黔產艾納香生物堿的提取及含量測定

嚴敏+王玉鳳+湯洪敏

摘要：運用乙醇初提后用微波輔助提取的方法從菊科艾納香屬植物艾納香（Blumea balsamifera）中提取生物堿，結合單因素試驗和正交試驗探索最佳提取條件，最終得出提取艾納香中生物堿的最佳條件是，以80%的乙醇為提取劑，料液比為1∶40（m/V，g∶mL），在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取25 min。運用酸性染料比色法測定其總生物堿含量，結果表現為，艾納香中莖部的生物堿含量最高，為7.77 μg/g；其次是根部，為3.66 μg/g；葉部最少，為2.34 μg/g。

關鍵詞：艾納香（Blumea balsamifera）；生物堿；提取條件；含量測定

中圖分類號：S567；O657.32文獻標識碼：A文章編號：0439-8114（2014）10-2336-04

Extraction and Determination of Total Alkaloids in Guizhou Blumea balsamifera

YAN Min，WANG Yu-feng，TANG Hong-min

（The Chemistry and Environment Department， Guizhou Minzu University，Guiyang 550005，China）

Abstract： Alkaloids were extracted from Blumea balsamifera with ethanol extraction and microwave-assisted extraction method. The extraction conditions were optimized. The optimal conditions were using 80% ethanol extraction agents with material liquid ratio of 1∶40 and extracting 25 minutes in microwave-ultrasonic digestion machine. The content of total alkaloids was determined with acid dyes colorimetric method. The disposition of alkaloids in B. balsamifera was the highest in the stem（7.77 μg/g）， the second in the root （3.66 μg/g），and the least in the leaf （2.34 μg/g）.

Key words： Blumea balsamifera； alkaloid； extraction conditions；content determine

基金項目：貴州省科技廳聯合項目（黔科合J字LKM[2011]27）

艾納香（Blumea balsamifera）是菊科艾納香屬多年生灌木樣草本植物，在我國主要分布在貴州、云南、廣西三地，過去常作為民間用藥，可以溫中活血，祛風除濕，也可以殺蟲，主要用于治療寒濕瀉痢、腹痛腸鳴、跌打損傷等，以滇桂艾納香為原料生產的“婦血康顆粒”在治療婦女功能性子宮出血和產后出血方面有獨特的療效[1]。

艾納香作為天然中草藥，含有多種有效成分，已經測定的如黃酮類、有機酸、萜類等[2-4]。生物堿作為天然中草藥的重要有效成分，具有很高的研究價值，常見于很多植物中，在菊科植物中也有大量分布，但是目前并沒有文獻明確表明艾納香中含有生物堿，因此有必要對其進行研究來彌補這一空缺。研究結合各類生物堿的提取及分析方法，擬定以乙醇初提后用微波輔助提取的方法來提取艾納香中的生物堿[5-9]，并采用酸性染料比色法測定其含量，探索最佳提取條件和艾納香中生物堿的分布情況。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1供試材料艾納香全草采自貴州省羅甸縣，由貴州大學林學院熊中華副教授鑒定。

1.1.2儀器與試劑756PC紫外可見分光光度計購自上海舜宇恒平科學儀器有限公司，微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀購自上海新儀微波化學科技有限公司，旋轉蒸發儀購自上海亞榮生化儀器廠，鹽酸小檗堿標準品（純度≥98%）購自昆明綠盟科技有限公司。

