Clusterin 在肺癌中的表達及意義

申華峰 耿嘉男 李景賀 徐麗麗

(浙江省新昌縣人民醫(yī)院病理科，浙江 新昌 312500)

肺癌的預防與診治始終是臨床一大難題，最新調查顯示我國肺癌的發(fā)病率、死亡率已位于八大腫瘤之首，可能與吸煙、人口老齡化以及工業(yè)化導致的環(huán)境惡化等多種原因有關〔1〕。Clusterin 最早發(fā)現于公羊睪丸液，主要作用為促進細胞聚集，現代醫(yī)學研究表明Clusterin參與調控多種生理過程的細胞凋亡，而細胞凋亡抵抗是導致癌癥發(fā)生、發(fā)展甚至死亡的主要原因之一。將Clusterin作為膀胱癌〔2〕和腎癌〔3〕等疾病的治療及預后的分子標志物已有報道，而關于肺癌與Clusterin的研究較少。本實驗擬觀察不同類型肺癌組織Clusterin的表達及其與病理類型、分化程度和轉移等因素的關系。

1 資料與方法

1.1標本來源 選擇2011年1月至2012年12月在吉林大學第二醫(yī)院住院治療的患者。其中肺鱗癌16例，年齡43～78〔平均(61±10)〕歲；肺腺癌22例，年齡42～73〔平均(58±8)〕歲；小細胞癌10例，年齡44～69〔平均(56±9)〕歲，另取10例正常肺組織標本作為對照。所有患者在取材前均未經任何治療，均經病理診斷證實。

1.2主要試劑 鼠抗人Clusterin單克隆抗體(購自美國圣克魯斯生物技術公司)，通用型二步法免疫組化試劑盒(PV-6000)，DAB顯色劑(北京中杉生物技術有限公司)。

1.3方法 取肺部組織固定后，常規(guī)石蠟包埋、切片，切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化后微波熱修復抗原；自然冷卻后3% H2O2室溫孵育20 min阻斷內源性過氧化物酶；然后在鼠抗Clusterin單克隆抗體(1∶100稀釋) 中4℃孵育過夜；加入二抗和染色步驟嚴格按照PV-6000說明書進行，染色時隨時在顯微鏡下觀察。PBS代替一抗作為空白對照。

1.4結果判斷 胞質呈現黃色顆粒即為Clusterin蛋白陽性表達。每張切片隨機選擇5個高倍視野(每個視野陽性細胞數不少于200個)，按每張切片陽性細胞所占面積百分比及著色強度進行結果判斷。總分采用6分評分制：陽性細胞<5%為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、≥51%為3分；染色強度無著色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分；據陽性細胞所占比例得分+染色強度得分計算總分，0分為陰性(-)、1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性()、5～6分為強陽性()。

1.5統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行分析，以行×列表χ2檢驗進行各組間Clusterin蛋白陽性表達的差異分析。

2 結 果

2.1Clusterin在不同病理類型肺癌組織中的表達 Clusterin蛋白陽性染色主要位于細胞質，正常肺組織無Clusterin表達，小細胞癌Clusterin表達率僅為10%(1/10，為+)，并且該陽性病例Clusterin主要表達于腫瘤間質細胞，腫瘤細胞幾乎不表達，鱗癌中Clusterin陽性表達率為75.0%(12/16，+7例，5例)、腺癌為68.2%(15/22，+8例，7例)，小細胞癌中Clusterin的表達陽性率低(P<0.05)。而鱗癌與腺癌之間的表達無差異。

圖1 鱗癌、腺癌、小細胞癌肺組織中Clusterin的表達(免疫組化染色，×200)

2.2非小細胞肺癌Clusterin蛋白表達與臨床病理學特征的關系 中低分化病例表達高于高分化病例(P<0.05)，淋巴結轉移病例高于無轉移病例(P<0.05)，非小細胞肺癌中Clusterin表達與病理類型、年齡、性別等因素無關(P>0.05)。見表1。

