的草魚出血病、爛鰓病、腸炎病、赤皮病4組免疫結果來看，注射效果最好，對出血病的保護率為77.%~92.3%，爛鰓病為25.0%~90.0%，腸炎病為16.7%~63.3%，赤皮病為19.3%~57.7%。口服對出血病的保護率為40.8%~63.0%，對其他3種病的保護率均在20.2%以下，對赤皮病幾乎沒有作用。浸泡免疫效果最差，對出血病保護率為18.9%~33.3%，對腸炎完全沒有效果，對爛鰓病和赤皮病的效果也在40%以下。從免疫結果來看，顯然，注射疫苗能夠有效的激活魚類的免疫系統，因此效果好。而對于草魚魚種養殖來說更關心的是浸泡免疫和口服免疫的效果[1-3]。

由于消化道酸堿度和多種酶類對疫苗有較大的破壞作用，通過口服免疫的魚體，其頭腎、血液和腸中都檢測出抗體分泌細胞，但鰓中卻沒有檢測出，并且在血清中出現特異性抗體，而在皮膚黏液中卻未出現。這很好地解釋了為什么口服免疫效果不好，并且對赤皮病幾乎沒有作用。

應用顆粒劑抗原進行浸泡免疫時，1 d后經檢測發現抗原物質大部分仍存在于皮膚與鰓中，僅有少部分抗原物質運轉到了頭腎和脾臟。腎和脾是魚類重要的免疫器官。真骨魚的腎臟有許多淋巴細胞與白細胞，組織不經抗原刺激即可產生免疫細胞，并且頭腎和中腎細胞經抗原刺激會出現增生。因此，硬骨魚類的腎臟有中樞免疫器官及外周免疫器官的雙重功能。脾臟是第二重要的免疫器官，其經過抗原刺激后發生的增殖反應會產生彌散效果。據相關研究，真骨魚的脾臟中被發現的抗體生成細胞，但這些細胞是否來源于脾臟仍不能確定[4-6]。

免疫效果不好的原因可能是由于抗原不能進入免疫器官，或者由于數量不夠而無法充分有效激活機體的免疫系統。浸泡免疫一般通過使抗原與皮膚、黏膜和鰓接觸而進入機體，但卻容易受到阻礙。排除這種阻礙的第一個辦法是使用佐劑，改變抗原物質的性狀，使抗原能夠有效進入機體，并使其能在機體內停留更長的時間；另外可以通過刺激單核吞噬細胞而加強其對抗原的遞呈性；還可以通過刺激淋巴細胞增強魚體的免疫應答能力。

1.2免疫研究現狀

黃海水產研究所于2012年3月30日 和9月10日先后報道了“魚用浸泡疫苗多組合佐劑及其應用和使用方法”，并獲得了國家的2項專利授權。這2項發明都聲稱可顯著提高疫苗的免疫效果，使用方法簡便安全，成本低，無需額外設施與工序，且對魚的存活率與生長速度無影響。這對于草魚魚種的浸泡免疫來說是一個很好的訊息[7-9]。

雞新城疫弱毒苗的滴鼻滴眼、豬偽狂的基因缺失弱毒苗滴鼻，在免疫方面都取得了很好的效果。弱毒疫苗的優點是病原可在免疫動物體內繁殖，用量小，免疫原性好，免疫期長，成本低，使用方便，克服了滅活苗接種量大，需多次免疫，抗體產生慢，維持時間短，細胞免疫差，抗原需量大，濃度高，只能通過注射接種等缺點。基因工程疫苗可以將抗原插入載體，修飾的載體能夠表達保護性抗原基因。細菌與病毒載體產生的疫苗兼具安全性和活疫苗效力。以上幾種疫苗都適宜廣泛使用，且經濟效益好。

國內草魚免疫防疫技術研究始于20世紀60年代。1969年，珠江水產研究所首次研制出草魚出血病組織漿滅活疫苗（即“土法”疫苗）。“七五”、“八五”期間，中國水產科學研究院組織聯合科技攻關研制出我國第1個高效弱毒疫苗——草魚出血病弱毒疫苗，并開展多聯疫苗的研制，構建了與草魚出血病弱毒疫苗聯用的草魚細菌性爛鰓、赤皮、腸炎四聯滅活疫苗的大規模制備技術。2011年3月，歷經多年研制的草魚出血病活疫苗（GCHV-892株）獲得我國首個水產疫苗生產批準文號。該疫苗已在多個省份地區進行了區域性試驗，免疫保護率高達90%以上。可以預見下一個草魚免疫疫苗的突破性發展將是基因工程苗。草魚魚種的免疫將從基因工程苗和佐劑中受益。

2養殖密度和飼料投喂量對草魚魚種非特異性免疫力的影響

2.1高密度養殖嚴重影響草魚魚種的非特異性免疫

施海濤在《高密度放養導致草魚爛鰓病》中進行試驗，2007年某魚種培育場連片魚種池6 hm2，6月中下旬至7月上旬，水面又放養夏花15萬尾/hm2左右，其中草魚的放養密度達7.5萬~9.0萬尾/hm2。剔除水草的投喂量外，顆粒料的投餌率均在6%以上，少數塘口的投餌率高達10%。“填鴨式”的飼喂方式，加之池塘水位多在0.5～1.2 m，魚池的水體自凈力非常微弱。魚池超負荷的利用，導致草魚夏花小車輪蟲并發爛鰓病的流行，發病率近100%。

