KAI1及CD44V6在胃癌中的表達及意義

王 武 謝金標 楊天寶 盧輝山 張 捷

KAI1基因作為抑癌基因，CD44V6作為粘附分子，已被證明與多種惡性腫瘤的發生、發展、侵襲轉移相關。本研究利用免疫組化技術檢測KAI1、CD44V6蛋白的表達，旨在探討兩者與胃癌的臨床病理特征的關系及其相互關系，為在分子水平更準確地判斷腫瘤的進展提供新的依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

所有病例選自福建醫科大學附屬協和醫院2006年間手術切除且資料完整、診斷明確的原發性胃癌病例，共61例，20例距離腫瘤邊緣約10 cm的切緣作為正常組織對照。患者術前均未經放療和化療，術后病理證實為腺癌，組織學分類明確。組織塊保存完好，標本經甲醛固定，石蠟包埋，行4 μm連續切片。61例胃癌患者中男性43例，女性18例，年齡25～79 歲。年齡>60歲28例，年齡≤60歲33例。高分化、中分化癌36例，低分化癌25例。無淋巴結轉移21例，伴淋巴結轉移40例。浸潤未超過漿膜層(T1+T2)16例，浸潤超過漿膜層(T3+T4)45例。TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期20例， Ⅲ～Ⅳ期41例。

1.2 試劑與方法

鼠抗人CD44V6單克隆抗體(MAB-0038)購自福州邁新生物公司，鼠抗人KAI1單克隆抗體(SC-10722)購自北京中杉生物公司，工作液濃度為1∶150，即用型免疫組化超敏S-P試劑盒均購自福州邁新生物公司。免疫組化采用標記的鏈霉素抗生物素蛋白-生物素免疫染色(Streptavidin-Peroxidase，SP)方法，采用PBS代替一抗作空白對照，己知陰性切片作陰性對照，已知陽性切片作陽性對照。

1.3 結果判斷

KAI1蛋白主要定位于細胞胞膜及胞質，陽性細胞呈明顯棕黃色或棕褐色； CD44V6蛋白主要定位于細胞胞膜及胞質。陰性對照為PBS代一抗。選擇5個以上高倍(×400)視野，計數不少于500個細胞。根據染色程度及染色細胞百分率進行分析評分，陽性細胞百分率<30%為0分， 30%～70%為1分，>70%為2分；腫瘤基本不著色為0分，色淺為1分，色深為2分。計算兩者評分之和，以得分0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為強陽性(++)。

1.4 統計學方法

采用χ2檢驗組間差異的顯著性，指標間的相關關系用spearman相關分析，采用SPSS 13.0 軟件進行統計學處理。

2 結果

2.1 KAI1蛋白及CD44V6蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達

KAI1在癌旁正常胃組織中的陽性表達率(+～++)為 90.0%(18/20)。KAI1在胃癌組織中的陽性表達率(+～++)為 29.5%(18/61)，明顯低于在癌旁正常胃組織中的表達，差異有統計學意義(P<0.01)。

CD44V6在癌旁正常胃組織中的陽性表達率(+～++)為 5.0%(1/20)。CD44V6在胃癌組織中的陽性表達率(+～++)為 65.6%(40/61)，明顯高于在癌旁正常胃組織中的表達，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2 KAI1及CD44V6蛋白的表達與胃癌臨床病理特征的關系

KAI1蛋白及CD44V6蛋白的表達與年齡、性別無關(P>0.05)；與漿膜是否受侵犯、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期相關 (P<0.05)。見表1。

表1 KAI1及CD44V6在胃癌中的表達及其與臨床病理特征的關系/例

2.3 KAI1與CD44V6蛋白表達的關系

KAI1陰性表達的43例病例中，CD44V6陽性表達32例(74.4%)，而18例KAI1的陽性表達中，CD44V6陽性表達8例(44.4%)。經統計學處理，兩者差異具有顯著性意義(χ2=5.0499，P<0.05)，提示兩者間存在相關性，其負相關的密切程度為γ=-0.363。