表1 非小細胞肺癌Clusterin表達與臨床病理學特征的關系(n)

3 討 論

Clusterin作為內源性異源二聚體糖蛋白參與多種生理過程，包括機體老齡化進程、腫瘤發(fā)生與發(fā)展、血管損傷、糖尿病、腎臟和神經變性等，這些疾病均能導致細胞氧化應激狀態(tài)增強、促使靶蛋白非晶質聚集、增加基因組不穩(wěn)定性和提高細胞死亡率，有報道顯示以上過程均與Clusterin調節(jié)細胞凋亡、介導氧化損傷直接相關〔4〕。Clusterin mRNA的表達主要由小干擾RNAs (siRNAs)調控，即Clusterin mRNA隨siRNAs表達增加而增加，進而抑制人類癌癥細胞誘導的自發(fā)性細胞凋亡，加快細胞生長速度，降低細胞遺傳毒性和對氧化應激的敏感性〔5〕。

研究表明Clusterin在人類很多腫瘤發(fā)生時其表達改變或參與調控癌癥細胞表達，Clusterin mRNA對前列腺腫瘤發(fā)生和轉移擴散有較大影響〔6〕，其mRNA表達上調會抑制前列腺癌進程，減慢癌細胞轉移。此外不同組織學類型的子宮內膜癌中Clusterin也有不同程度的表達〔7〕；結腸癌中血小板分泌血小板反應蛋白1(TSP1)和Clusterin，二者作用于MAPK信號通路促p38MAPK磷酸化，進而刺激基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)上調導致結腸癌侵襲加劇，給藥抑制p38MAPK磷酸化，則TSP1和Clusterin分泌減少，一定程度上能抑制結腸癌細胞對正常細胞侵襲，達到治療目的。

本實驗結果說明Clusterin與肺癌特別是非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。而Panico等〔8〕利用免疫組化染色檢測早期肺腺癌中Clusterin的表達，Clusterin表達多的患者在手術治療切除腫瘤后復發(fā)率更小且生存時間更久，顯示Clusterin表達與癌癥復發(fā)率呈負相關。

4 參考文獻

1陳萬青，張思維，鄒小農.中國肺癌發(fā)病死亡的估計和流行趨勢研究〔J〕.中國肺癌雜志，2010；13(5)：488-93.

2Hazzaa SM，Elashry OM，Afifi IK.Clusterin as a diagnostic and prognostic marker for transitional cell carcinoma of the bladder〔J〕.Pathol Oncol Res，2010；16(1)：101-9.

3Sakai I，Miyake H，Takenaka A，etal.Expression of potential molecular markers in renal cell carcinoma：impact on clinicopathological outcomes in patients undergoing radical nephrectomy〔J〕.BJU Intern，2009；104(7)：942-6.

4Trougakos IP，Gonos ES.Regulation of clusterin/apolipoprotein J，a functional homologue to the small heat shock proteins，by oxidative stress in ageing and age-related diseases〔J〕.Free Radical Res，2006；40(12)：1324-34.

5Trougakos IP，So A，Jansen B，etal.Silencing expression of the clusterin/apolipoprotein j gene in human cancer cells using small interfering RNA induces spontaneous apoptosis，reduced growth ability，and cell sensitization to genotoxic and oxidative stress〔J〕.Cancer Res，2004；64(5)：1834-42.

6Blumenstein B，Saad F，Hotte S，etal.Reduction in serum clusterin is a potential therapeutic biomarker in patients with castration-resistant prostate cancer treated with custirsen〔J〕.Cancer Med，2013；2(4)：468-77.

7Ahn HJ，Bae J，Lee S，etal.Differential expression of clusterin according to histological type of endometrial carcinoma〔J〕.Gynecologic Oncol，2008；110(2)：222-9.

8Panico F，Casali C，Rossi G，etal.Prognostic role of clusterin in resected adenocarcinomas of the lung〔J〕.Lung Cancer，2012；79(3)：294-9.