MDR1 C3435T基因多態(tài)性對(duì)胃潰瘍患者抗Hp治療效果的影響

施純禮 吳麗賢

(福建醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，福建 福州 350000)

幽門(mén)螺桿菌(HP)感染是引起胃潰瘍的重要因素，根治HP是治療胃潰瘍及預(yù)防潰瘍復(fù)發(fā)的重要手段，此外，根治HP還能降低慢性胃炎患者胃癌發(fā)生率〔1〕。三聯(lián)療法是目前治療HP的常用方法，但隨著三聯(lián)療法在臨床上廣泛應(yīng)用，使得HP耐藥性呈上升趨勢(shì)，從而影響治療效果〔2〕。近年相關(guān)研究指出〔3〕，多耐藥基因(MDR)可影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)，增強(qiáng)致病菌耐藥性，同時(shí)還可參與代謝物在細(xì)胞膜間的轉(zhuǎn)運(yùn)，影響機(jī)體正常生理代謝，從而降低藥物治療效果。本文將分析MDR1 C3435T基因多態(tài)性對(duì)HP陽(yáng)性胃潰瘍患者三聯(lián)療法治療效果的影響。

1 資料及方法

1.1對(duì)象 2012年1月至2014年1月選取80例胃潰瘍患者為研究對(duì)象，入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者經(jīng)胃鏡證實(shí)為胃潰瘍；(2)所有患者經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)HP陽(yáng)性；(3)均簽署知情同意書(shū)，自愿參與研究；(4)無(wú)肝腎功能不全等疾病；(5)無(wú)對(duì)三聯(lián)療法過(guò)敏的患者；(6)患者治療前未接受過(guò)任何抗菌藥物治療；(7)均為非妊娠期或哺乳期患者。80例患者中男42例，女38例，年齡24～68歲，平均(45.32±2.98)歲，病程3個(gè)月～12年，平均(3.85±2.10)年。選取80例非HP胃潰瘍患者為對(duì)照1組，患者經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)HP陰性，其余納入標(biāo)準(zhǔn)與觀察組相同，男40例，女40例，年齡22～70歲，平均(46.32±2.58)歲，病程3個(gè)月～10年，平均(3.75±2.11)年。另選取80例正常健康體檢者為對(duì)照2組，經(jīng)各項(xiàng)檢查證實(shí)機(jī)體健康狀況良好，男38例，女42例，年齡22～70歲，平均(47.32±2.51)歲。三組患者性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1MDR1 C3435T基因多態(tài)性測(cè)定 空腹抽取各組靜脈血3 ml，經(jīng)離心處理后留取上清液，采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝全血標(biāo)本，采用日本TOYOBO磁珠法DNA提取試劑盒提取DNA，操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，將DNA標(biāo)本置入-80℃冰箱中保存。DNA引物由北京天一生物技術(shù)公司提供。DNA探針(5’-TGCAGCAGATTGGTCCTGAAATAGTA-3’)由北京賽百盛生物技術(shù)公司提供。rs505922基因點(diǎn)突變擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為164 bp，分別在突變型及野生型引物上游3'端-2位置引入錯(cuò)配堿基“G”(突變引物：5’-GAGCCAAGACTTGTCCCCGG-3’,野生引物：5’-GAGCCAAGACTTGTCCCCGA-3’)。反應(yīng)條件：先在42℃反向轉(zhuǎn)錄30 min,隨后將溫度變?yōu)?5℃將DNA變性2 min，然后于55℃中15 s、72℃中30 s以及95℃中30 s反復(fù)循環(huán)擴(kuò)增，并在退火階段收集熒光信號(hào)。采用熒光定量PCR儀測(cè)定TapMan探針上的FAM熒光信號(hào)。等位基因頻率=(2×純合子+雜合子)/(2×受體人數(shù))。按照Hardy-Weinberg平衡法對(duì)群體代表樣本進(jìn)行分析。

