落葉培育食用菌試驗(yàn)研究

李柯輝

摘要落葉培育食用菌試驗(yàn)研究結(jié)果表明，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉的有機(jī)成分可被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)出菇550 g左右，50％時(shí)出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。50%落葉+50%棉籽皮出菇效果最好。

關(guān)鍵詞落葉；食用菌；棉籽皮；出菇

中圖分類號(hào)S646文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0111-01

落葉是秋天的一種自然景觀，是樹木保護(hù)自己度過(guò)寒冬的一種生命現(xiàn)象。每年冬季大量樹葉隨風(fēng)飄落，既影響市容又破壞環(huán)境，且堵塞下水道和淤積河道等現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。由于人們?nèi)狈Νh(huán)境意識(shí)，時(shí)常將落葉大量焚燒，致使樹葉中的C、S、N等元素以氣態(tài)氧化物的形式散發(fā)到大氣中，這些化合物大多能導(dǎo)致溫室效應(yīng)[1-2]。另外SO2和NO2的釋放同時(shí)危害著人的健康。長(zhǎng)期以來(lái)，城市里的落葉是每年秋季都要面對(duì)的令人煩惱的問(wèn)題[3-4]。

為了使落葉成為可利用的生物資源，津華中學(xué)生物環(huán)保小組在老師的指導(dǎo)下，對(duì)于用落葉來(lái)培育食用菌的工作進(jìn)行了大膽的嘗試。經(jīng)過(guò)構(gòu)思、論證、設(shè)計(jì)試驗(yàn)和全面探索等活動(dòng)，取得了一些成績(jī)，掌握了第一手資料。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料為馬鈴薯、葡萄糖（或蔗糖）、瓊脂、水等。

儀器用具及消毒藥品：電爐、鋁鍋、漏斗、量筒、紗布、止水夾、漏斗架、切菜小刀、切板、坩堝或燒杯、捆扎繩、綿花（未用脫脂棉）、試管（18 mm×180 mm或20 mm×200 mm）、1.5 cm厚的長(zhǎng)木條（斜面培養(yǎng)基擺放時(shí)起墊高作用）、標(biāo)簽、天平、高溫高壓滅菌鍋，消毒藥品包括：高錳酸鉀、37%甲醛溶液、5%石炭酸溶液、新潔爾滅溶液等。

接種材料用具及設(shè)備：菌種可任意選擇黑木耳、平菇、香菇母種等。超凈工作臺(tái)或接種箱、紫外線燈、75%的酒精棉球、接種鏟、酒精燈、火柴等。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1制備菌種。

（1）培養(yǎng)基。選用的培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。將馬鈴薯切成薄片，煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，將濾液加水至1 000 mL，煮沸后加入以上稱量好的物品，不時(shí)攪拌，至瓊脂完全溶化后停止加熱，趁熱灌注到試管內(nèi)，保證每支試管內(nèi)裝5～8 mL。煮好的培養(yǎng)液，塞上棉塞，捆成試管束，上面罩上牛皮紙，放牛皮紙的目的是防止消毒時(shí)弄濕棉塞。

（2）消毒滅菌。采用高壓蒸汽滅菌法。在121 ℃和1 kg/cm2的壓力下維持30 min時(shí)間消毒，使抗熱能力極強(qiáng)的芽孢桿菌全部失活。消毒滅菌后趁熱將試管擺放成斜面，成為斜面培養(yǎng)基。

（3）接種。接種時(shí)，用酒精燈消毒接種針，接種過(guò)程盡量在酒精燈周圍的無(wú)菌區(qū)內(nèi)操作，用接種針挑取一小塊連有少量培養(yǎng)基的菌種，接種在空白斜面培養(yǎng)基的中央，塞好棉塞，貼好標(biāo)簽，放入25 ℃左右的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，形成的菌絲即為原種。

