食管鱗癌組織中樹突細胞CD83和促凋亡蛋白Smac的表達及其臨床意義

王 雷 單保恩 劉 亮 孟憲利 王士杰

(河北醫科大學第四醫院胸外科，河北 石家莊 050011)

樹突細胞(DC)是機體功能最強的抗原專職遞呈免疫細胞(APC)，能攝取、加工提呈抗原，刺激T細胞增殖分化。一個DC 細胞能活化100～3 000個T細胞，處于啟動、調控并維持免疫應答的中心環節，對激發抗腫瘤免疫有重要作用〔1～3〕。腫瘤浸潤樹突細胞(TIDC)，它的數量和功能可以反映機體的免疫狀態。研究腫瘤組織微環境中DC的免疫功能有助于發現腫瘤細胞免疫逃逸的原因和開展DC疫苗的治療研究，對于闡明食管癌免疫逃逸機制，探索行之有效的生物治療手段具有重要的理論與實踐意義。目前在食管鱗癌(ESCC)組織中TIDC的研究較少。細胞凋亡主要的途徑包括死亡受體途徑和線粒體途徑,這兩條途徑都有Caspases 家庭成員的參與。Smac是近幾年發現的一種由線粒體釋放的促進凋亡的蛋白，可以特異性與凋亡抑制蛋白(IAP)結合，解除 IAP 對Caspase 的抑制，從而促進凋亡〔4〕。本研究探討 TIDC 和Smac 在食管癌組織中的表達及兩者的關系。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選取河北醫科大學第四醫院胸外科2002年5月至2003年12月手術切除并經病理證實的ESCC患者78例，術前均未行化療、放療或者其他治療。其中男49例，女29例，年齡39～71歲，中位年齡54歲。根據UICC ESC國際臨TNM分期標準(1997)：Ⅰ～Ⅱ期34例，Ⅲ～Ⅳ期44例。24例正常食管黏膜組織作為對照。

1.2試劑 鼠抗人CD83單克隆抗體購自eBioscience公司，兔抗人 Smac單克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司。

1.3ESCC組織單細胞懸液的制備和流式細胞儀檢測 將石蠟包埋組織在切片機上切取40 μm厚的組織片5片。加入二甲苯6 ml(室溫)，1 d后更換一次二甲苯，蠟脫凈后棄去二甲苯；再依次加入100％、95％、70％、50％梯度的酒精5 ml，每步10 min，加入蒸餾水5 ml，用網搓法制備單細胞懸液。取單細胞懸液100 μl(含1×106個細胞)，分別加入CD83 單抗和Smac單抗20 μl，室溫避光放置2 h，流式細胞儀檢測。檢測前以flow-checkTMFluorpheres(10 μm)熒光微球校準。

2 結 果

2.1CD83和Smac在正常食管黏膜和ESCC組織中的表達 CD83在正常食管黏膜中及ESCC組織中的表達量分別為19.70±6.79和13.39±8.78，兩者差異顯著(P<0.01)；Smac 在正常食管黏膜中及ESCC組織中的表達量分別為64.83±8.35和47.99±19.97，兩者差異顯著(P<0.01)。

2.2CD83和Smac表達與ESCC臨床病理特征的關系 CD83表達與ESCC淋巴結轉移和TNM分期有關(P均<0.05)，與浸潤深度、分化程度、年齡和性別無關(P均>0.05)。Smac表達與ESCC淋巴結轉移、TNM分期和浸潤深度有關(P均<0.01)，與分化程度、年齡和性別無關(P均>0.05)。見表1。

表1 Smac和CD83在ESCC組織中的表達及其與臨床病理特征的關系

2.3CD83和Smac在ESCC表達的相關性 Pearson法顯示CD83和Smac在ESCC表達呈正相關(r=0.297，P<0.05)。

3 討 論

機體內存在復雜的腫瘤免疫逃逸機制，致使腫瘤細胞逃避免疫監視。該機制既有腫瘤細胞方面的因素，又有宿主免疫系統方面因素。其中荷瘤宿主體內DC的異常是腫瘤免疫逃逸機制的一個重要方面，TIDC的浸潤程度反映了宿主防御機制所處的狀態，TIDC數量減少和功能低下或缺陷，不能有效提呈腫瘤抗原和提供協同刺激信號，以致T細胞介導的抗腫瘤免疫不能有效發揮作用〔5～7〕。