1.2.2HP陽(yáng)性胃潰瘍治療方法 觀察組患者給予三聯(lián)療法治療：蘭索拉唑30 mg/次，2次/d；阿莫西林1 000 mg/次，2次/d；克拉霉素500 mg/次，2次/d，持續(xù)用藥14 d，治療結(jié)束后經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)患者HP陽(yáng)性情況進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)對(duì)患者進(jìn)行藥敏性試驗(yàn)，觀察不同基因型HP陽(yáng)性胃潰瘍患者HP耐藥情況，藥敏試驗(yàn)試劑盒由美國(guó)Sigma公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1不同組別患者M(jìn)DR1 C3435T基因比例 與對(duì)照1組及對(duì)照2組相比，觀察組患者TT型MDR1 C3435T基因比例顯著高于對(duì)照組，T等位基因頻率高于對(duì)照1組及對(duì)照2組(P<0.05)。與對(duì)照2組相比，對(duì)照1組患者CT型、TT型MDR1 C3435T基因比例及T等位基因頻率較高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同組別患者M(jìn)DR1 C3435T基因比例〔n(％),n=80〕

2.2HP陽(yáng)性胃潰瘍患者不同基因型對(duì)抗HP治療效果的影響 觀察組患者中TT基因型患者經(jīng)三聯(lián)療法治療后HP陽(yáng)性率及耐藥率較高(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 HP陽(yáng)性胃潰瘍患者基因型對(duì)抗HP治療效果的影響〔n(％)〕

3 討 論

MDR1基因位于人體第7號(hào)染色體上，其編碼的P-糖蛋白屬于ABC蛋白家族的一員。P-糖蛋白具有調(diào)節(jié)細(xì)胞跨膜運(yùn)動(dòng)及物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的功能，可將藥物從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞外，從而降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，使細(xì)胞獲得耐藥性〔4〕。P-糖蛋白不僅可在正常組織中表達(dá)，同時(shí)也可在腫瘤組織中表達(dá)，并發(fā)揮不同的生理功能。MDR1基因多態(tài)性可影響P-糖蛋白表達(dá)水平，從而影響物質(zhì)代謝及機(jī)體藥代動(dòng)力學(xué)水平。相關(guān)研究指出〔5〕，P-糖蛋白在細(xì)胞內(nèi)可作為細(xì)胞底物，在體內(nèi)藥物處置、轉(zhuǎn)運(yùn)及吸收過(guò)程中發(fā)揮重要作用，從而影響這些藥物在胃腸道中的吸收及腎臟中的排泄。同時(shí)，MDR1基因多態(tài)性可影響P-糖蛋白生理學(xué)特征，導(dǎo)致P-糖蛋白在機(jī)體中過(guò)表達(dá)，導(dǎo)致機(jī)體正常生理代謝水平受影響，并引起各種疾病。謝偉東〔6〕認(rèn)為MDR1基因多態(tài)性可導(dǎo)致P-糖蛋白生理活性發(fā)生變化，從而增加機(jī)體耐藥性。

本研究結(jié)果顯示，在HP陽(yáng)性胃潰瘍患者體內(nèi)MDR1 C3435基因發(fā)生顯著突變，且這種突變可增強(qiáng)機(jī)體耐藥性，影響抗HP治療的效果。研究認(rèn)為〔7〕，引起機(jī)體基因突變的因素較多，包括環(huán)境、機(jī)體自身免疫失衡及微生物等，當(dāng)機(jī)體感染HP后，體內(nèi)抗原反應(yīng)增強(qiáng)，從而促進(jìn)機(jī)體大量釋放各種炎癥因子及細(xì)胞因子，并導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而進(jìn)一步加強(qiáng)炎癥反應(yīng)，使得機(jī)體免疫系統(tǒng)失衡，并引起機(jī)體一系列的病理生理變化，而基因突變就是其中一種。錢(qián)春野等〔8〕采用PCR測(cè)定不同基因型胃潰瘍患者M(jìn)DR基因多態(tài)性，結(jié)果顯示HP陽(yáng)性胃潰瘍患者TT基因型比例較高，且患者胃癌發(fā)生率較高，本研究結(jié)果與錢(qián)春野等〔8〕研究結(jié)果一致，表明MDR1 C3435T基因型可影響HP陽(yáng)性胃潰瘍患者三聯(lián)療法治療效果。

4 參考文獻(xiàn)

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