1.2方法

1.2.1樣品溶液的制備及生物堿的檢測將艾納香全草烘干粉碎后，稱取2.5 g艾納香粉末兩份分別置于兩個250 mL的錐形瓶中，均加入體積分數為70%的乙醇溶液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀提取10 min。一份過濾得粗提取液，置于燒杯中備用；另一份提取液過濾后，用旋轉蒸發儀濃縮回收乙醇，濃縮液轉移至分液漏斗中，滴加2 mol/L鹽酸調至pH 3～4，用等量氯仿萃取2～3次，去除色素和酸不溶性雜質，得到的酸水層再以100 g/L氫氧化鈉調至pH 10～11，同樣以等量氯仿萃取2～3次，合并氯仿層，定容至10 mL，作為提純后的樣液。取粗提取液進行生物堿的沉淀試驗。用毛細管吸取粗提取液點樣在硅膠板上，重復點樣10次，待樣點干后，將硅膠板浸入碘化鉍鉀溶液中，迅速拿出后用清水輕輕沖洗掉表面多余的溶液，觀察樣點處的顏色。另采取同樣的操作，分別將硅膠板浸入到碘化鉀碘、磷鉬酸溶液中，觀察樣點處的顏色。

1.2.2pH對染色效果的影響分別精確吸取提純后的樣液1 mL置于7支分液漏斗中，分別加入之前配制好的不同pH的溴甲酚綠緩沖液2 mL，再依次加入氯仿10 mL，充分振蕩使其反應完全，靜置分層后，取下層氯仿層。首先在紫外可見分光光度計下對其進行波長掃描，對掃描結果綜合分析后得出，艾納香生物堿樣液在413～419 nm波長范圍內有最大吸收，結合資料可知，溴甲酚綠與生物堿染色在415 nm處有最大吸收[10]，因此本試驗以415 nm為最大吸收波長，并應用于之后的吸光度測定中。

1.2.3最佳提取條件的確定

1）單因素試驗。運用乙醇初提后用微波輔助提取的方法提取艾納香中的生物堿，結合資料信息，選取3個可能影響提取效果的因素乙醇體積分數、料液比（m/V，g∶mL，下同）、提取時間進行研究[11]。①乙醇體積分數對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0 g左右的艾納香粉末，分別加入乙醇體積分數為60%、70%、80%、90%、95%的提取液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀提取10 min。按照“1.2.1”中的操作方法對提取液進行提純，用氯仿定容至10 mL，加入2 mL溴甲酚綠緩沖液，充分振蕩使其反應，轉入分液漏斗中，靜置分層后取下層氯仿層，測定其吸光度。②料液比對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0g左右的艾納香粉末，分別加入乙醇體積分數為90%的提取液20、30、40、50、60 mL（料液比分別為1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60），30 ℃下在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取10 min。之后的操作同上，取下層氯仿層，測定其吸光度。③提取時間對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0 g左右的艾納香粉末，均加入乙醇體積分數為90%的提取液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀分別提取5、10、15、20、25 min。之后的操作同上，取下層氯仿層，測定其吸光度。

2）正交試驗。按照之前選定的3個因素的合理水平設計正交試驗。正交試驗因素與水平見表1。

1.2.4生物堿含量的測定

1）標準溶液的配制和標準曲線的繪制。研究表明，鹽酸小檗堿在酸性條件下經溴甲酚綠染色后的氯仿萃取層在410 nm處有最大吸收[12]，與本試驗中樣液的最大吸收波長很接近，且相對較易購得，因此本試驗采用鹽酸小檗堿作為標準品。首先配制標準溶液并繪制標準曲線，以標準品濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

2）艾納香不同部位的生物堿提取及含量測定。分別稱取根、莖、葉部位的艾納香1.000 0 g左右，加入體積分數為80%的乙醇溶液40 mL，在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取20 min，之后按照“1.2.1”中的操作提純，然后用氯仿定容至10 mL，加入2 mL溴甲酚綠緩沖溶液，充分振蕩分層后，取下層氯仿層測定吸光度，每個部位平行測定3次。生物堿含量=提取出的生物堿質量（μg）/艾納香原料質量（g）。

3）穩定性試驗。另稱取1 g左右的艾納香，在最佳提取條件下提取，然后采取同上的操作方法，在1 h內進行掃描，每間隔10 min掃描一次，統計結果。

2結果與分析

2.1樣液生物堿的檢測結果

將硅膠板浸入碘化鉍鉀溶液中進行處理，觀察到樣點處被染上了橘紅色，證明提取液中可能含有生物堿。另采取同樣的操作，分別將硅膠板浸入到碘化鉀碘、磷鉬酸溶液中，觀察到樣點分別被染上了淡黃色和紅褐色，證明提取液中含有生物堿。