腫瘤細胞存在各種逃避機體免疫監視和免疫控制的機制，不同狀態的機體免疫能不同程度地對腫瘤產生抑制作用。研究表明，DC可以通過如下途徑抑制腫瘤：①作為高效抗原提呈細胞(APC)，通過激活細胞毒性T細胞(CTL)等細胞釋放穿孔素和細胞因子誘導特異性細胞免疫致使腫瘤細胞壞死或凋亡；②DC釋放一氧化氮(NO)或直接表達腫瘤壞死因子家族細胞因子，直接引起腫瘤細胞壞死或凋亡；③直接抑制腫瘤細胞增殖。成熟DC能有效提呈抗原和提供協同刺激信號，活化T細胞介導的抗腫瘤免疫，CD83分子是DC的成熟標記，因此CD83的表達量更能反映腫瘤微環境的免疫狀態。Iwamoto等〔8〕研究發現CD83陽性表達的TIDC的數量與乳腺癌淋巴結轉移和預后無關，體現了乳腺癌組織中浸潤的成熟DC對患者預后的重要性。本研究發現ESCC組織中CD83的表達低于正常食管黏膜組織，CD83的表達與ESCC臨床分期和淋巴結轉移有關，病程越晚，CD83表達量越低。食管癌組織內成熟DC數量減少，可能是腫瘤免疫逃逸的重要因素。

Smac是Du等〔9〕發現的一種存在于線粒體并且調節細胞凋亡的蛋白質,主要通過與IAP作用促進細胞的凋亡。Smac過表達可以抑制或減緩腫瘤的發生發展。當 Smac封閉于線粒體或 Smac缺乏使其拮抗 IAP而促進凋亡的作用減弱,則促進了腫瘤的發生和發展。已有研究顯示Smac在癌細胞中表達的缺乏可能抑制腫瘤的凋亡,延長腫瘤的生存。Yoo等〔10〕研究發現約62％的癌組織中可見Smac表達，且不同的癌組織中Smac的表達有差異，在腎癌、肝癌、神經母細胞瘤等惡性實體腫瘤中的研究均顯示它表達下調或缺失。Mizutani等〔11〕證實 Smac在肝癌中的表達下降,轉染 Smac cDNA可以增強順鉑介導的細胞毒作用。本研究發現Smac在正常食管黏膜組織中的表達明顯高于在食管鱗癌組織的表達，并且與浸潤深度、臨床分期和淋巴結轉移有關，隨著病程進展，Smac表達率呈下降趨勢，提示Smac的表達降低可能與食管癌的發生、發展有關，在食管癌的發生發展中，腫瘤細胞的凋亡處于抑制狀態，從而有利于疾病進展。

食管鱗癌的發生、發展是一個多基因、多步驟的生物學行為改變的過程，是細胞增生與凋亡的動態平衡失調的結果。本研究發現CD83和Smac表達呈正相關，其原因可能是DC誘導的CTL及其分泌的細胞因子作用于腫瘤細胞，調節腫瘤細胞的某些促進凋亡的基因的表達，從而抑制腫瘤細胞增殖。隨著病程進展，DC表達減少而且功能降低可能導致腫瘤組織中Smac表達減少，腫瘤細胞凋亡減少致使腫瘤進展。

食管鱗癌的治療手段以手術切除為主，輔以化療和放療，但其遠期療效仍不夠理想。患者就診時多數已發展為晚期，手術難以完全切除，而放、化療不僅對造血系統、消化系統等產生嚴重毒副作用，而且最終還可能誘導腫瘤細胞產生免疫耐受。食管鱗癌組織內成熟DC數量減少可能是腫瘤發生免疫逃逸的原因之一。近年來腫瘤生物治療已成為腫瘤治療的一種新形勢，增強DC的抗原提呈功能及激活T細胞的能力，激發機體的特異性抗腫瘤免疫，是DC用于抗腫瘤免疫治療的理論基礎和出發點〔12,13〕，DC疫苗活化CTL發揮抗瘤效應為基礎的免疫治療取得了初步成果〔14,15〕，這對食管癌的治療具有積極意義。

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