炎癥性腸病患者可溶性髓系細胞表達觸發受體-1與環氧化酶-2的表達及其意義

邢亞威 楊大運 劉春玉

(河北醫科大學附屬第四醫院感染性疾病科，河北 石家莊 050011)

炎癥性腸病(IBD)包括潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病(CD)。盡管多年來對IBD進行了大量的研究, 但其發病機制尚未完全明確。目前大多學者認為腸壁黏膜免疫調節異常、持續腸道感染、腸壁黏膜屏障缺損、遺傳和環境等因素共同參與該疾病的發生發展。其中細胞因子和炎癥介質參與IBD的免疫反應和炎癥過程，是近年來的研究熱點之一。本實驗通過測定炎癥性腸病患者腸黏膜可溶性髓系細胞表達觸發受體(sTREM)-1與環氧化酶-2(COX-2)水平的表達并觀察與疾病活動度的關系，探討兩者在IBD發病機制中的作用，為臨床治療及研究提供一些思路。

1 材料與方法

1.1研究對象 選擇2010年1月至2011年2月我院門診及住院治療的50例IBD患者，其中UC患者42例，CD患者8例。所有病例均經臨床、內鏡及組織病理學檢查，符合2007年濟南會議消化病學分會炎癥性腸病協作組制定的診斷標準〔1〕。UC病人根據患者病情進行分級：輕度 15例，中度20例，重度7例。CD患者8例。正常對照組20例，為結腸息肉或體檢者。

1.2標本采集 IBD患者在行結腸鏡檢查時，取其病變明顯處組織2～3塊，對照組選距息肉10 cm處取活檢，或體檢處正常組織。

1.3COX-2及sTREM-1的測定

1.3.1sTREM-1采用流式細胞計數 試劑購自美國Santa Cruz Biotechnology公司(克隆號98z12,lot#B1210)。流式細胞儀檢測條件及參數：采用美國Beckman Coulter公司生產的Epics-XLⅡ型流式細胞儀，激發光源為15 mW氬離子激光器，激發波長為488 nm，應用Expo 32 ADC進行免疫熒光數據分析。檢測前以flow-checkTMFluorpheres(10 μm)熒光微球(REF 6605359.Beckman Coulter,Inc.Fullerton,CA 92835.)作為標準樣品調整儀器CV值在2%以內。以x-mode值代表TREM-1蛋白表達量。

1.3.2COX-2表達檢測 COX-2切片除作常規HE染色外，余作免疫組化染色，即石蠟切片脫蠟水化，采用枸櫞酸-微波-SP法，DAB顯色，蘇木精復染，具體操作按SP試劑盒說明書進行。用PBS替代一抗作為陰性對照，余步驟相同。兔抗人COX-2多克隆抗體均購自武漢博士德生物工程公司，抗體工作濃度為1∶50。 S-P試劑盒為美國MAXIM公司產品，購自福州邁新公司。染色結果判斷： COX-2蛋白以細胞質或核膜上出現棕黃色為陽性細胞。每張切片在400倍顯微鏡下隨機選定10個視野，采用全自動圖像分析儀，HPIAS-2000圖像分析軟件，分別掃描記錄陽性細胞表達百分數，取其平均數。

2 結 果

2.1不同組別腸黏膜組織COX-2及sTREM-1 在正常對照組、CO和UC中COX-2的結果分別為61.81±20.10，200.42±20.33和209.28±9.62，sTREM-1的結果分別為268.94±4.75、541.48±153.63 和487.54±141.59；sTREM-1和COX-2在CD組、UC組及正常對照組三組之間的差異有統計學意義(F=8.584，P<0.05；F=147.714，P<0.05)；任何兩組之間sTREM-1的表達差別有顯著性意義(P<0.05)，正常對照組與CD組、UC組相比COX-2的表達有顯著性差異(P<0.05)。

2.2不同組別sTREM-1、COX-2的表達與病情及內鏡分級的關系 UC患者sTREM-1在不同的病情分級及不同內鏡分級中表達有顯著性差異(F=19.055，P<0.05；F=34.119，P<0.05)，COX-2在不同的病情分級及不同內鏡分級中表達亦有顯著性差異(F=54.617，P<0.05；F=58.608,P<0.05)。見表1。

