原發性高血壓患者尿足細胞標志蛋白podocalyxin的臨床研究＊

樊瑞芬，趙蓮英，瞿 峰，王桃霞，王銀龍，李 勇，趙世峰

（河北工程大學附屬醫院：1.腎內科；2.檢驗科；3.病理科；4.神經內科，河北邯鄲 056002；5.河北省邯鄲市第二醫院內科 056002；6.冀中能源峰峰集團第二醫院神經內科，河北邯鄲 056002）

高血壓是嚴重威脅人類健康的隱形殺手，可以引起心腦腎重要器官功能損害。作者選擇了182例原發性高血壓（EH）患者，檢測尿微量清蛋白（mALB）及尿足細胞標志蛋白podocalyxin（PCX）等，探討不同年齡、不同血壓分級與腎臟損害的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院門診、住院EH病史5年以上，腎功能正常的患者182例，其中男106例，年齡40～78歲，女76例，年齡42～80歲，均符合2004年WHO及2010年中國高血壓防治指南高血壓病診斷標準的規定，收縮壓（SBP）≥140 mm Hg和（或）舒張壓（DBP）≥90mm Hg，其中EH 1級51例，2級73例，3級58例。排除糖尿病、腎血管性、慢性腎臟病的患者。患者均服用1種或2種降壓藥（鈣拮抗劑和／或美托洛爾）。另選取本院體檢中心的健康體檢者30例，其中男18例，年齡36～74歲，女12例，年齡35～73歲，作為對照組。兩組年齡、性別腎功能均具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 尿蛋白定量測定 收集各組晨7：00至次日晨7：00全部尿液，測量并記錄24h尿量，混勻，取20mL送檢。

1.2.2 mALB測定 收集各組清晨首次清潔中段尿10mL，2 500r／min離心10min后取上清液，一部分用免疫比濁法測定mALB，試劑盒為英國朗道廠家提供，所用儀器為日立7170全自動生化分析儀。另一部分保存于－80℃低溫冰箱中，避免反復凍融，待檢。

1.2.3 PCX測定 取上述備檢尿標本，由美國R＆D公司提供PCX ELISA試劑盒，用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入PCX抗原、生物素化的抗人PCX抗體、辣根過氧化物標記的抗生物素蛋白，經過徹底洗滌后用底物四甲基聯苯胺（TMB）顯色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度值，計算樣品濃度。

1.3 統計學處理 采用SPSS13.0軟件進行處理，計量資料用s表示，正態分布的兩組均數間比較用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組尿蛋白定量、mALB、PCX比較 與對照組比較，高血壓組mALB、PCX顯著升高（P＜0.01），尿蛋白定量差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組尿蛋白定量、mALB、PCX比較s）

表1 兩組尿蛋白定量、mALB、PCX比較s）

組別 n 尿蛋白定量（g／24h） mALB（mg／L） PCX（ng／mL）30 0.096±0.024 11.200±5.900 2.032±0.652高血壓組對照組182 0.110±0.037 35.700±12.200 9.295±1.586

2.2 不同年齡組患者尿蛋白定量、mALB、PCX比較 與小于60歲組mALB、PCX比較，其余兩組顯著升高（P＜0.05）；小于60歲組尿蛋白定量與其余兩組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同年齡患者尿蛋白定量、mALB、PCX比較s）

表2 不同年齡患者尿蛋白定量、mALB、PCX比較s）

年齡 n 尿蛋白定量（g／24h）mALB（mg／L）PCX（ng／mL）85 0.100±0.056 9.230±9.160 5.250±2.060 60～＜70歲 37 0.090±0.135 20.850±5.060 14.940±3.400 70～80歲＜60歲60 0.110±0.256 21.790±6.590 15.570±4.140

2.3 不同年齡患者尿蛋白定量、mALB、PCX陽性率比較 與不同年齡組尿蛋白定量陽性率比較，mALB、PCX陽性率顯著增加（P＜0.01）；與不同年齡組mALB陽性率比較，PCX陽性率顯著增加（P＜0.05）。70～80歲各指標陽性率與小于60歲組比較顯著升高（P＜0.05）。見表3。

表3 不同年齡患者尿蛋白定量、mALB、PCX陽性率比較［n（%）］

2.4 不同高血壓分級尿蛋白定量、mALB、PCX的比較 與對照組尿蛋白定量、mALB、PCX比較，EH各組顯著升高（P＜0.05）；EH 1級組尿蛋白定量與EH 3級組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；與EH 1級組 mALB、PCX比較，EH 3級組顯著升高（P＜0.01）。見表4。

表4 對照組與不同分級EH尿蛋白定量、mALB、PCX的比較s）

表4 對照組與不同分級EH尿蛋白定量、mALB、PCX的比較s）

分組 n 尿蛋白定量（g／24h）mALB（mg／L）PCX（ng／mL）30 0.096±0.024 11.200±5.900 2.032±0.652 EH 1級組 51 0.103±0.028 10.580±4.830 3.390±1.214 EH 2級組 74 0.261±0.167 16.850±6.620 7.480±1.750 EH 3級組對照組57 0.282±0.365 39.950±7.210 10.230±2.850