（4）制備栽培種。栽培種培養(yǎng)基的成分有：消毒的棉籽皮、蔗糖、尿素和適量水分，取一定量的培養(yǎng)基攪拌后裝入罐頭瓶?jī)?nèi)，蓋上牛皮紙，扎緊，放入高壓消毒鍋內(nèi)消毒，與瓊脂培養(yǎng)基的消毒方法一樣，即121 ℃、1 kg/cm2，消毒60 min，冷卻后即成為栽培種的培養(yǎng)基。原種菌絲移入栽培種的過(guò)程也是在接種箱內(nèi)無(wú)菌環(huán)境下操作。接種后在25 ℃左右環(huán)境中白色菌絲逾20 d可長(zhǎng)滿罐頭瓶，此栽培種可直接播種或用于擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.2.2播種。栽培種制備好以后，開始進(jìn)行落葉培育食用菌的試驗(yàn)。落葉中含有葉肉組織、葉綠素、纖維素、木質(zhì)素等食用菌所需的碳源、氮源、礦質(zhì)元素及各種微生物的菌體和代謝產(chǎn)物，經(jīng)適當(dāng)糖化和發(fā)酵后，理論上應(yīng)該可以作為培育食用菌的可行性代料。

在落葉選材上，采用常見(jiàn)闊葉樹種的葉子，如楊樹、自蠟樹、懸鈴木等常見(jiàn)行道樹葉，秋天隨處可見(jiàn)。做環(huán)衛(wèi)清掃時(shí)，將它們有意識(shí)地搜集起來(lái)，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沖洗后用粉碎機(jī)切成0.5 cm2的碎片，保濕，用石灰水浸泡后軟化1 d，然后加入蔗糖0.5％、尿素0.2％和石膏0.5％，拌入菌種制成菌包。一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)狀況不理想，出菇時(shí)間太長(zhǎng)，且生長(zhǎng)不旺盛。分析原因可能是落葉自身的有機(jī)養(yǎng)料在落葉前大量轉(zhuǎn)入植物體的原故，因此落葉的有機(jī)活性有效期長(zhǎng)，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率低。如果加入部分棉籽皮進(jìn)行誘導(dǎo)可能會(huì)有更好的效果。于是又按照7∶3和5∶5的比例分別將落葉與棉籽皮混合制成培養(yǎng)基。

將培養(yǎng)基準(zhǔn)備好后，播種在塑料袋內(nèi)，塑料袋規(guī)格為直徑18 cm、長(zhǎng)45 cm，先扎好一端，裝入一薄層培育好的菌種，然后裝入拌好的培養(yǎng)基。當(dāng)裝到塑料袋的1/2時(shí)，壓實(shí)，撒入一薄層菌種，再裝入培養(yǎng)基，直到近袋口時(shí)壓實(shí)，撒入一薄層菌種，將袋口扎緊，貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽上注明培養(yǎng)基配比和播種日期，放在25 ℃左右的室內(nèi)，菌絲即在塑料袋內(nèi)生長(zhǎng)，直至塑料袋內(nèi)長(zhǎng)滿白色菌絲。30 d后打開袋口。

2結(jié)果與分析

從表1可以看出，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉中的有機(jī)成分可以被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)可出菇550 g左右，50％時(shí)可出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。

100%落葉菌包出現(xiàn)菌絲時(shí)間太長(zhǎng)，最早出菇天數(shù)最長(zhǎng)，達(dá)70 d，且出菇很少。70%落葉+30%棉籽皮菌包和菌絲的生長(zhǎng)速度也較慢，出菇也較遲。50%落葉+50%棉籽皮菌包菌絲生長(zhǎng)和出菇情況要較前面的好。這說(shuō)明棉籽皮含量的增加對(duì)于誘導(dǎo)落葉糖化和發(fā)酵更適于進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化上起到了積極的作用。因此，將落葉∶棉籽皮控制在5∶5最適宜。此外，污染袋數(shù)的出現(xiàn)，說(shuō)明在消毒方面還要加以重視，各個(gè)消毒環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格把關(guān)。

