染色體12p13 rs12425791多態性與老年人血脂代謝的相關性

馬春林 謝娟娟 宋旭津 陳 清 蘇 莉 古 聯

(廣西中醫藥大學第一附屬醫院，廣西 南寧 530023)

缺血性腦卒中是一種多基因復雜疾病，而血脂異常是缺血性腦卒中最常見的危險因素之一，全基因組關聯研究(GWAS)發現染色體12p13上NINJ2基因附近的遺傳多態性rs12425791與缺血性腦卒中的關聯達到GWAS顯著性水準〔1〕。rs12425791被認為是很有希望的缺血性腦卒中的易感遺傳變異。本研究旨在分析GWAS支持的遺傳變異rs12425791與老年人血脂代謝的相關性。

1 對象與方法

1.1對象 2009年7月至2011年6月期間，在廣西中醫藥大學第一附屬醫院體檢中心進行健康體檢的60歲以上老年人，共143例。其中，男102例、女41例，平均年齡(70.32±8.56)歲。排除有腦卒中、腦動脈瘤、阿爾茨海默病、癡呆、帕金森病等神經精神疾病病史者。研究對象均知情同意，無親緣關系。經HWE檢驗rs12425791基因型在143例老年體檢者的頻數分布符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說明所應用的抽樣群體適合于遺傳分析。

1.2標本采集及血脂檢測 于體檢當日上午空腹抽取外周血液標本5 ml，分為抗凝血和非抗凝血。抗凝血置于-4℃保存，并于3 d內提取血液基因組DNA。將非抗凝管血進行血脂水平檢測，采用日立 7600全自動生化分析儀來檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)水平。血脂異常：根據中國成人血脂異常診斷標準〔2〕，TC≥6.22 mmol/L為TC升高，TG≥2.26 mmol/L為TG升高，LDL≥4.14 mmol/ L為LDL升高，HDL<1.04 mmol/L為HDL降低。

1.3DNA提取及基因分型 采用天根科技(北京)有限公司生產的血液基因組DNA提取試劑盒〔TIANamp Blood DNA Kit(離心柱形)〕提取血液基因組DNA，試劑盒目錄號為DP318DNA，按照產品說明書所述步驟提取血液基因組DNA。將提取后的DNA分裝為3管，置于-20℃保存備用。使用美國應用生物系統(ABI) 公司生產的ABI7500 Fast 實時熒光定量PCR儀TaqMan SNP基因分型試劑盒〔試劑盒包括2×通用PCR預混試劑Universal PCR Master mix (無AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型試劑Genotyping Assay Mix〕，運用TaqMan MGB探針等位基因分型技術進行rs12425791遺傳多態性的基因分型。PCR反應體系的總體積為10 μl，包含：基因組DNA，1.00 μl ；無核酸H2O，3.75 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl。PCR反應條件為：預變性95℃ 10 min，變性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，變性以及退火程序循環43次。對實驗操作者進行設盲，使其在進行基因分型實驗操作時不知道標本的病例/對照狀態；每次96孔PCR反應板均設置2個空白對照、并設置3個隨機重復樣本作為陽性對照；隨機抽取總檢測樣本的5％做盲法重復測定，測定結果一致率達100％。

1.4統計學方法 運用SPSS16.0軟件進行統計學分析，組間比較行χ2和t檢驗。

2 結 果

2.1不同rs12425791基因型老年人的血脂水平比較 G/G基因型攜帶者與(G/A+A/A)組在TC、TG、LDL、HDL水平上的分布差異均無統計學意義(P>0.050)；G等位基因攜帶者與A等位基因攜帶者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異也均無統計學意義(P>0.050)。見表1。

2.2不同rs12425791等位基因老年人血脂異常比較 G/G基因型攜帶者與(G/A+A/A)組在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低異常率上的差異均無統計學意義(P>0.050)；G等位基因攜帶者與A等位基因攜帶者在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低異常率上的差異也均無統計學意義(P>0.050)。見表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂水平比較

