TGF－β1、Smad2、CyclinD1在胃癌中的表達及其臨床意義

李 建，李春輝，秦博文，呂瑞芳

（1.承德護理職業學院護理系，河北承德 067000；2.承德醫學院附屬醫院病理科，河北承德 067000）

我國胃癌的發病率位居所有惡性腫瘤的第2位，研究提示細胞周期調控在腫瘤發生、發展中發揮重要作用，因此，探討胃癌細胞周期調控的作用機制對臨床胃癌的診治與預防具有重要意義。目前有關TGF－β1、Smad2、CyclinD1三者在胃癌中表達的研究較少，本研究通過免疫組織化學的方法檢測胃癌組織中TGF－β1、Smad2、CyclinD1蛋白的表達狀況，探討三者與胃癌臨床病理指標間的關系，為后續研究胃癌的發病機制提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集承德醫學院附屬醫院2007年1月至2012年1月腔鏡活檢正常胃黏膜20例為對照組，手術切除胃癌標本60例為試驗組。

1.2 方法

1.2.1 標本處理 標本切除后均立即浸入10%中性甲醛固定液中，取大小2cm×2cm、厚3mm的組織塊，經常規石蠟包埋切片，切片厚4μm。放至70℃熱水中展平，再撈至載玻片的一端，置80℃恒溫箱中烘干。

1.2.2 脫蠟染色，切片置于85%乙醇20s、90%乙醇30s、95%乙醇Ⅰ中1min、95%乙醇Ⅱ中1min、無水乙醇Ⅰ中2 min、無水乙醇Ⅱ中2min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各1min，封固。

1.2.3 免疫組化結果判定 在光學顯微鏡下觀察正常胃黏膜及胃癌標本的免疫組化染色結果、定位及初步分析判斷。應用CMIAS真彩色醫學圖像分析系統，隨機選擇5個高倍（×400）視野，分別對5個不同視野中的各組免疫組化結果進行積分光密度（IOD）測定，然后計算平均IOD值。

1.3 統計學處理 采用SPSS11.5統計學軟件進行統計學處理。計量資料用x±s表示。兩組間均數比較用t檢驗，多組間均數的比較用方差分析。并將各因子IOD進行相關性分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

TGF－β1蛋白在試驗組和對照組中表達的IOD分別為12.25±5.12和8.13±2.01，差異有統計學意義（P＜0.05）；Smad2蛋白表達的IOD分別為6.42±2.13和13.31±3.25，差異有統計學意義（P＜0.05）；CyclinD1蛋白表達的IOD分別為16.02±4.32、9.45±2.29，差異有統計學意義（P＜0.05）。

TGF－β1、Smad2、CyclinD1 蛋白表達與年齡、性別無關（P＞0.05）；在分化程度、有無淋巴轉移、TNM分期中差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

項目 n clinD1年齡（歲）IOD TGF－β1 Smad2 Cy≥60 28 16.41±4.20 15.51±1.37 14.41±3.10＜60 32 17.14±3.27 13.21±1.83 14.01±4.35

續表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系s）

續表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系s）

項目 n IOD TGF－β1 Smad2 CyclinD1 37 17.26±4.23 16.02±3.41 15.34±3.32女23 18.24±2.83 15.65±3.21 14.51±2.11分化程度高中分化 28 10.62±2.35 16.12±2.32 13.41±1.81低分化 32 13.24±3.81 12.52±1.57 15.17±2.36淋巴結轉移無27 10.34±6.53 16.52±2.13 13.32±3.54有33 14.51±2.34 9.35±2.24 17.52±3.42 TNM分期Ⅰ＋Ⅱ 29 16.01±5.33 19.23±4.12 16.10±3.01Ⅲ＋Ⅳ性別男31 22.24±4.42 13.13±3.07 22.21±3.24

3 討 論

TGF－β1對正常細胞及早期的腫瘤轉化細胞通過調控細胞周期抑制細胞增殖、誘導細胞凋亡等來調控對它們的抑制作用，而在進展期腫瘤的過程中則促進細胞增殖進而促進腫瘤的侵襲、轉移等［1］。TGF－β是一種重要的細胞因子，具有抑制細胞分裂和增殖的作用。有研究表明，腫瘤的發生和惡性細胞對TGF－β產生抵抗作用關系密切，當TGF－β信號通路改變，其對靶細胞失去效應，甚至可促進腫瘤的演進［2－3］。本實驗結果顯示TGF－β1在正常胃黏膜中正常表達或弱表達，在胃癌中表達上調，且隨著胃腫瘤細胞分化降低、淋巴結轉移、TNM分期增高而表達加強，但是與患者的年齡以及性別無關，該結果與Naef等［4］的報道基本一致。

在腫瘤細胞中，大多數的錯義突變位于MH2結構域內，Smad2通過錯義突變、移碼突變等基因位點的改變導致失活，腫瘤的錯義突變使得Smads蛋白關鍵位點上的氨基酸發生互換，這樣一些同源或異源復合物形成必然受阻，而R2Smads依賴受體的磷酸化作用發生障礙，或形成不穩定的Smads蛋白［5］。本實驗結果發現Smad2蛋白在正常胃黏膜中IOD很高，在腫瘤發展的過程中，臨床病理特征上表現為低分化者Smad2蛋白的IOD值偏小，而高中分化者Smad2蛋白的IOD值比低分化者高很多，二者差異有統計學意義。同樣，在有淋巴結轉移者中，Smad2蛋白的IOD值低于無淋巴結轉移者，TNM分期Ⅲ＋Ⅳ期的Smad2蛋白的IOD值低于TNM分期Ⅰ＋Ⅱ期。從以上結果中不難看出隨著胃癌的進展、惡化，Smad2的表達呈現下降的趨勢，該結果與上述的研究結論基本一致。

CyclinDl基因是一種非顯性致癌基因，許多學者認為，在細胞生長周期進程中，CyclinD1的水平受生長因子等許多因素的調控，呈周期性變化［6］。在 G1期CyclinD1與CDK4或CDK6結合形成復合物，隨后通過N末端的LECXE基序與視網膜母細胞瘤（Rb）編碼蛋白pRb結合，使pRb的Ser和Tyr殘基發生磷酸化，轉錄因子E2F被釋放進而活化后，細胞周期就會由G1期進入S期，細胞增殖旺盛，如果CyclinD1表達失控，細胞增殖周期將會失調，從而導致腫瘤發生［7－8］。目前對胃癌的發生、發展與CyclinDl關系的研究并不明確，CyclinDl表達異常引起的細胞周期失控是細胞異常增殖和癌變的原因，可能是胃癌發生的早期分子事件［9］。Stelow等［10］發現胃癌中CyclinDl的表達率與患者的性別、年齡及胃癌臨床病理學指標如分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度、分期及腫瘤大小均無相關性，認為CyclinDl在早期胃癌中的表達起到重要的作用，可以作為一個潛在的早期腫瘤標記，對腫瘤預后的判斷無關。本研究發現，CyclinD1在胃癌中的表達明顯高于正常胃黏膜，低分化胃癌的表達高于高中分化胃癌，而且在分化程度越低的癌腫表達率越高，該研究結果同樣支持CyclinD1與胃癌的分化程度、侵及深度及淋巴結轉移密切相關。

本實驗為探討胃癌的發病機制的研究提供了新的思路，為TGF－β1、Smad2、CyclinD1成為靶向藥物作用的潛在靶點提供一定的實驗數據。

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