3結(jié)論

目前，落葉還不能獨(dú)立制作成菌包，還需與棉籽皮混合方能有用，因此在落葉的進(jìn)一步發(fā)酵、糖化等原理上還要進(jìn)一步研究[5-6]。

由于本試驗(yàn)?zāi)康氖且ㄟ^(guò)利用落葉培養(yǎng)食用菌，這樣既解決環(huán)境污染問(wèn)題，又可將落葉再利用，從而變廢為寶。初步試驗(yàn)已產(chǎn)生一定效果，但是在落葉的處理上還不夠理想，今后要在完全利用落葉方面投入更多的研究，以達(dá)到真正應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)際中去的目的。

試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉的有機(jī)成分可被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)出菇550 g左右，50％時(shí)出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。50%落葉+50%棉籽皮出菇效果最好。

4參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)食用菌協(xié)會(huì).18種珍稀美味食用菌栽培[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1997.

[2] 侯立娟，姚方杰，高芮，等.食用菌菌糠再利用研究概述[J].中國(guó)食用菌，2008，27（3）：6-8.

[3] 唐秉仁.簡(jiǎn)明食用菌栽培新技術(shù)[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，2004.

[4] 鄭林用，黃小琴，彭衛(wèi)紅.食用菌菌糠的利用[J].食用菌學(xué)報(bào)，2006，13（1）：74-77.

[5] 陸建明，張錫鳳.食用菌液體菌種制備的研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌，2004，22（6）：15-17.

[6] 周廷斌，劉海英，孟祥元，等.食用菌培養(yǎng)料不同處理方法效果的研究[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，18（2）：89-91.

摘要落葉培育食用菌試驗(yàn)研究結(jié)果表明，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉的有機(jī)成分可被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)出菇550 g左右，50％時(shí)出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。50%落葉+50%棉籽皮出菇效果最好。

關(guān)鍵詞落葉；食用菌；棉籽皮；出菇

中圖分類號(hào)S646文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0111-01

落葉是秋天的一種自然景觀，是樹木保護(hù)自己度過(guò)寒冬的一種生命現(xiàn)象。每年冬季大量樹葉隨風(fēng)飄落，既影響市容又破壞環(huán)境，且堵塞下水道和淤積河道等現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。由于人們?nèi)狈Νh(huán)境意識(shí)，時(shí)常將落葉大量焚燒，致使樹葉中的C、S、N等元素以氣態(tài)氧化物的形式散發(fā)到大氣中，這些化合物大多能導(dǎo)致溫室效應(yīng)[1-2]。另外SO2和NO2的釋放同時(shí)危害著人的健康。長(zhǎng)期以來(lái)，城市里的落葉是每年秋季都要面對(duì)的令人煩惱的問(wèn)題[3-4]。

為了使落葉成為可利用的生物資源，津華中學(xué)生物環(huán)保小組在老師的指導(dǎo)下，對(duì)于用落葉來(lái)培育食用菌的工作進(jìn)行了大膽的嘗試。經(jīng)過(guò)構(gòu)思、論證、設(shè)計(jì)試驗(yàn)和全面探索等活動(dòng)，取得了一些成績(jī)，掌握了第一手資料。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料為馬鈴薯、葡萄糖（或蔗糖）、瓊脂、水等。

儀器用具及消毒藥品：電爐、鋁鍋、漏斗、量筒、紗布、止水夾、漏斗架、切菜小刀、切板、坩堝或燒杯、捆扎繩、綿花（未用脫脂棉）、試管（18 mm×180 mm或20 mm×200 mm）、1.5 cm厚的長(zhǎng)木條（斜面培養(yǎng)基擺放時(shí)起墊高作用）、標(biāo)簽、天平、高溫高壓滅菌鍋，消毒藥品包括：高錳酸鉀、37%甲醛溶液、5%石炭酸溶液、新潔爾滅溶液等。

接種材料用具及設(shè)備：菌種可任意選擇黑木耳、平菇、香菇母種等。超凈工作臺(tái)或接種箱、紫外線燈、75%的酒精棉球、接種鏟、酒精燈、火柴等。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1制備菌種。