2.2pH對染色效果的影響

在415 nm處測定各不同pH樣液的吸光度，結果見圖1。由圖1可知，隨著pH的增大，吸光度逐漸降低，因此最適宜的pH為4.23，所以以下測定過程中均采用pH 4.23的溴甲酚綠緩沖液進行染色。

2.3最佳提取條件的確定

2.3.1單因素試驗

1）乙醇體積分數對提取效果的影響。由圖2可知，隨著乙醇體積分數的增大，吸光度先逐漸增大，隨后開始減小。在乙醇體積分數為90%時吸光度有最大值，取70%、80%、90%為該因素的3個合理水平。

2）料液比對提取效果的影響。由圖3可知，隨著乙醇用量的增大，吸光度先逐漸增大，隨后開始減小。在料液比為1∶50時有最大吸光度，取1∶30、 1∶40、1∶50為該因素的3個合理水平。

3）提取時間對提取效果的影響。由圖4可知，隨著提取時間的增大，吸光度逐漸增大，隨后趨于穩定。在提取25 min時有最大吸光度，取15、20、25 min為該因素的3個合理水平。

2.3.2正交試驗結果由表2可知，本試驗最佳的水平組合是A2B2C3，即提取的最佳條件是用80%的乙醇，以1∶40的料液比提取25 min。

2.4生物堿含量的測定結果

2.4.1標準曲線方程標準曲線見圖5，標準曲線方程為A=0.166 1C+0.006 8，r=0.997 5。

2.4.2艾納香不同部位的生物堿含量試驗結果見表3。表3中試驗號1、2、3為根部提取物，4、5、6為莖部提取物，7、8、9為葉部提取物。平行試驗結果取平均值，得到根部生物堿平均含量為3.66 μg/g，莖部生物堿平均含量為7.77 μg/g，葉部生物堿平均含量為2.34 μg/g。由此可得，艾納香中莖部生物堿含量最高，其次是根部，葉部最少。

對根莖葉3個不同部位生物堿含量均平行測定了3次，以測定的生物堿含量來考察其重復性，計算得根部平行試驗的RSD=5.74%，莖部RSD=5.34%，葉部RSD=9.00%，3組試驗均重復性良好，因此本試驗方法重復性良好。

2.4.3穩定性試驗穩定性試驗結果見圖6，計算得RSD=0.55%，說明該試驗方法穩定性良好。

3結論與討論

試驗用改良的碘化鉍鉀試劑、碘化鉀碘試劑和磷鉬酸試劑進行生物堿沉淀試驗，證明艾納香中含有生物堿，這一結果填補了艾納香中生物堿研究的空白，具有重要意義。

在參考了其他藥用植物中生物堿的提取方法后，擬定了用乙醇初提后用微波輔助提取的方法來提取艾納香中的生物堿。參考資料設計單因素試驗和正交試驗，探索最佳的提取條件。結果得出，該方法下的最佳提取條件是：用體積分數為80%的乙醇溶液，以1∶40的料液比提取25 min。在最佳提取條件下分別對植株的根莖葉不同部位進行提取，測定吸光度，計算生物堿含量，結果得出：艾納香中莖部生物堿含量最高，平均值為7.77 μg/g；根部次之，平均值為3.66 μg/g；葉部最少，平均值為2.34 μg/g。

參考文獻：

[1] 黃泰康，丁志遵，趙守訓，等. 現代本草綱目[M]. 北京：中國醫藥科學技術出版社，2001.

[2] 周欣，楊小生，趙超. 艾納香揮發油化學成分的氣相色譜-質譜分析[J]. 分析測試學報，2001，20（5）：76-78.

[3] 郝小燕，余珍，丁智慧. 黔產艾納香揮發油化學成分研究[J]. 貴陽醫學院學報，2000，25（2）：121-122.