表1 UC患者病情、內鏡分級與sTREM-1和COX-2的表達比較±s)

2.3sTREM-1與COX-2表達的相關性 結腸黏膜sTREM-1和COX-2的表達呈正相關(r=0.642,P<0.05)。sTREM-1的表達水平與患者病情程度及內鏡分級呈正相關(r=0.945,P<0.05；r=0.944,P<0.05)；COX-2的表達水平與患者病情程度及內鏡分級亦呈正相關(r=0.944,P<0.05；r=0.944,P<0.05)。

3 討 論

IBD是一種病因尚不明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括UC和CD。目前認為其發病機制除與環境、遺傳因素的變化有關外，亦與腸黏膜免疫調節異常，持續腸道感染，免疫應答及炎癥因子的改變有關。

髓樣細胞觸發受體是一種新型的炎癥激發受體，其介導的信號轉導通路在炎癥反應的發生和級聯放大中起重要作用。sTREM-1是TREM-1的可溶形式。有研究表明〔2〕TREM-1參與了炎性反應的級聯放大過程，細菌的某些成分可以上調細胞表面TREM-1的表達，并且能和TREM-1配體協同激活TREM-1受體向下游傳遞信號，TREM-1被激活后會誘導前炎性因子的產生并引起相關的炎癥反應。本研究發現sTREM-1在CD組、UC組的表達明顯高于對照組。sTREM-1在UC組的表達與病情的嚴重程度及內鏡分級程度明顯相關，這與Tzivras 等〔3〕的報道一致。Park等〔4〕研究亦表明，在UC患者中，其血清sTREM-1-表達增高，且腸黏膜巨噬細胞表面sTREM-1表達增高的程度與疾病的活動程度呈正相關。以上結果說明，sTREM-1可能在患者的病情中起到重要作用。同時證明sTREM-1可作為判斷UC病情進程的輔助指標。

目前認為COX-2屬誘導型酶，在炎癥狀態下，可以被多種炎性遞質和細胞因子所誘導。本研究發現UC、CD患者結腸黏膜中COX-2的表達較對照組顯著增高；UC患者COX-2的表達與病情嚴重程度及內鏡分級有關。這與國內的一些研究結果一致〔5～7〕，這些結果表明COX-2作為重要的炎癥介質參與IBD的發生和發展。但是COX-2陽性表達在腸黏膜中的作用觀點不同，COX-2的表達是炎癥過程中非特異性產物抑或是參與炎癥發生發展的關鍵因子，目前尚無定論。

4 參考文獻

1中華醫學會消化病學分會炎癥性腸病協作組.對我國炎癥性腸病診斷治療規范共識意見〔J〕.中華消化雜志，2007;27(8)：545.

2蘇龍翔，解立新.髓樣細胞表達的觸發受體-I與炎癥信號轉導的研究進展〔J〕.國際免疫學雜志,2010;3(3):165-70.

3Tzivras M, Koussoulas V, Giamarellos-Bourboulis EJ,etal.Role of soluble triggering receptor expressed on myeloid cells in inflammatory bowel disease〔J〕.World J Gastroenterol,2006;12(21):3416-9.

4Park JJ, Cheon JH, Kim BR,etal.Correlation of serum-soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1 with clinical disease activity in inflammatory bowel disease〔J〕.Dig Dis Sci,2009; 54(7):1525-31.

5苗新普,歐陽欽,韋 紅.環氧合酶一2與5一脂氧合酶在潰瘍性結腸炎黏膜中的表達及相互關系 〔J〕.中華消化病雜志,2011;31(2)：95-9.

6許春梅，董衛國，余保平, 等.低氧誘導因子-1a和環氧合酶-2蛋白在炎癥性腸病中的表達〔J〕.臨床內科雜志, 2005;22(2)：82-4.

7史永盛,霍麗娟,安麗婷.潰瘍性結腸炎患者結腸粘膜COX-2和TNF-a的表達及意義〔J〕.山西醫科大學學報, 2011;42(4)：327-9.