CD24在喉癌中的表達(dá)及其臨床意義

莊黎明

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院耳鼻咽喉外科，福建 泉州 362000)

喉癌是高侵襲性的惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因、多階段的演進(jìn)過程。CD24是一種低分子量高度糖基化的黏附分子,主要表達(dá)在造血系統(tǒng)。研究表明，CD24可能參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究探討可能影響喉癌預(yù)后的獨(dú)立因素以及CD24在喉癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床病例資料 選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院1998年至2005年間行喉鱗狀細(xì)胞癌根治術(shù)且隨訪資料完整的68例病例，年齡28～75歲，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療及免疫治療，且術(shù)后均在本院根據(jù)NCCN指南進(jìn)行放療。其生存期從手術(shù)之日起開始計(jì)算，終止日期為死亡期或末次隨訪日期，截止日期為2008年6月30日。隨訪期限從13～115個(gè)月不等，平均隨訪日期為60.63個(gè)月。其中局部復(fù)發(fā)8例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移9例，死亡45例。所有患者的手術(shù)標(biāo)本經(jīng)10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，分別做HE染色及免疫組化染色。所有病例均由兩位病理醫(yī)師確診。68例喉癌組織中，按發(fā)生部位分型：聲門上型21例，聲門型28例，聲門下型19例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)23例，Ⅱ級(jí)22例，Ⅲ級(jí)23例。68例喉癌中32例有淋巴轉(zhuǎn)移。根據(jù)國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)TNM分期方案分為：Ⅰ期25例，Ⅱ期20例，Ⅲ期23例。另外隨機(jī)取遠(yuǎn)離腫瘤(>1 cm)的腫瘤旁正常組織(鏡下無癌)20例作對(duì)照組。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗人CD24單克隆抗體(克隆號(hào)SN3b)，Elivision試劑盒，胃蛋白酶，H2O2，內(nèi)源性生物素阻斷試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3實(shí)驗(yàn)過程 采用免疫組化Elivision法染色，嚴(yán)格按試劑盒說明方法操作。鼠抗人CD24單克隆抗體(克隆號(hào)SN3b)，Elivision試劑盒，胃蛋白酶，H2O2，內(nèi)源性生物素阻斷試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。石蠟切片脫蠟水化，采用高壓鍋法抗原修復(fù)，3％ H2O2孵育，生物素阻斷劑阻斷。加入一抗CD24單克隆抗體,工作濃度為1∶100,二抗孵育,DBA顯色,脫水,透明,封片。用已知的扁桃腺切片作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定 由兩位病理醫(yī)師獨(dú)立觀察，隨機(jī)采集10個(gè)具有代表性的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均數(shù)值。CD24陽(yáng)性染色判斷標(biāo)準(zhǔn):胞質(zhì)或胞膜有棕黃色顆粒沉著者為陽(yáng)性染色。依陽(yáng)性細(xì)胞百分率判定陽(yáng)性強(qiáng)度。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10％為“+”,10％～50％為“”,≥50％為“”。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier法分析，不同生存曲線的差異性檢驗(yàn)用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)(Log-rank Test)；運(yùn)用多因素COX模型法來綜合評(píng)價(jià)和權(quán)衡各因素對(duì)預(yù)后生存的影響。

2 結(jié) 果

2.1CD24在喉癌組織和癌旁組織中的表達(dá) 喉癌組織CD24明顯表達(dá)，陽(yáng)性定位于細(xì)胞膜上部分細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)亦染色(圖1)，其他位置未見染色；CD24在喉癌癌旁正常組織中不表達(dá)。超過72％的喉癌細(xì)胞有不同程度CD24表達(dá)，41％的腫瘤呈中等程度表達(dá)，30.8％的腫瘤呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。

圖1 CD24在喉癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(Elivision染色，×400)

2.2CD24與喉癌病理參數(shù)的關(guān)系 高TNM分期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中CD24表達(dá)明顯高于對(duì)應(yīng)組(P<0.05)，而與患者的年齡、性別、腫瘤分型、組織學(xué)分級(jí)無關(guān)。見表1。

2.3喉癌組織中CD24蛋白表達(dá)與患者生存時(shí)間的關(guān)系 不同CD24表達(dá)組之間的生存率差異顯著(χ2=18.164，P=0.000)，CD24表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性喉癌患者生存率明顯低于CD24表達(dá)強(qiáng)度較低組。見表2。

2.4COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析 對(duì)可能影響喉癌預(yù)后的6個(gè)因素：CD24、患者的年齡、腫瘤分型、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期，進(jìn)行多因素COX模型分析，結(jié)果顯示，CD24、臨床分期是影響喉癌預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05)。見表3。

表1 CD24與喉癌病理參數(shù)的關(guān)系(n)

表2 CD24表達(dá)與喉癌總生存率的關(guān)系

表3 68例喉癌患者臨床病理特征多因素COX回歸分析

3 討 論

CD24蛋白是在上世紀(jì)70年代末被發(fā)現(xiàn)的，CD24是小鼠“熱穩(wěn)定抗原(heat-stable antigen，HSA) ”在人類的同源分子，功能基因定為于常染色體6q21區(qū)帶，在常染色體1p36、15q212q22和性染色體Yq11存在不含內(nèi)含子的CD24假基因。CD24在生理?xiàng)l件下,能支持單核或中性粒細(xì)胞的黏附,從而激活血小板或內(nèi)皮細(xì)胞的活性。

在生理?xiàng)l件下，CD24表達(dá)于腦和胰腺的發(fā)育以及肌肉、表皮、腎小管的再生過程中。而惡性腫瘤中，CD24在小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌〔1〕、卵巢上皮癌〔2，3〕、乳腺癌〔2〕、前列腺癌〔4〕、膽管細(xì)胞癌〔5〕、胰腺癌〔6〕、子宮頸鱗狀上皮癌〔7〕、膀胱癌〔2，8〕、腎癌〔9〕中表達(dá)增高，是乳腺癌、卵巢上皮癌、非小細(xì)胞性肺癌、膽管細(xì)胞癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。上調(diào)CD24蛋白的表達(dá)可能提高乳腺癌細(xì)胞〔10〕的侵襲、轉(zhuǎn)移潛力,與多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。最近研究〔11,12〕表明CD24基因是乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌腫瘤干細(xì)胞的表明標(biāo)志,參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但對(duì)于CD24在喉癌中的作用研究尚少。

本研究提示,在喉癌的發(fā)生發(fā)展過程中,CD24 可能起重要作用。CD24 蛋白可能在喉癌的惡性進(jìn)展、侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用，可能是影響喉癌預(yù)后的獨(dú)立因素，故CD24 可能成為反映喉癌的惡性程度指標(biāo)和預(yù)后指標(biāo)。

Overdevest等〔8〕發(fā)現(xiàn)表達(dá)CD24是膀胱癌小鼠模型發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的必要條件，通過抗CD24單抗可抑制腫瘤的生長(zhǎng)并延長(zhǎng)生存期，在體外，Su等〔3〕發(fā)現(xiàn)通過ShRNA技術(shù)敲除CD24可觀察到通過促進(jìn)血管生成、細(xì)胞增殖和減少凋亡明顯抑制卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng),而在宮頸癌中Sung等〔7〕發(fā)現(xiàn)甚至在術(shù)后輔助放療患者中都發(fā)現(xiàn)CD24高表達(dá)者預(yù)后差,故可通過抗CD24抗體抑制CD24的表達(dá)從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)。所以對(duì)CD24 的研究將不僅有助于人們更好地了解腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，還能促進(jìn)新的抗癌藥物和治療方法的開發(fā)和出現(xiàn)。

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