[4] 王治平，孟祥平，樊華，等. 滇桂艾納香揮發油化學成分的GC-MS分析[J]. 中草藥，2005，36（8）：1138-1139.

[5] 黎萍，楊敏麗. 披針葉黃華中金雀花堿類生物堿的提取工藝[J]. 華西藥學雜志，2007，22（1）：7-8.

[6] 高淑云，焦燦. 麻葉千里光中生物堿的提取及測定分析[J]. 食品科學，2009，30（18）：261-266.

[7] 楊蓉，梁冰，李延芳，等. 紫背天葵中總生物堿含量測定方法的研究[J]. 四川化工，2007，10（3）：31-34.

[8] 肖鳳艷，高靜，孫莉佳. 紫金龍總生物堿超聲波輔助提取工藝[J]. 湖北農業科學，2011，50（20）：4256-4257.

[9] 張紅梅，程雪梅，王長虹，等. 黃連中生物堿提取工藝的正交試驗研究[J]. 中國醫藥工業雜志，2008，39（8）：588-590.

[10] 李建寬，薛嬌，陳柏年，等. 紫外分光光度法測定槲寄生總生物堿的含量[J]. 山西醫科大學學報，2008，39（4）：349-351.

[11] 范家佑，張松竹. 黃柏中總生物堿的提取工藝優化[J]. 井岡山大學學報（自然科學版），2010，31（5）：112-117.

[12] 畢和平，李行璐，劉煒，等. 酸性染料比色法測定海南木蓮中的總生物堿[J]. 海南師范大學學報（自然科學版），2009， 22（2）：160-163.

1.2.3最佳提取條件的確定

1）單因素試驗。運用乙醇初提后用微波輔助提取的方法提取艾納香中的生物堿，結合資料信息，選取3個可能影響提取效果的因素乙醇體積分數、料液比（m/V，g∶mL，下同）、提取時間進行研究[11]。①乙醇體積分數對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0 g左右的艾納香粉末，分別加入乙醇體積分數為60%、70%、80%、90%、95%的提取液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀提取10 min。按照“1.2.1”中的操作方法對提取液進行提純，用氯仿定容至10 mL，加入2 mL溴甲酚綠緩沖液，充分振蕩使其反應，轉入分液漏斗中，靜置分層后取下層氯仿層，測定其吸光度。②料液比對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0g左右的艾納香粉末，分別加入乙醇體積分數為90%的提取液20、30、40、50、60 mL（料液比分別為1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60），30 ℃下在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取10 min。之后的操作同上，取下層氯仿層，測定其吸光度。③提取時間對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0 g左右的艾納香粉末，均加入乙醇體積分數為90%的提取液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀分別提取5、10、15、20、25 min。之后的操作同上，取下層氯仿層，測定其吸光度。

2）正交試驗。按照之前選定的3個因素的合理水平設計正交試驗。正交試驗因素與水平見表1。

1.2.4生物堿含量的測定

1）標準溶液的配制和標準曲線的繪制。研究表明，鹽酸小檗堿在酸性條件下經溴甲酚綠染色后的氯仿萃取層在410 nm處有最大吸收[12]，與本試驗中樣液的最大吸收波長很接近，且相對較易購得，因此本試驗采用鹽酸小檗堿作為標準品。首先配制標準溶液并繪制標準曲線，以標準品濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

2）艾納香不同部位的生物堿提取及含量測定。分別稱取根、莖、葉部位的艾納香1.000 0 g左右，加入體積分數為80%的乙醇溶液40 mL，在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取20 min，之后按照“1.2.1”中的操作提純，然后用氯仿定容至10 mL，加入2 mL溴甲酚綠緩沖溶液，充分振蕩分層后，取下層氯仿層測定吸光度，每個部位平行測定3次。生物堿含量=提取出的生物堿質量（μg）/艾納香原料質量（g）。

