GFPC預處理對心肌缺血再灌注大鼠血液流變學的影響

錢國強 丁晶晶 趙國平 趙 影 楊鐵驪 張 卉 張小照

(黃淮學院護理學系，河南 駐馬店 463000)

心肌缺血再灌注損傷(MIRI)指在阻斷冠狀動脈血流一定時間后，缺血的心肌在恢復循環后的再灌注期出現的心臟功能、代謝及結構上的損傷〔1〕，常見于許多心血管疾病和手術過程中。MIRI往往伴有血液流變學指標的改變〔2，3〕，而血液流變性的改變又會進一步加重再灌注損傷的程度。此前，筆者通過觀察篩選出了當歸四逆湯的有效成分組合(GFPC)，本文旨在了解GFPC對MIRI大鼠血液流變學各指標的影響及其與NO的關系，試圖探討防治MIRI的有效機制。

1 材料與方法

1.1 動物、藥物及儀器

1.1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠32只，體重280～400 g(購自廣東省實驗動物中心，許可證號SCXK(粵)2008-0002)。實驗過程中共有2只大鼠由于麻醉或手術原因死亡，死亡率為6.3%。

1.1.2 藥物及儀器 芍藥苷、阿魏酸、甘草酸、肉桂酸均購自南京澤朗醫藥科技有限公司。NO試劑盒:購自南京建成生物工程研究所，L-NAME:美國sigma公司。血流變儀:重慶賽航SH210A。

1.2 方法

1.2.1 分組 32只雄性SD大鼠分為4組，每組8只，shame組:未經缺血再灌注處理;I/R組:SD大鼠心肌缺血30 min再灌注120 min后取材;PPC組:灌胃4 d，1次/d，最后一次于實驗前 30 min灌胃，灌胃劑量為甘草酸 50 mg/kg、阿魏酸400 mg/kg、芍藥苷 100 mg/kg、肉桂酸 400 mg/kg，心肌缺血30 min再灌注120 min取材;PPC+L組:灌胃4 d，1次/d，最后一次于實驗前30 min灌胃，灌胃劑量為甘草酸50 mg/kg、阿魏酸400 mg/kg、芍藥苷100 mg/kg、肉桂酸400 mg/kg，并于再灌注前15 min給予L-NAME(eNOS選擇性抑制劑)30 mg/kg，再灌注120 min取材。

1.2.2 血液流變學的測定 取材前，腹主動脈取血約10 ml，其中5 ml放入抗凝管，應用重慶賽航血流變儀測定血液流變學指標(詳細按操作說明進行)。

2 結果

2.1 血液流變學指標 與shame組比較，I/R組全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、血細胞比容及纖維蛋白原均顯著升高(P＜0.05);與I/R組比較，PPC組全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、血細胞比容、紅細胞沉降率及纖維蛋白原均顯著降低(P＜0.05);PPC組和PPC+L組紅細胞沉降率有明顯差異(P＜0.05)。見表 1，表 2。

表1 各組高切黏度、低切黏度、血漿黏度比較(s)

表1 各組高切黏度、低切黏度、血漿黏度比較(s)

與 shame組比較:1)P＜0.05;與 I/R 組比較:2)P＜0.05

組別 高切黏度 低切黏度 血漿黏度shame 組 2.81±0.68 7.28±1.74 1.20±0.14 I/R 組 7.54±2.181) 17.82±4.531) 1.68±0.231)PPC 組 5.25±1.922) 15.61±4.222) 1.08±0.212)PPC+L 組 4.69±2.932) 13.71±7.142) 1.33±0.212)

表2 各組血細胞比容、紅細胞沉降率比較(s)

表2 各組血細胞比容、紅細胞沉降率比較(s)