（1）培養(yǎng)基。選用的培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。將馬鈴薯切成薄片，煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，將濾液加水至1 000 mL，煮沸后加入以上稱量好的物品，不時(shí)攪拌，至瓊脂完全溶化后停止加熱，趁熱灌注到試管內(nèi)，保證每支試管內(nèi)裝5～8 mL。煮好的培養(yǎng)液，塞上棉塞，捆成試管束，上面罩上牛皮紙，放牛皮紙的目的是防止消毒時(shí)弄濕棉塞。

（2）消毒滅菌。采用高壓蒸汽滅菌法。在121 ℃和1 kg/cm2的壓力下維持30 min時(shí)間消毒，使抗熱能力極強(qiáng)的芽孢桿菌全部失活。消毒滅菌后趁熱將試管擺放成斜面，成為斜面培養(yǎng)基。

（3）接種。接種時(shí)，用酒精燈消毒接種針，接種過(guò)程盡量在酒精燈周圍的無(wú)菌區(qū)內(nèi)操作，用接種針挑取一小塊連有少量培養(yǎng)基的菌種，接種在空白斜面培養(yǎng)基的中央，塞好棉塞，貼好標(biāo)簽，放入25 ℃左右的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，形成的菌絲即為原種。

（4）制備栽培種。栽培種培養(yǎng)基的成分有：消毒的棉籽皮、蔗糖、尿素和適量水分，取一定量的培養(yǎng)基攪拌后裝入罐頭瓶?jī)?nèi)，蓋上牛皮紙，扎緊，放入高壓消毒鍋內(nèi)消毒，與瓊脂培養(yǎng)基的消毒方法一樣，即121 ℃、1 kg/cm2，消毒60 min，冷卻后即成為栽培種的培養(yǎng)基。原種菌絲移入栽培種的過(guò)程也是在接種箱內(nèi)無(wú)菌環(huán)境下操作。接種后在25 ℃左右環(huán)境中白色菌絲逾20 d可長(zhǎng)滿罐頭瓶，此栽培種可直接播種或用于擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.2.2播種。栽培種制備好以后，開始進(jìn)行落葉培育食用菌的試驗(yàn)。落葉中含有葉肉組織、葉綠素、纖維素、木質(zhì)素等食用菌所需的碳源、氮源、礦質(zhì)元素及各種微生物的菌體和代謝產(chǎn)物，經(jīng)適當(dāng)糖化和發(fā)酵后，理論上應(yīng)該可以作為培育食用菌的可行性代料。

在落葉選材上，采用常見(jiàn)闊葉樹種的葉子，如楊樹、自蠟樹、懸鈴木等常見(jiàn)行道樹葉，秋天隨處可見(jiàn)。做環(huán)衛(wèi)清掃時(shí)，將它們有意識(shí)地搜集起來(lái)，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沖洗后用粉碎機(jī)切成0.5 cm2的碎片，保濕，用石灰水浸泡后軟化1 d，然后加入蔗糖0.5％、尿素0.2％和石膏0.5％，拌入菌種制成菌包。一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)狀況不理想，出菇時(shí)間太長(zhǎng)，且生長(zhǎng)不旺盛。分析原因可能是落葉自身的有機(jī)養(yǎng)料在落葉前大量轉(zhuǎn)入植物體的原故，因此落葉的有機(jī)活性有效期長(zhǎng)，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率低。如果加入部分棉籽皮進(jìn)行誘導(dǎo)可能會(huì)有更好的效果。于是又按照7∶3和5∶5的比例分別將落葉與棉籽皮混合制成培養(yǎng)基。