3）穩定性試驗。另稱取1 g左右的艾納香，在最佳提取條件下提取，然后采取同上的操作方法，在1 h內進行掃描，每間隔10 min掃描一次，統計結果。

2結果與分析

2.1樣液生物堿的檢測結果

將硅膠板浸入碘化鉍鉀溶液中進行處理，觀察到樣點處被染上了橘紅色，證明提取液中可能含有生物堿。另采取同樣的操作，分別將硅膠板浸入到碘化鉀碘、磷鉬酸溶液中，觀察到樣點分別被染上了淡黃色和紅褐色，證明提取液中含有生物堿。

2.2pH對染色效果的影響

在415 nm處測定各不同pH樣液的吸光度，結果見圖1。由圖1可知，隨著pH的增大，吸光度逐漸降低，因此最適宜的pH為4.23，所以以下測定過程中均采用pH 4.23的溴甲酚綠緩沖液進行染色。

2.3最佳提取條件的確定

2.3.1單因素試驗

1）乙醇體積分數對提取效果的影響。由圖2可知，隨著乙醇體積分數的增大，吸光度先逐漸增大，隨后開始減小。在乙醇體積分數為90%時吸光度有最大值，取70%、80%、90%為該因素的3個合理水平。

2）料液比對提取效果的影響。由圖3可知，隨著乙醇用量的增大，吸光度先逐漸增大，隨后開始減小。在料液比為1∶50時有最大吸光度，取1∶30、 1∶40、1∶50為該因素的3個合理水平。

3）提取時間對提取效果的影響。由圖4可知，隨著提取時間的增大，吸光度逐漸增大，隨后趨于穩定。在提取25 min時有最大吸光度，取15、20、25 min為該因素的3個合理水平。

2.3.2正交試驗結果由表2可知，本試驗最佳的水平組合是A2B2C3，即提取的最佳條件是用80%的乙醇，以1∶40的料液比提取25 min。

2.4生物堿含量的測定結果

2.4.1標準曲線方程標準曲線見圖5，標準曲線方程為A=0.166 1C+0.006 8，r=0.997 5。

2.4.2艾納香不同部位的生物堿含量試驗結果見表3。表3中試驗號1、2、3為根部提取物，4、5、6為莖部提取物，7、8、9為葉部提取物。平行試驗結果取平均值，得到根部生物堿平均含量為3.66 μg/g，莖部生物堿平均含量為7.77 μg/g，葉部生物堿平均含量為2.34 μg/g。由此可得，艾納香中莖部生物堿含量最高，其次是根部，葉部最少。

對根莖葉3個不同部位生物堿含量均平行測定了3次，以測定的生物堿含量來考察其重復性，計算得根部平行試驗的RSD=5.74%，莖部RSD=5.34%，葉部RSD=9.00%，3組試驗均重復性良好，因此本試驗方法重復性良好。

2.4.3穩定性試驗穩定性試驗結果見圖6，計算得RSD=0.55%，說明該試驗方法穩定性良好。

3結論與討論

試驗用改良的碘化鉍鉀試劑、碘化鉀碘試劑和磷鉬酸試劑進行生物堿沉淀試驗，證明艾納香中含有生物堿，這一結果填補了艾納香中生物堿研究的空白，具有重要意義。

在參考了其他藥用植物中生物堿的提取方法后，擬定了用乙醇初提后用微波輔助提取的方法來提取艾納香中的生物堿。參考資料設計單因素試驗和正交試驗，探索最佳的提取條件。結果得出，該方法下的最佳提取條件是：用體積分數為80%的乙醇溶液，以1∶40的料液比提取25 min。在最佳提取條件下分別對植株的根莖葉不同部位進行提取，測定吸光度，計算生物堿含量，結果得出：艾納香中莖部生物堿含量最高，平均值為7.77 μg/g；根部次之，平均值為3.66 μg/g；葉部最少，平均值為2.34 μg/g。

參考文獻：

[1] 黃泰康，丁志遵，趙守訓，等. 現代本草綱目[M]. 北京：中國醫藥科學技術出版社，2001.

[2] 周欣，楊小生，趙超. 艾納香揮發油化學成分的氣相色譜-質譜分析[J]. 分析測試學報，2001，20（5）：76-78.