3 討 論

足細胞是高度特化的腎小球臟層上皮細胞，是組成腎小球濾過膜的主要成分，也是阻止大分子濾過的最后屏障。由于它帶有負電荷，是防止突起之間粘連，維持裂孔膜結構和腎小球濾過膜電荷屏障的物質基礎［1－2］。當糖尿病、高血壓等疾病引起腎臟損傷時，足細胞首當其沖。開始表現為形態方面的改變，如足突融合、收縮，胞體縮小，假囊腫形成等變化。接著與血管基底膜剝離，脫落至腎小囊中，隨尿液排出。足細胞脫落后，血管基底膜裸露，打破了毛細血管袢血壓與腎小囊內靜水壓之間的平衡，毛細血管擴張，直至與腎小囊壁層細胞粘連［3］。此外，足細胞脫落后大量蛋白滲漏，使毛細血管袢透明樣變性。這些因素都是最后導致腎小球硬化的關鍵［4］。最近幾年大量的研究證實［5－6］，尿液中足細胞的出現是診斷早期微小病變和局灶性節段性腎小球硬化最有效的方法，采用鏡檢方法來檢測尿液中的足細胞，靈敏度太低，現在多通過免疫熒光法、免疫酶聯法等免疫學方法檢測足細胞上的標志蛋白來檢測尿液中的足細胞。足細胞的標志蛋白主要有nephrin、podocin、CD2相關蛋白（CD2AP）和PCX等。其中，PCX是足細胞中最特異的標志蛋白，只存在于足細胞上［7－8］。因此，已有研究采用免疫比濁法定量檢測尿液中PCX，用于糖尿病腎病的早期診斷，尿液中PCX是否可以用于EH腎損害的早期診斷，未見文獻報道。

本研究發現EH患者24h尿蛋白定量與對照組比較差異無統計學意義時，其mALB和PCX明顯高于對照組，說明mALB、PCX可以較早反映高血壓腎臟損害；從不同年齡、不同高血壓級別觀察發現，24h尿蛋白定量無明顯差異，mALB和PCX差異顯著；70～80歲mALB、PCX比小于60歲組顯著升高，PCX陽性率高于mALB陽性率，提示隨著年齡的增加高血壓患者腎損害發病率提高［9］，尿足細胞反映腎小球損傷較尿蛋白更為敏感，與Yu等［10］研究結果一致；研究還顯示不同血壓分級mALB、PCX隨著血壓級別的升高而升高，說明年齡、血壓級別可以作為EH腎損害的獨立危險因素。mALB、PCX可以作為高血壓病患者腎損害的早期指標，尿中檢測到PCX提示已有腎小球足細胞損傷，腎小球濾過屏障已受損。

［1］Greiber S，Munzel T，Kastner S，et al.NAD（P）Hoxidase activity in cultured human podocytes：effects of adenosine triphospahte［J］.Kidney Int，1998，53（3）：654－663.

［2］Quaggin SE，Kreidberg JA.Development of the renal glomerulus：good neighbors and good fences［J］.Development，2008，135（7）：609－620.

［3］Trggvason K.Unraveli ng the mecha nisms of glomerular ultrafiltration：nephrin，a key co mp nent of the slit diaphragm［J］.J Am Soc Nephrol，1999，10（2）：2440－2445.

［4］Petermann A，Floege J.Podocyte damage resulting in podocyturina A potential diagnostic markerto assess glamerular disease activity［J］.Nephron Clin Pract，2007，106（2）：61－66.

［5］姚宗浠，楊增.腎小球足細胞損傷與糖尿病腎病關系的研究進展［J］.中國自然醫學雜志，2010，12（1）：77－80.

［6］鄒琦，鄭祥雄.腎小球足細胞功能認識的進展［J］.醫學綜述，2011，17（19）：2910－2913.

［7］程亮，俞偉男，洪兵，等.尿足細胞標志蛋白Podocalyxin檢測在糖尿病腎臟損害程度評估中的意義［J］.中國全科醫學雜志，2012，15（21）：2441－2443.

［8］李驚子，黃海長，劉穎，等.檢測尿足細胞在活動性腎小球疾病中的意義［J］.北京大學學報：醫學版，2005，37（5）：463－466.

［9］Guidelines Committee.2003European Society of Hypertension European Society of Cardiology guidelines for the mannagement of arterial hypertension［J］.J Hypertens，2003，21（6）：1011－1053.

［10］Yu D，Peternann A，Kunter U，et al.Urinary podocyte loss is a more specific marker of ongoing glomerular damage than proteinuria［J］.J Am Soc Nephrol，2005，16（6）：1733－1741.