將培養(yǎng)基準(zhǔn)備好后，播種在塑料袋內(nèi)，塑料袋規(guī)格為直徑18 cm、長(zhǎng)45 cm，先扎好一端，裝入一薄層培育好的菌種，然后裝入拌好的培養(yǎng)基。當(dāng)裝到塑料袋的1/2時(shí)，壓實(shí)，撒入一薄層菌種，再裝入培養(yǎng)基，直到近袋口時(shí)壓實(shí)，撒入一薄層菌種，將袋口扎緊，貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽上注明培養(yǎng)基配比和播種日期，放在25 ℃左右的室內(nèi)，菌絲即在塑料袋內(nèi)生長(zhǎng)，直至塑料袋內(nèi)長(zhǎng)滿白色菌絲。30 d后打開袋口。

2結(jié)果與分析

從表1可以看出，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉中的有機(jī)成分可以被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)可出菇550 g左右，50％時(shí)可出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。

100%落葉菌包出現(xiàn)菌絲時(shí)間太長(zhǎng)，最早出菇天數(shù)最長(zhǎng)，達(dá)70 d，且出菇很少。70%落葉+30%棉籽皮菌包和菌絲的生長(zhǎng)速度也較慢，出菇也較遲。50%落葉+50%棉籽皮菌包菌絲生長(zhǎng)和出菇情況要較前面的好。這說(shuō)明棉籽皮含量的增加對(duì)于誘導(dǎo)落葉糖化和發(fā)酵更適于進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化上起到了積極的作用。因此，將落葉∶棉籽皮控制在5∶5最適宜。此外，污染袋數(shù)的出現(xiàn)，說(shuō)明在消毒方面還要加以重視，各個(gè)消毒環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格把關(guān)。

3結(jié)論

目前，落葉還不能獨(dú)立制作成菌包，還需與棉籽皮混合方能有用，因此在落葉的進(jìn)一步發(fā)酵、糖化等原理上還要進(jìn)一步研究[5-6]。

由于本試驗(yàn)?zāi)康氖且ㄟ^(guò)利用落葉培養(yǎng)食用菌，這樣既解決環(huán)境污染問(wèn)題，又可將落葉再利用，從而變廢為寶。初步試驗(yàn)已產(chǎn)生一定效果，但是在落葉的處理上還不夠理想，今后要在完全利用落葉方面投入更多的研究，以達(dá)到真正應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)際中去的目的。

試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉的有機(jī)成分可被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)出菇550 g左右，50％時(shí)出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。50%落葉+50%棉籽皮出菇效果最好。

4參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)食用菌協(xié)會(huì).18種珍稀美味食用菌栽培[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1997.

[2] 侯立娟，姚方杰，高芮，等.食用菌菌糠再利用研究概述[J].中國(guó)食用菌，2008，27（3）：6-8.

[3] 唐秉仁.簡(jiǎn)明食用菌栽培新技術(shù)[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，2004.

[4] 鄭林用，黃小琴，彭衛(wèi)紅.食用菌菌糠的利用[J].食用菌學(xué)報(bào)，2006，13（1）：74-77.

[5] 陸建明，張錫鳳.食用菌液體菌種制備的研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌，2004，22（6）：15-17.

[6] 周廷斌，劉海英，孟祥元，等.食用菌培養(yǎng)料不同處理方法效果的研究[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，18（2）：89-91.

摘要落葉培育食用菌試驗(yàn)研究結(jié)果表明，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉的有機(jī)成分可被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)出菇550 g左右，50％時(shí)出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。50%落葉+50%棉籽皮出菇效果最好。

關(guān)鍵詞落葉；食用菌；棉籽皮；出菇

中圖分類號(hào)S646文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0111-01

落葉是秋天的一種自然景觀，是樹木保護(hù)自己度過(guò)寒冬的一種生命現(xiàn)象。每年冬季大量樹葉隨風(fēng)飄落，既影響市容又破壞環(huán)境，且堵塞下水道和淤積河道等現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。由于人們?nèi)狈Νh(huán)境意識(shí)，時(shí)常將落葉大量焚燒，致使樹葉中的C、S、N等元素以氣態(tài)氧化物的形式散發(fā)到大氣中，這些化合物大多能導(dǎo)致溫室效應(yīng)[1-2]。另外SO2和NO2的釋放同時(shí)危害著人的健康。長(zhǎng)期以來(lái)，城市里的落葉是每年秋季都要面對(duì)的令人煩惱的問(wèn)題[3-4]。