王文博等利用平均體重（53.05±5.03）g的草魚試驗，結果發現高密度養殖從3個方面顯著影響草魚魚種的非特異性免疫功能。一是高密度對草魚的血清殺菌活性造成了極大抑制，可能也引起了補體活性或濃度的下降，或者是補體中某些組份的失活，從而阻斷了補體的激活途徑使其不能發揮殺菌作用。二是經長時間高密度放養的草魚吞噬細胞吞噬百分率、吞噬指數2項指標都顯著降低，且隨時間增長呈下降趨勢。三是高密度組草魚脾臟與正常魚相比有明顯的萎縮癥狀。脾臟的臟器系數（臟器系數=脾臟重量/體重×100%）平均值為0.005%~0.044%，顯著低于對照組的0.12%。合理密養有利于草魚魚種的非特異性免疫增強[10]。

2.2投餌不當使草魚魚種的非特異性免疫力下降

魚體的健康狀況對其免疫能力有一定影響，當營養物質攝入量不當時會使魚的抗病能力下降。蛋白質的缺乏和不足導致淋巴細胞數目的降低，對刺激引起的反應降低，NK細胞活性降低；高蛋白則會加大代謝負擔和能量消耗。魚體組織中多不飽和脂肪酸（PUFA）的含量高，組織易因脂類氧化酸敗而發生變化，一般情況下魚飼料中的營養物質可以保證魚的必需脂肪酸（EFA）的需要，PUFA是細胞膜的重要組成部分，不飽和脂肪酸對于魚體生長發育至關重要，同時對于提高魚的免疫能力也是必需脂肪酸。許多魚類異常反應和疾病均與飼料中PUFA氧化酸敗有關，例如鰭損傷和皮膚發炎等癥狀均與此有關。VC在魚體生長過程中也很重要，在傷口愈合、機體代謝等方面作用顯著，并且VC可有效降低環境的負面影響，提高魚類抵抗幾種細菌和病毒病原體的能力。飼喂的日糧中含有VC（>300 mg/kg）可有效降低魚類由于水質惡劣而引發的中毒癥狀，提高魚對環境應激的適應能力。VE與VC、類胡蘿卜素和硒都是保證魚體免疫系統正常發揮作用的必需物質，可以降低脂類過氧化物對免疫系統及其他組織的破壞作用，所以為保證魚類的免疫能力，在高濃度PUFA和氧化劑促進劑（鐵、銅等）日糧中必須提高VE的添加量。V■參與體內碳水化合物的代謝，草魚飼料中增加V■有明顯促長和節約飼料的效果。VA參與機體免疫器官的生長發育，缺乏將造成免疫器官損傷。微量元素在魚類免疫器官的發育過程中作用較大，缺乏時會引起一系列免疫能力下降問題。

3增強水生動物免疫力的新措施

3.1益生菌增強免疫力

草魚腸道內的短乳酸桿菌可以增加腸內乳酸菌數量，降低水和消化道中弧菌數量，調整養殖水體和腸道菌群的構成。投喂富含光合細菌的飼料能有效促進草魚的生長發育，顯著提高生長率，并且能提高草魚肝臟及血清中堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。

3.2免疫多糖等能顯著提高草魚魚種的免疫力

黃芪多糖具有提高動物免疫力、阻止病毒復制、殺滅細菌、排出毒素等功效。馬貴華等[5]用黃芪多糖等免疫增強劑，對4塊不同水域進行了草魚出血病、爛鰓病和肝膽綜合癥（每塊水域的發病情不完全一致，除出血病外其他2種并發1種或3種同時存在）治療初步試驗。結果2~4 d全部治愈，經過6 d給藥鞏固治理，完全防止了復發。投喂由黃連、黃柏、黃芪、板藍根、茵陳、甘草等組成的中草藥藥餌，并輔以VC、VE等藥物護肝，對提高魚類的抗應激能力和免疫力效果顯著。

3.3水質調節和拉網鍛煉增強草魚魚種免疫力的有效措施

草魚魚種喜好生活在水質較清新的環境中。在養殖過程中由于剩余餌料、魚類糞便等長久積聚，使得水質惡化，容易引發暴發性疾病。水體缺氧和有毒物質妨礙機體的正常機能，使魚體抵抗力下降。據此采用充氣、換水、沖水和益生菌改良水質等方法增強草魚魚種免疫力。拉網鍛煉可明顯增加魚類粘液分泌，溶菌酶活性顯著升高，加速免疫細胞的分化和生長。李必華的草魚大規格魚種高產技術——一養到底法也把定期拉網鍛煉做為增強草魚魚種體質的重要方法，而且還推薦當年魚種應拉網6~7次。

4結語

草魚魚種養殖中通過適當降低密度，控制餌料等一系列措施，可避免大量抗生素的使用，以獲得更加健康的魚種，應引起廣大漁民的重視。基因工程活疫苗研究將是魚種免疫的研究方向，也將是草魚魚種養殖中新的養殖技術方法。

5參考文獻

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