IL-24、VEGF表達對腦膠質(zhì)瘤惡性程度的判斷價值

李光宗

膠質(zhì)瘤是1種富含血管的惡性腫瘤，血管的生成有利于腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是血管內(nèi)皮細胞特異性的肝素結(jié)合生長因子，可在體內(nèi)誘導(dǎo)新血管的形成，是目前已知最強的促血管生成的因子[1]。自1990年Folkman理論形成以來，關(guān)于VEGF的研究逐漸增多，認為其表達與惡性腫瘤的惡性程度有關(guān)[2]。但在對白細胞介素-24(interleukin-24，IL-24)與 VEGF 在人腦膠質(zhì)瘤中表達以及與腫瘤惡性程度的關(guān)系報道較少。本研究針對人膠質(zhì)瘤中 IL-24 和 VEGF 的表達以及它們與膠質(zhì)瘤組織惡性程度的相關(guān)性進行探討，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集 2010 年1-月2013年1月在我院神經(jīng)疾病中心手術(shù)切除的石蠟包埋標本40 例，經(jīng)病理學(xué)證實為膠質(zhì)瘤，其中男性30例，女性10 例，年齡18～67歲，平均(35.7±2.4)歲。按WHO(2000年)膠質(zhì)瘤分類、分級標準進行分類、分級：低級別膠質(zhì)瘤(Ⅰ，Ⅱ級)19 例，包括星形細胞瘤7例(Ⅰ級)和少枝膠質(zhì)瘤12例(Ⅱ級)；高級別膠質(zhì)瘤(Ⅲ，Ⅳ級)21例，其中退變型星形細胞瘤12 例(Ⅲ級)，膠質(zhì)母細胞瘤9例(Ⅳ級)。所有病例術(shù)前均未接受放、化療。另選正常腦組織40例，來源于腦外傷后行內(nèi)減壓術(shù)的切除標本，其中男性28例，女性12例，年齡31～57歲，平均(38.5±3.6)歲。術(shù)后標本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，做4 μm 厚連續(xù)切片4張，其中1張作為常規(guī)HE染色，用于重新確定病理結(jié)果，其余做免疫組織化學(xué)染色。

1.2 試劑

IL-24兔抗人單克隆抗體及VEGF兔抗人多克隆抗體均購自武漢博士德試劑公司，SABC試劑盒購自武漢亞法試劑公司，其他試劑由本院病理科提供。

1.3 檢測方法

采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測40例腦膠質(zhì)瘤標本和 40 例非瘤腦組織中 IL-24、VEGF蛋白表達和腫瘤內(nèi)微血管密度(intratumoral mi-crovessel density，IMVD)，CD34 標記腫瘤組織血管內(nèi)皮細胞。在200倍顯微鏡下尋找微血管密集區(qū)，取高倍視野5個，行微血管計數(shù)(microvessel count，MVC)測定腫瘤血管的形成，計數(shù)血管總數(shù)后取均值為IMVD[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 腫瘤 MVD 的表達

隨著腫瘤分級的升高 MVD 呈上升趨勢。高、低級別膠質(zhì)瘤之間的 MVD比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，高、低級別膠質(zhì)瘤與非瘤腦組織之間的 MVD比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=43.23，P<0.05)，見表1。

表1 腫瘤MVD、IL-24及VEGF在非瘤組織及膠質(zhì)瘤組織中的表達情況(例，%)

2.2 IL-24 在膠質(zhì)瘤中的表達

IL-24 蛋白在非瘤組織及低級別的膠質(zhì)瘤細胞中呈高水平表達；而在高級別的膠質(zhì)瘤細胞中，呈低水平表達。χ2檢驗結(jié)果顯示，IL-24 的陽性表達率隨著腫瘤分級的升高呈下降趨勢，并且染色強度逐漸減弱，即Ⅰ級>Ⅱ級>Ⅲ 級>Ⅳ 級(χ2=8.174，P<0.05)，見表 1。Spearman 等級相關(guān)分析顯示，IL-24 表達與病理組織學(xué)分級呈顯著負相關(guān)(γ=-0.416，P<0.05)。

2.3 VEGF 在膠質(zhì)細胞瘤中的表達

免疫組織化學(xué)染色顯示 VEGF 蛋白在高級別膠質(zhì)瘤的瘤細胞胞質(zhì)中呈高表達，在低級別膠質(zhì)瘤呈低水平表達；而非瘤腦組織中無 VEGF 表達。χ2檢驗結(jié)果顯示，VEGF的陽性表達率隨著腫瘤分級的升高呈上升趨勢，并且染色強度逐漸增強，即Ⅰ級<Ⅱ級<Ⅲ級<Ⅳ級(χ2=12.221，P<0.05)，見表1。Spearman 等級相關(guān)分析顯示，VEGF表達與病理組織學(xué)分級呈顯著正相關(guān)(γ=0.524，P<0.05)。