為了使落葉成為可利用的生物資源，津華中學(xué)生物環(huán)保小組在老師的指導(dǎo)下，對(duì)于用落葉來(lái)培育食用菌的工作進(jìn)行了大膽的嘗試。經(jīng)過(guò)構(gòu)思、論證、設(shè)計(jì)試驗(yàn)和全面探索等活動(dòng)，取得了一些成績(jī)，掌握了第一手資料。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料為馬鈴薯、葡萄糖（或蔗糖）、瓊脂、水等。

儀器用具及消毒藥品：電爐、鋁鍋、漏斗、量筒、紗布、止水夾、漏斗架、切菜小刀、切板、坩堝或燒杯、捆扎繩、綿花（未用脫脂棉）、試管（18 mm×180 mm或20 mm×200 mm）、1.5 cm厚的長(zhǎng)木條（斜面培養(yǎng)基擺放時(shí)起墊高作用）、標(biāo)簽、天平、高溫高壓滅菌鍋，消毒藥品包括：高錳酸鉀、37%甲醛溶液、5%石炭酸溶液、新潔爾滅溶液等。

接種材料用具及設(shè)備：菌種可任意選擇黑木耳、平菇、香菇母種等。超凈工作臺(tái)或接種箱、紫外線燈、75%的酒精棉球、接種鏟、酒精燈、火柴等。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1制備菌種。

（1）培養(yǎng)基。選用的培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。將馬鈴薯切成薄片，煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，將濾液加水至1 000 mL，煮沸后加入以上稱量好的物品，不時(shí)攪拌，至瓊脂完全溶化后停止加熱，趁熱灌注到試管內(nèi)，保證每支試管內(nèi)裝5～8 mL。煮好的培養(yǎng)液，塞上棉塞，捆成試管束，上面罩上牛皮紙，放牛皮紙的目的是防止消毒時(shí)弄濕棉塞。

（2）消毒滅菌。采用高壓蒸汽滅菌法。在121 ℃和1 kg/cm2的壓力下維持30 min時(shí)間消毒，使抗熱能力極強(qiáng)的芽孢桿菌全部失活。消毒滅菌后趁熱將試管擺放成斜面，成為斜面培養(yǎng)基。

（3）接種。接種時(shí)，用酒精燈消毒接種針，接種過(guò)程盡量在酒精燈周圍的無(wú)菌區(qū)內(nèi)操作，用接種針挑取一小塊連有少量培養(yǎng)基的菌種，接種在空白斜面培養(yǎng)基的中央，塞好棉塞，貼好標(biāo)簽，放入25 ℃左右的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，形成的菌絲即為原種。

（4）制備栽培種。栽培種培養(yǎng)基的成分有：消毒的棉籽皮、蔗糖、尿素和適量水分，取一定量的培養(yǎng)基攪拌后裝入罐頭瓶?jī)?nèi)，蓋上牛皮紙，扎緊，放入高壓消毒鍋內(nèi)消毒，與瓊脂培養(yǎng)基的消毒方法一樣，即121 ℃、1 kg/cm2，消毒60 min，冷卻后即成為栽培種的培養(yǎng)基。原種菌絲移入栽培種的過(guò)程也是在接種箱內(nèi)無(wú)菌環(huán)境下操作。接種后在25 ℃左右環(huán)境中白色菌絲逾20 d可長(zhǎng)滿罐頭瓶，此栽培種可直接播種或用于擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.2.2播種。栽培種制備好以后，開始進(jìn)行落葉培育食用菌的試驗(yàn)。落葉中含有葉肉組織、葉綠素、纖維素、木質(zhì)素等食用菌所需的碳源、氮源、礦質(zhì)元素及各種微生物的菌體和代謝產(chǎn)物，經(jīng)適當(dāng)糖化和發(fā)酵后，理論上應(yīng)該可以作為培育食用菌的可行性代料。