表2 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂異常率比較〔n(％)〕

3 討 論

多年來，國內外學者進行了有關易感基因遺傳多態性與血脂異常的相關性，以探討遺傳因素對血脂異常的影響。近期Kornfeld等〔3〕報道在非糖尿病人群中STAT5B基因的遺傳變異rs8082391和rs8064638與血清TC和LDL水平顯著關聯，Kiyomi等〔4〕報道APOA4基因360Hs等位基因與TG升高和HDL降低發生率顯著關聯；而國內張明明等〔5〕報道固醇酯轉運蛋白(CETP)基因D442G突變與高膽固醇血癥顯著相關，而何美霞等〔6〕報道IL-6 -634 CG及GG 基因型和G 等位基因攜帶者具有高脂血癥易感性。

近兩年來，各國學者進行了多個有關于rs12425791遺傳多態性與缺血性腦卒中的關聯研究，但研究結果不一致〔7～9〕。NINJ2基因編碼ninjurin2蛋白，ninjurin2是一種嗜同種的與基質金屬蛋白酶相互作用的細胞-細胞黏附分子〔10〕，在人類骨髓、外周白細胞、肺和淋巴結中高表達，但目前NINJ2基因對缺血性腦卒中的功能作用在很大程度上仍是不清楚的，NINJ2基因遺傳變異作用于缺血性腦卒中的功能機制值得探索。本文探索NINJ2基因附近的遺傳變異rs12425791與缺血性腦卒中危險因素的相關性，而rs12425791與血脂代謝的數量性狀和質量性狀的相關性研究目前尚未見文獻報道，本研究表明染色體12p13上的遺傳變異rs12425791與血脂代謝的數量性狀和質量性狀均無顯著關聯。本研究提示，rs12425791遺傳多態性可能與血脂代謝無關聯，NINJ2基因可能不是通過影響血脂代謝來作用于缺血性腦卒中的病因機制的，但還有待于更大樣本量的同類研究來驗證。

4 參考文獻

1Ikram MA，Seshadri S，Bis JC,etal.Genome wide association studies of stroke〔J〕.N Engl J Med,2009；360(17):1718-28.

2中國成人血脂異常防治指南制訂聯合委員會.中國成人血脂異常防治指南〔J〕.中華心血管雜志，2007；35(5)：392.

3Kornfeld JW，Isaacs A，Vitart V,etal.Variants in STAT5B associate with serum TC and LDL-C levels〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2011；96(9):E1496-501.

4Kiyomi V，Bsc O，Suchi E,etal.APOA4 polymorphism as a risk factor for unfavorable lipid serum profile and depression：a cross-sectional study〔J〕.J Invest Med,2011；59(6):966-70.

5張明明，帖彥青，馬 倩，等.CETP基因D442G突變與高膽固醇血癥的相關性.中國老年學雜志，2011；31(14)：2621-4.

6何美霞，張明明，劉 瓊，等.白細胞介素-6基因多態性與高脂血癥的相關性〔J〕.中國老年學雜志，2011；1：23-5.

7Failure to validate association between 12p13 variants and ischemic stroke〔J〕.N Engl J Med,2010；362(16):1547-50.

8Matsushita T，Umeno J，Hirakawa Y,etal.Association study of the polymorphisms on chromosome 12p13 with atherothrombotic stroke in the Japanese population〔J〕.J Hum Genet,2010；55(7):473-6.

9Ding H，Tu X，Xu Y,etal.No evidence for association of 12p13 SNPs rs11833579 and rs12425791 within NINJ2 gene with ischemic stroke in Chinese Han population〔J〕.Atherosclerosis,2011；216(2):381-2.

10Zhang S，Dailey GM，Kwan E,etal.An MMP liberates the Ninjurin A ectodomain to signal a loss of cell adhesion〔J〕.Genes Dev,2006；20(14):1899-910.