2.4 IL-24、VEGF 表達與IMVD的關(guān)系

IL-24、VEGF陽性表達與陰性表達的IMVD比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表 2。

表2 IL-24和VEGF在膠質(zhì)瘤中表達與IMVD的關(guān)系

3 討論

膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤，廣義是指所有神經(jīng)上皮來源的腫瘤，而組織病理學(xué)上則狹義的指來源于各類角質(zhì)細胞的腫瘤[4-5]。在目前的醫(yī)療水平下，腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后還是不容樂觀，惡性膠質(zhì)瘤患者更是如此。膠質(zhì)瘤富含血管，在惡性膠質(zhì)瘤中，血管分布更是廣泛，對腫瘤的生長及擴散發(fā)揮重要作用。在常規(guī)治療效果欠佳的前提下，抑制血管生成是與傳統(tǒng)治療方法不同的新的治療策略，是眾多研究中心的熱點話題。

血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是研究較多的一類因子，屬血小板源性生長因子超家族成員之一。VEGF通過與細胞膜上的受體結(jié)合，介導(dǎo)細胞內(nèi)酪氨酸激酶磷酸化而發(fā)揮一系列的生理功能，通過與其特異性的受體結(jié)合而發(fā)揮多中心生物學(xué)效應(yīng)[6]。國內(nèi)研究顯示VEGF在膠質(zhì)瘤血管生成中作用顯著，而腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移也主要依靠血管，VEGF與腫瘤生長和轉(zhuǎn)移等特性密切相關(guān)[7-8]。本研究表明高級別膠質(zhì)細胞瘤 VEGF 表達水平和 IMVD 均高于低級別膠質(zhì)細胞瘤，低級別膠質(zhì)細胞瘤 VEGF 表達水平和 IMVC顯著高于非瘤腦組織組。膠質(zhì)細胞瘤中VEGF總表達率為 67.5%(27/40)，明顯高于非瘤腦組織，而且 VEGF 表達與 IMVC 有明顯相關(guān)性，說明 VEGF是促進瘤組織血管形成的重要因子，能較好地反映腫瘤微血管生成的活躍程度，與國內(nèi)研究結(jié)果一致。

IL-24是重要的抗腫瘤因子，其主要作用機制是通過抑制腫瘤血管的形成來阻止腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，同時通過調(diào)動機體的免疫系統(tǒng)分泌更多細胞因子抑制腫瘤細胞的生長，誘導(dǎo)腫瘤細胞盡快凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。IL-24 的表達在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用，且與腫瘤惡性分化程度有關(guān)。Pan等[9]用AdVGFP/IL-24轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞patu8988，并檢測CD34和VEGF，發(fā)現(xiàn)兩者表達下降，腫瘤血管生成明顯減少。肺腫瘤中MDA-7的過表達影響了血管生成調(diào)節(jié)因子，導(dǎo)致血管內(nèi)皮生長因子減少，影響血管生成，故IL-24可能具有體內(nèi)抗血管生成活性。Kaliberova等[10]曾利用IL-24聯(lián)合藥物治療腦膠質(zhì)細胞瘤，發(fā)現(xiàn)治療效果遠遠優(yōu)于兩者的單獨使用。本研究結(jié)果顯示： 膠質(zhì)瘤中 IL-24 蛋白表達總陽性率為52.5%(20/40)，Ⅰ、Ⅱ級與Ⅲ、Ⅳ級的腫瘤之間存在明顯差異。膠質(zhì)細胞瘤中 IL-24 蛋白表達與膠質(zhì)細胞瘤病理組織學(xué)分級呈顯著性負相關(guān)，并且染色強度逐漸減弱，其陽性表達率隨著腫瘤分級的升高呈下降趨勢，而膠質(zhì)細胞瘤中 VEGF 蛋白的表達則相反，提示IL-24 在膠質(zhì)細胞瘤中的過量表達可能具有下調(diào)VEGF 的表達水平，從而抑制腫瘤生長。

綜上所述，IL-24 在膠質(zhì)細胞瘤中抑制腫瘤生長的機制可能與下調(diào) VEGF 的表達水平有關(guān)。IL-24、VEGF 蛋白存在于人腦膠質(zhì)瘤細胞中，與腫瘤血管生成之間具有良好相關(guān)性，其表達水平可作為判斷膠質(zhì)細胞瘤惡性程度的重要生物學(xué)指標，其具體的作用機制及潛在的應(yīng)用價值還有待于進一步研究。

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