在落葉選材上，采用常見(jiàn)闊葉樹種的葉子，如楊樹、自蠟樹、懸鈴木等常見(jiàn)行道樹葉，秋天隨處可見(jiàn)。做環(huán)衛(wèi)清掃時(shí)，將它們有意識(shí)地搜集起來(lái)，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沖洗后用粉碎機(jī)切成0.5 cm2的碎片，保濕，用石灰水浸泡后軟化1 d，然后加入蔗糖0.5％、尿素0.2％和石膏0.5％，拌入菌種制成菌包。一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)狀況不理想，出菇時(shí)間太長(zhǎng)，且生長(zhǎng)不旺盛。分析原因可能是落葉自身的有機(jī)養(yǎng)料在落葉前大量轉(zhuǎn)入植物體的原故，因此落葉的有機(jī)活性有效期長(zhǎng)，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率低。如果加入部分棉籽皮進(jìn)行誘導(dǎo)可能會(huì)有更好的效果。于是又按照7∶3和5∶5的比例分別將落葉與棉籽皮混合制成培養(yǎng)基。

將培養(yǎng)基準(zhǔn)備好后，播種在塑料袋內(nèi)，塑料袋規(guī)格為直徑18 cm、長(zhǎng)45 cm，先扎好一端，裝入一薄層培育好的菌種，然后裝入拌好的培養(yǎng)基。當(dāng)裝到塑料袋的1/2時(shí)，壓實(shí)，撒入一薄層菌種，再裝入培養(yǎng)基，直到近袋口時(shí)壓實(shí)，撒入一薄層菌種，將袋口扎緊，貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽上注明培養(yǎng)基配比和播種日期，放在25 ℃左右的室內(nèi)，菌絲即在塑料袋內(nèi)生長(zhǎng)，直至塑料袋內(nèi)長(zhǎng)滿白色菌絲。30 d后打開袋口。

2結(jié)果與分析

從表1可以看出，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉中的有機(jī)成分可以被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)可出菇550 g左右，50％時(shí)可出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。

100%落葉菌包出現(xiàn)菌絲時(shí)間太長(zhǎng)，最早出菇天數(shù)最長(zhǎng)，達(dá)70 d，且出菇很少。70%落葉+30%棉籽皮菌包和菌絲的生長(zhǎng)速度也較慢，出菇也較遲。50%落葉+50%棉籽皮菌包菌絲生長(zhǎng)和出菇情況要較前面的好。這說(shuō)明棉籽皮含量的增加對(duì)于誘導(dǎo)落葉糖化和發(fā)酵更適于進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化上起到了積極的作用。因此，將落葉∶棉籽皮控制在5∶5最適宜。此外，污染袋數(shù)的出現(xiàn)，說(shuō)明在消毒方面還要加以重視，各個(gè)消毒環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格把關(guān)。

3結(jié)論

目前，落葉還不能獨(dú)立制作成菌包，還需與棉籽皮混合方能有用，因此在落葉的進(jìn)一步發(fā)酵、糖化等原理上還要進(jìn)一步研究[5-6]。

由于本試驗(yàn)?zāi)康氖且ㄟ^(guò)利用落葉培養(yǎng)食用菌，這樣既解決環(huán)境污染問(wèn)題，又可將落葉再利用，從而變廢為寶。初步試驗(yàn)已產(chǎn)生一定效果，但是在落葉的處理上還不夠理想，今后要在完全利用落葉方面投入更多的研究，以達(dá)到真正應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)際中去的目的。

試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論落葉占70％或50％均可正常出菇，說(shuō)明落葉的有機(jī)成分可被食用菌利用和轉(zhuǎn)化，基本上1 kg混合料落葉占70％時(shí)出菇550 g左右，50％時(shí)出菇600 g左右，與純棉籽皮菌包產(chǎn)750 g接近，且食用口味無(wú)區(qū)別。50%落葉+50%棉籽皮出菇效果最好。

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