與shame組比較:1)P＜0.05;與 I/R 組比較:2)P＜0.05;與 PPC 組比較:3)P＜0.05

分組 血細胞比容 紅細胞沉降率 纖維蛋白原shame 組 0.27±0.07 31.95±7.99 1.34±0.78 I/R 組 0.49±0.051) 35.70±5.03 3.34±1.271)PPC 組 0.24±0.062) 17.50±8.782) 2.31±0.512)PPC+L 組 0.29±0.15 24.30±11.692)3) 1.91±0.312)

2.2 血 清 NO 濃 度 與 shame組 〔(12.982 5±0.945 25)μmol/L〕比較，I/R 組大鼠血清 NO 含量〔(4.95±0.216 95)μmol/L〕明顯降低(P＜0.05);與 I/R 組比較，PPC 組血清 NO 含量〔(9.27±0.730 05)μmol/L〕明顯升高(P＜0.05);與 PPC組 比 較，PPC+L組血清中 NO含量 〔(7.81±0.343 22)μmol/L〕明顯降低(P＜0.05)。

3 討論

血液流變學是研究循環血液流動性、黏稠性、凝固性、變形性的學科。血液黏性主要依賴于血細胞比容與纖維蛋白原的濃度〔4〕。本次試驗顯示，I/R組大鼠血液流變學指標高于shame組，說明IR損傷會引起血細胞壓積及纖維蛋白原增加，從而導致全血黏度、血漿黏度升高。MIRI時有大量炎癥因子聚集在微血管管腔，導致再狹窄，其機制與MVEC損傷以及NO含量降低有關。而PPC組的大鼠血液流變學指標與I/R組相比顯著降低，說明GFPC能夠改善MIRI大鼠VEC的損傷以及增加血清NO的含量。

當歸四逆湯有效成分阿魏酸主要用于治療心腦血管疾病和緩解血栓形成。其機制為阿魏酸可下調iNOS mRNA表達及iNOS的活性，激活eNOS，增加其分泌的NO，對血管內皮細胞具有保護作用，改善EC功能〔5～7〕，從而起到抗炎、保護內皮細胞的作用。本實驗綜合應用了篩選出的單體組合(GFPC)，起到了多靶點的協同作用。GFPC對MIRI的保護作用是通過激活MMVEC eNOS/NO信號通路、增強eNOS蛋白的磷酸化、調節NO生成、上調eNOS mRNA表達、降低iNOS mRNA和蛋白的表達而發揮心臟保護作用，可顯著改善血液流變學指標，這一結果與文獻報道〔8〕一致。

1 劉世平，徐彤彤.瘦素與心肌缺血/再灌注損傷關系的研究進展〔J〕.醫學綜述，2009;15(4):485.

2 張孝國，陳 章，白小紅，等.心肌缺血再灌注損傷血流變性及血小板改變的實驗研究〔J〕.四川醫學，2010;31(12):1751-2.

3 李鑫輝，黃政德，喻 嶸，等.益氣活血法對血瘀證心肌缺血再灌注損傷兔血液流變性及內皮素的影響〔J〕.2010;19(2):269-71.

4 Yan H，Baosheng DU，Yang W，et al.Effects of salidroside on hemorheology and myocardial ischemic reperfusion injury in isolated heart of rats〔J〕.Chin J Nat Med，2008;6(3):221.

5 王生鋒，歐陽靜萍，張敬芳，等.阿魏酸鈉對腫瘤壞死因子誘導人臍靜脈內皮細胞 NOS基因表達的影響〔J〕.微循環學雜志，2003;13(1):28-30.

6 王 琦，馬文格，姚霽航.阿魏酸鈉對不穩定心絞痛內皮素和一氧化氮的影響〔J〕.實用診斷與治療雜志，2007;21(6):411-2.

7 魏 彤.阿魏酸鈉對冠心病心絞痛病人內皮素、一氧化氮的影響〔J〕.醫學理論與實踐，2005;18(6):627-8.

8 Cui S，Zhu H.Myocardial ischemic reperfusion injury affected by the isozymes of nitric oxide syntnase and the I/R gene expression:experimental study〔J〕.Chin Med J，1998;78(5):27-30.