合成魚腥草素對潰瘍性結腸炎小鼠的保護作用

宋莎莎，楊樂，俞令凱，林陳石，胡婭 （長江大學醫學院，湖北 荊州 434023）

潰瘍性結腸炎 （ulcerative colitis，UC）是一種彌散的慢性非特異性炎癥性腸病，以大腸黏膜與黏膜下炎癥病變為主，該病反復發作，遷延不愈，極大地影響患者生活質量［1］。近年來，因其發病率逐年升高而倍受關注。UC病因不明確，尚無特效治療方法。清熱解毒中藥魚腥草具有抗菌、抗炎的作用，本實驗探討魚腥草主要有效成分魚腥草素對UC小鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 試劑

合成魚腥草素 （亞硫酸氫鈉癸酰乙醛，魚腥草素鈉，sodium houttuyfonate，HOU，湖南省湘中制藥有限公司，批號：110403），葡聚糖硫酸鈉 （dextran sulfate sodium，DSS，上海寶曼生物科技有限公司，批號：9011－18－1）。

1.2 儀器

DDL－5M離心機 （賽特湘儀有限公司），RM2235石蠟切片機 （德國Leica），Microphot FXA光學顯微鏡 （日本Nikon）。

1.3 實驗動物與分組

昆明種小鼠，雄性，體質量18～22g。隨機分為6組：正常組 （A）、模型組 （B）、合成魚腥草素低劑量組 （C）、中劑量組 （D）、高劑量組 （E）。除正常組外，其余小鼠自由飲用5%DSS 7d，建立潰瘍性結腸炎模型。C、D、E組小鼠分別給予合成魚腥草素0.2、0.4、0.8g／kg，A、B組給予生理鹽水，灌胃給藥，1次／d，連續7d。

1.4 病理分析

取結腸組織8cm，行結腸大體形態損傷評分［2］：0分：黏膜無損傷；1分：黏膜充血，血管模糊；2分：黏膜接觸性出血；3分：黏膜自發性出血；4分：有明顯大小不等的潰瘍形成。肉眼觀察病變組織后，置于10%的福爾馬林液中固定24h，經常規脫水、浸蠟、石蠟包埋，顯微鏡下觀察切片組織的炎癥浸潤情況，根據文獻標準評分［3］，0分：黏膜固有層無中性粒細胞浸潤；1分：黏膜固有層有少量中性粒細胞 （＜10個／高倍視野）浸潤，累及少量隱窩；2分：黏膜固有層有多量中性粒細胞（10～50個／高倍視野）浸潤，累及50%以上隱窩；3分：黏膜固有層有大量中性粒細胞 （＞50個／高倍視野）浸潤，伴隱窩膿腫；4分：固有層明顯急性炎癥伴潰瘍形成。

1.5 統計學分析

采用SPSS 16.0軟件包對數據進行統計分析，計量資料以 （）表示，多組間比較采用方差分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 癥狀

造模完成后，UC小鼠均出現腹瀉、粘液膿血便等典型UC活動期癥狀，治療7d后，模型組小鼠癥狀無改善，合成魚腥草素低劑量組小鼠腹瀉，粘液膿血便等癥狀減輕，中高劑量組小鼠癥狀逐漸消失。

2.2 小鼠結腸病理組織學改變

與正常組比較，模型組表現為腸道的急性炎癥期，伴有黏膜的水腫糜爛，隱窩明顯減少，大量炎癥細胞浸潤。HOU治療組腸道黏膜被侵蝕及腺上皮消失等炎癥反應明顯低于模型組，見圖1。

圖1 小鼠結腸壁粘膜層病理學觀察 （HE，×200）

2.3 小鼠結腸組織病理學評分

肉眼觀察結腸組織大體形態損傷和鏡下觀察結腸組織炎癥浸潤情況，治療組評分均明顯低于模型組，差異有統計學意義 （P＜0.05或P＜0.01）。見表1。

3 討論

魚腥草味辛，性寒涼，歸肺經，具有清熱解毒、消癰排膿等功效，現代藥理研究認為魚腥草有抗菌、抗病毒、抗炎、抗過敏、增強免疫功能的作用，臨床用于治療呼吸、消化、婦科、眼科及腫瘤等多種疾病［4］。魚腥草素為魚腥草揮發油中有效成分癸酰乙醛，將其與亞硫酸氫鈉成鹽，克服了天然魚腥草素結構不穩定、不溶于水的缺點，得到具有相似生物活性的合成魚腥草素。

潰瘍性結腸炎的病因至今未明，可能與感染、免疫、遺傳、環境等多種因素相關。患者病情常常遷延不愈，極易復發，嚴重影響患者生存質量，且目前尚無有效治療方法，因此深入研究潰瘍性結腸炎的治療方法非常重要。動物模型的建立是實驗研究中非常關鍵的環節。選擇復制動物模型的方案時，應充分考慮病因、發病機理、病理變化及表現癥狀等盡量與臨床接近。目前用于研究的潰瘍性結腸炎的實驗動物模型大致可分為免疫法、化學法、復合法、基因模型以及中醫模型五大種類［5］。本實驗選用DSS誘導的小鼠UC模型，該方法建立的UC模型病理生理、組織形態、病程特點等與人類UC近似，是一種較理想的UC動物模型［6］。DSS是由蔗糖合成的一種硫酸多糖，市售DSS的分子量從5000到500000不等，經預實驗選擇分子量40000的DSS建立UC模型。

潰瘍性結腸炎以慢性反復發作的腹痛腹瀉或粘液膿血便等為臨床特點。本實驗中，小鼠自由飲用5%DSS，5～7d后小鼠體質量下降、懶動，并有明顯的腹瀉、便血等癥狀，結腸組織呈明顯的急性炎癥改變。經高、中、低三個劑量合成魚腥草素灌胃7d治療后，以上癥狀均有不同程度的緩解。低劑量組對UC癥狀有一定的改善作用，但評分與模型組差異無統計學意義 （P＞0.05），中、高劑量組在緩解癥狀的同時，也顯著降低UC小鼠結腸大體形態評分和組織病理學評分 （中劑量組P＜0.05，高劑量組P＜0.01）。實驗結果提示，在一定劑量范圍內，合成魚腥草素對UC的治療效果隨劑量增高而增強，具有劑量依賴性。具體量效關系有待于進一步研究。

表1 各組小鼠病變結腸組織肉眼觀及鏡下觀評分

［1］Liu FB，Li XY.Research of the quality of life of patients with ulcerative colitis：current status and future prospects ［J］.World Chinese Journal of Digestology，2011，19 （5）：498.

［2］黃紅麗，聶玉強，李瑜元 .潰瘍性結腸炎臨床嚴重程度分型與內鏡病理分級的關系 ［J］.現代消化與介入診療，2008，13（2）：79－81.

［3］鐘英強，朱兆華，幸連春 .活動期潰瘍性結腸炎活檢粘膜的病理組織學特征、分級及其與疾病程度的關系 ［J］.中華消化雜志，2003，23 （7）：414－417.

［4］和殿峰 .魚腥草的藥理研究進展與臨床應用 ［J］.中國誤診學雜志，2008，8（22）：5520－5522.

［5］徐陽，唐艷萍 .潰瘍性結腸炎中西醫動物模型研究進展 ［J］.中國中西醫結合外科雜志，2013，19（4）：469－472.

［6］張忠，程富勝，賈寧，等 .小鼠潰瘍性結腸炎模型的建立及病理組織學比較 ［J］.中國實驗動物學報，2012，20（6）：69－71.