3 討論

KAI1基因是1995年由Dong等[1]采用人類特異的Alu重復順序介導的PCR技術從人前列腺癌雜交細胞AT6.1中的11號染色體克隆出的腫瘤轉移抑制基因。KAI1基因轉錄編碼的蛋白質與已知的CD82結構相同，CD82是1種細胞膜糖蛋白，是4跨膜超家族(TM4SF)成員之一，具有4個高度保守疏水的跨膜結構域和1個大的細胞外N端糖基化結構域[1]。KAI1對腫瘤轉移的抑制作用可能與其對細胞運動、轉移和增生的影響、對新生血管形成的影響及調節細胞的粘附有關。TM4SF蛋白不僅能夠調節異型粘附，還具有促進同型粘附的作用。研究發現KAI1/CD82和其它TM4SF分子可與整合素形成復合體，從而調節整合素的粘附功能，并影響整合素介導的細胞遷移[2]。TM4SF分子中一些成員如CD9、 CD63、 CD61、CD82之間可相互交聯，還可與人類白細胞抗原DR(human leukocyte antigen-DR，HLA-DR)復合體和非常晚出現抗原1(very late antigen-1，VLA-1)組成四分子交聯網，促進細胞表面的蛋白定位，在信號傳導、細胞粘附及決定細胞運動方式等方面起著重要作用[3]。Liu等[4]發現轉染KAI1質粒的大腸癌細胞同質性粘附能力高于對照組，異質性粘附及侵襲能力明顯低于對照組。Jee等[5]研究發現KAI1蛋白通過Src激酶(Src kinase)介導的細胞內信號傳導途徑促進細胞的同質性粘附，抑制腫瘤的轉移。Odintsova等[6]研究發現KAI1可與EGF受體相互作用，下調EGF與相應受體的結合，致使EGF誘導的信號傳導迅速衰減，上皮細胞的板狀偽足的伸展和細胞的遷移明顯受抑制，從而抑制新生血管的形成，最終抑制腫瘤的轉移。Zheng等[7]研究發現，KAI1在正常胃黏膜中表達顯著高于胃異型增生和胃癌。KAI1表達與胃癌浸潤深度、轉移、Lauren分型、生長方式和組織學分型相關，而與腫塊大小、Borrmann分型和TNM分期無關。推測KAI1的缺失表達在胃癌的發生、進展中起著重要作用，可以作為預測胃癌進展的客觀有價值的指標。Tsutsumi等[8]研究發現KAI1蛋白在正常胃上皮細胞中高表達，在胃原發癌中低表達。KAI1蛋白的表達與年齡、性別、腫瘤部位無關，而與胃癌組織學類型、腫瘤分期、淋巴結轉移、遠處轉移有關。KAI1陰性表達的患者在總體生存率方面較KAI1陽性表達的患者預后差，但是KAI1的缺失表達并不是獨立性的預后因素。我們的研究與Tsutsumi等的研究結果相似，提示KAI1的表達下調可能與胃癌細胞的分化不良有關，KAI1蛋白在胃癌的發生、發展和浸潤轉移中起抑制作用，KAI1蛋白的表達下調導致胃癌更具有惡性侵襲性，更易于發生轉移，因此， KAI1蛋白可作為判斷胃癌生物學行為的指標。

CD44分子是CD44基因的表達產物，是1種細胞表面的跨膜糖蛋白，是細胞的粘附分子之一，含有變異型V6外顯子的CD44變異體，其肽鏈位于細胞外區靠近跨膜區部位能與層粘連蛋白和IV型膠原蛋白結合。本研究結果顯示，CD44V6主要定位于細胞胞膜及胞質上，在胃癌中的表達率為65.6%，顯著高于其在正常胃組織中的表達(P<0.01)，這與孫喜文等[9]研究結果相近。孫喜文等[9]研究發現，胃癌原發灶CD44V6陽性表達率為62%，Ⅲ-Ⅳ期胃癌CD44V6陽性表達率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期，癌組織侵及漿膜層者的CD44V6陽性率明顯高于未侵及漿膜層者，淋巴結轉移組CD44V6的陽性率明顯高于淋巴結未轉移組，認為CD44V6表達強度與胃癌的浸潤深度、淋巴結轉移及病期進展有關，其陽性預示胃癌具有更強的侵襲、轉移能力，容易向周圍組織擴散。CD44V6的出現改變了腫瘤細胞表面粘附分子的構成和功能，使腫瘤細胞的侵襲與轉移能力增強。CD44V6的過度表達可使腫瘤細胞牢固地錨定在宿主細胞基膜及細胞外間質中，形成穩定的侵襲或轉移；而CD44V6的過度表達又使得腫瘤細胞周圍的透明質酸濃度上調，細胞間質的高滲狀態促使其吸收水分，造成細胞外間質的致密結構被破壞，促使腫瘤細胞向周圍侵襲轉移[10]。CD44V6在腫瘤細胞上的過度表達，使得腫瘤細胞模擬淋巴細胞的“歸巢”過程，與遠隔部位的血管及淋巴管內的受體結合，導致腫瘤細胞的淋巴結轉移及遠處轉移[11]。因此CD44V6可作為判斷胃癌生物學行為的指標。

KAI1蛋白及CD44V6在胃癌中表達具有負相關性，表明KAI1蛋白及CD44V6在胃癌的發生、發展和侵襲轉移中起相互制約的作用。

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