[3] 郝小燕，余珍，丁智慧. 黔產艾納香揮發油化學成分研究[J]. 貴陽醫學院學報，2000，25（2）：121-122.

[4] 王治平，孟祥平，樊華，等. 滇桂艾納香揮發油化學成分的GC-MS分析[J]. 中草藥，2005，36（8）：1138-1139.

[5] 黎萍，楊敏麗. 披針葉黃華中金雀花堿類生物堿的提取工藝[J]. 華西藥學雜志，2007，22（1）：7-8.

[6] 高淑云，焦燦. 麻葉千里光中生物堿的提取及測定分析[J]. 食品科學，2009，30（18）：261-266.

[7] 楊蓉，梁冰，李延芳，等. 紫背天葵中總生物堿含量測定方法的研究[J]. 四川化工，2007，10（3）：31-34.

[8] 肖鳳艷，高靜，孫莉佳. 紫金龍總生物堿超聲波輔助提取工藝[J]. 湖北農業科學，2011，50（20）：4256-4257.

[9] 張紅梅，程雪梅，王長虹，等. 黃連中生物堿提取工藝的正交試驗研究[J]. 中國醫藥工業雜志，2008，39（8）：588-590.

[10] 李建寬，薛嬌，陳柏年，等. 紫外分光光度法測定槲寄生總生物堿的含量[J]. 山西醫科大學學報，2008，39（4）：349-351.

[11] 范家佑，張松竹. 黃柏中總生物堿的提取工藝優化[J]. 井岡山大學學報（自然科學版），2010，31（5）：112-117.

[12] 畢和平，李行璐，劉煒，等. 酸性染料比色法測定海南木蓮中的總生物堿[J]. 海南師范大學學報（自然科學版），2009， 22（2）：160-163.

1.2.3最佳提取條件的確定

1）單因素試驗。運用乙醇初提后用微波輔助提取的方法提取艾納香中的生物堿，結合資料信息，選取3個可能影響提取效果的因素乙醇體積分數、料液比（m/V，g∶mL，下同）、提取時間進行研究[11]。①乙醇體積分數對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0 g左右的艾納香粉末，分別加入乙醇體積分數為60%、70%、80%、90%、95%的提取液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀提取10 min。按照“1.2.1”中的操作方法對提取液進行提純，用氯仿定容至10 mL，加入2 mL溴甲酚綠緩沖液，充分振蕩使其反應，轉入分液漏斗中，靜置分層后取下層氯仿層，測定其吸光度。②料液比對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0g左右的艾納香粉末，分別加入乙醇體積分數為90%的提取液20、30、40、50、60 mL（料液比分別為1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60），30 ℃下在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取10 min。之后的操作同上，取下層氯仿層，測定其吸光度。③提取時間對提取效果的影響。平行稱取5份1.000 0 g左右的艾納香粉末，均加入乙醇體積分數為90%的提取液50 mL，在30 ℃下用微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀分別提取5、10、15、20、25 min。之后的操作同上，取下層氯仿層，測定其吸光度。

2）正交試驗。按照之前選定的3個因素的合理水平設計正交試驗。正交試驗因素與水平見表1。

1.2.4生物堿含量的測定

1）標準溶液的配制和標準曲線的繪制。研究表明，鹽酸小檗堿在酸性條件下經溴甲酚綠染色后的氯仿萃取層在410 nm處有最大吸收[12]，與本試驗中樣液的最大吸收波長很接近，且相對較易購得，因此本試驗采用鹽酸小檗堿作為標準品。首先配制標準溶液并繪制標準曲線，以標準品濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

2）艾納香不同部位的生物堿提取及含量測定。分別稱取根、莖、葉部位的艾納香1.000 0 g左右，加入體積分數為80%的乙醇溶液40 mL，在微波-紫外-超聲波三位一體合成萃取反應儀中提取20 min，之后按照“1.2.1”中的操作提純，然后用氯仿定容至10 mL，加入2 mL溴甲酚綠緩沖溶液，充分振蕩分層后，取下層氯仿層測定吸光度，每個部位平行測定3次。生物堿含量=提取出的生物堿質量（μg）/艾納香原料質量（g）。

3）穩定性試驗。另稱取1 g左右的艾納香，在最佳提取條件下提取，然后采取同上的操作方法，在1 h內進行掃描，每間隔10 min掃描一次，統計結果。

2結果與分析

2.1樣液生物堿的檢測結果

將硅膠板浸入碘化鉍鉀溶液中進行處理，觀察到樣點處被染上了橘紅色，證明提取液中可能含有生物堿。另采取同樣的操作，分別將硅膠板浸入到碘化鉀碘、磷鉬酸溶液中，觀察到樣點分別被染上了淡黃色和紅褐色，證明提取液中含有生物堿。

2.2pH對染色效果的影響

在415 nm處測定各不同pH樣液的吸光度，結果見圖1。由圖1可知，隨著pH的增大，吸光度逐漸降低，因此最適宜的pH為4.23，所以以下測定過程中均采用pH 4.23的溴甲酚綠緩沖液進行染色。

2.3最佳提取條件的確定

2.3.1單因素試驗

1）乙醇體積分數對提取效果的影響。由圖2可知，隨著乙醇體積分數的增大，吸光度先逐漸增大，隨后開始減小。在乙醇體積分數為90%時吸光度有最大值，取70%、80%、90%為該因素的3個合理水平。

2）料液比對提取效果的影響。由圖3可知，隨著乙醇用量的增大，吸光度先逐漸增大，隨后開始減小。在料液比為1∶50時有最大吸光度，取1∶30、 1∶40、1∶50為該因素的3個合理水平。

3）提取時間對提取效果的影響。由圖4可知，隨著提取時間的增大，吸光度逐漸增大，隨后趨于穩定。在提取25 min時有最大吸光度，取15、20、25 min為該因素的3個合理水平。

2.3.2正交試驗結果由表2可知，本試驗最佳的水平組合是A2B2C3，即提取的最佳條件是用80%的乙醇，以1∶40的料液比提取25 min。

2.4生物堿含量的測定結果

2.4.1標準曲線方程標準曲線見圖5，標準曲線方程為A=0.166 1C+0.006 8，r=0.997 5。

2.4.2艾納香不同部位的生物堿含量試驗結果見表3。表3中試驗號1、2、3為根部提取物，4、5、6為莖部提取物，7、8、9為葉部提取物。平行試驗結果取平均值，得到根部生物堿平均含量為3.66 μg/g，莖部生物堿平均含量為7.77 μg/g，葉部生物堿平均含量為2.34 μg/g。由此可得，艾納香中莖部生物堿含量最高，其次是根部，葉部最少。

對根莖葉3個不同部位生物堿含量均平行測定了3次，以測定的生物堿含量來考察其重復性，計算得根部平行試驗的RSD=5.74%，莖部RSD=5.34%，葉部RSD=9.00%，3組試驗均重復性良好，因此本試驗方法重復性良好。

2.4.3穩定性試驗穩定性試驗結果見圖6，計算得RSD=0.55%，說明該試驗方法穩定性良好。

3結論與討論

試驗用改良的碘化鉍鉀試劑、碘化鉀碘試劑和磷鉬酸試劑進行生物堿沉淀試驗，證明艾納香中含有生物堿，這一結果填補了艾納香中生物堿研究的空白，具有重要意義。

在參考了其他藥用植物中生物堿的提取方法后，擬定了用乙醇初提后用微波輔助提取的方法來提取艾納香中的生物堿。參考資料設計單因素試驗和正交試驗，探索最佳的提取條件。結果得出，該方法下的最佳提取條件是：用體積分數為80%的乙醇溶液，以1∶40的料液比提取25 min。在最佳提取條件下分別對植株的根莖葉不同部位進行提取，測定吸光度，計算生物堿含量，結果得出：艾納香中莖部生物堿含量最高，平均值為7.77 μg/g；根部次之，平均值為3.66 μg/g；葉部最少，平均值為2.34 μg/g。

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